蒙晓平
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 供职机构：山西医科大学法医学院更多>>
- 发文基金：年山西省研究生优秀创新项目山西省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生政治法律更多>>
- 提高SAF基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应的扩增效率
- 2013年
- 背景:血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶的含量偏高,常规聚合酶链式反应扩增不易成功。目的:探索提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区富含鸟嘌呤和胞嘧啶的DNA模板聚合酶链式反应扩增方案及优化的扩增体系。方法:提取THP-1细胞基因组DNA作为模板,通过97℃高温预变性及最佳退火温度的探索优化聚合酶链式反应的反应条件,在聚合酶链式反应扩增体系中添加不同浓度的增强剂二甲基亚砜改善反应体系。建立提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因富含鸟嘌呤和胞嘧啶的启动子区聚合酶链式反应扩增效率的方法,同时评估不同浓度二甲基亚砜对聚合酶链式反应扩增结果的影响。结果与结论:97℃高温预变性使模板DNA充分解链,同时提高退火温度至60℃,有利于提高聚合酶链式反应扩增产率;反应体系中添加2%二甲基亚砜可以提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区聚合酶链式反应产物的特异性和产率,但是鸟嘌呤和胞嘧啶含量不同对增强剂的依赖不一样。结果证实,高温预变性和较高的退火温度可以保证充分解链的模板DNA与引物特异性结合,但是DNA模板鸟嘌呤和胞嘧啶含量的不同对增强剂二甲基亚砜的依赖有差异。
- 曹锡梅梁俊红张潮万东方蒙晓平郭大玮
- 关键词：启动子鸟嘌呤胞嘧啶聚合酶链式反应
- 线粒体COX1与12SrRNA及16SrRNA基因复合扩增种属鉴定研究
- 目的:种属鉴定是法医物证检验的重要步骤，对现场提取的各种生物检材进行种属鉴定是进行其他鉴定的首要及关键环节。利用线粒体的特点，构建一种特异性好，灵敏度高，稳定性好，操作简便适用于法医学实践的扩增体系，以期解决当前法医种属...
- 蒙晓平
- 关键词：种属鉴定线粒体DNA法医学物证检验
- 文献传递
- COX1、12SrRNA、16SrRNA基因复合扩增种属鉴定研究被引量：6
- 2015年
- 目的利用线粒体的特点构建一种特异性好、灵敏度高、稳定性好、操作简便,适用于法医学种属鉴定的复合扩增体系。方法查找Gene bank上常见动物mt DNA序列,用序列比对软件,对人和动物序列进行分析,选出COX1、12SrRNA、16SrRNA区域。使用primer5和primer3(online)设计引物,COX1的引物有人类特异性,12SrRNA和16SrRNA的引物作为内参对照可以匹配人和大部分常见动物。收集人和恒河猴,猪、牛、羊、兔、鲈鱼、鲍鱼、鸭、鸡、狗、鼠11种动物的肌肉或血液样本,用Chelex-100法提取DNA,复合扩增COX1、12SrRNA、16SrRNA基因片段,琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物。结果人的样本出现三条带,分别为COX1、12SrRNA、16SrRNA的扩增产物,大小分别为202、231、395bp;11种动物出现两条带,分别为12SrRNA和16SrRNA的扩增产物,大小分别在230、395bp左右。复合扩增体系灵敏度为2.5pg,而特异性引物COX-1的灵敏度为10-8pg。结论该复合扩增体系可以明确区分人与动物,灵敏度高,可应用法医学中的种属鉴定。
- 蒙晓平白晓军梅燕曹锡梅张潮成振荆丽红郭大玮张更谦
- 关键词：法医物证学种属鉴定线粒体DNA
- 均匀设计在候选内参基因RT-qPCR实验条件优化中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨均匀设计在候选内参基因RT-qPCR实验条件优化中的应用,有助于后期实验筛选不同状态下THP-1细胞的稳定内参基因。方法以THP-1细胞cDNA为模板,cDNA模板量、引物浓度和退火温度3个因素为影响因素,应用均匀设计3因素8水平,探索影响候选内参基因RT-qPCR的扩增条件,检测不同实验条件下的扩增效果,在最优扩增条件下建立候选内参基因定量扩增的相对标准曲线,并检测扩增效率。结果通过均匀设计,完成对cDNA模板量、引物浓度和退火温度3因素8水平的实验条件优化,建立候选内参基因RT-qPCR检测的最佳组合为cDNA模板量0.5μg、引物浓度200μmol/L、退火温度55℃。结论本实验选用均匀设计优化RT-qPCR实验条件,筛选出THP-1细胞候选内参基因RT-qPCR的最优实验条件。均匀设计适合于本实验研究多因素多水平试验条件的配比。
- 曹锡梅梁俊红张潮万东方蒙晓平郭大玮
- 关键词：均匀设计RT-QPCR内参基因THP-1
