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鸡白细胞介素-6原核表达及双抗夹心ELISA方法的建立被引量：1: 2011年; 应用分子生物学技术原核表达ChIL-6,以ChIL-6重组蛋白为免疫原,按免疫程序分别制备兔抗和鼠抗IL-6重组蛋白的多克隆抗体。应用此抗体建立双抗夹心ELISA方法后,为了优化此方法本试验对该方法的最佳试验条件、标准曲线、重复性和初步应用进行确定。结果显示,经SDS-PAGE和Western-blot分析,表明ChIL-6在大肠杆菌中正确表达,为了建立检测ChIL-6的双抗夹心ELISA方法,本试验应用表达的重组蛋白制备兔抗和鼠抗多克隆抗体。建立的双抗夹心ELISA方法最佳反应条件为包被抗体的质量浓度为50mg/L,4℃过夜;酶标二抗稀释度为1∶400,37℃1h;应用该方法检测感染金黄色葡萄球菌后的ChIL-6,其结果与本实验室之前应用人的ELISA试剂盒检测的结果相似。结果表明,本试验建立的检测ChIL-6的双抗夹心ELISA方法可用于临床。; 李卫彭俊平谷长勤胡薛英张万坡程国富; 关键词：鸡白细胞介素-6 原核表达

樱桃谷鸭CD3ε胞外区多肽的原核表达、抗体制备及初步应用: 本研究通过原核表达樱桃谷鸭CD3ε胞外区，制备兔抗鸭的CD3ε多克隆抗体，利用制备的抗体建立一种用于测定或分选出鸭的CD3+T细胞亚群的方法，由于鸭瘟病毒主要侵害的是上皮细胞和淋巴细胞，运用此方法为阐明鸭瘟的致病机理提供...; 李卫; 关键词：鸭瘟病毒原核表达致病机理; 文献传递

α肿瘤坏死因子的研究进展被引量：44: 2010年; α肿瘤坏死因子(TNF-α)是一种由多核巨细胞产生的有广泛生物学活性的细胞因子,具有调节机体的免疫功能和导致肿瘤细胞坏死的特性。随着对TNF-α生物学活性研究的深入,TNF-α与各种疾病的关系越来越紧密,在许多疾病的研究中都将其作为检测的重要指标。论文通过对TNF-α的基因结构、在组织中的分布、生物学功能和检测方法的叙述,为有关TNF-α在生物学和医学方面更深入的研究提供参考依据。; 李卫刘佳白家媛谷长勤张万坡程国富胡薛英; 关键词：Α肿瘤坏死因子

樱桃谷鸭CD3ε胞外区多肽原核表达、抗体制备及初步应用被引量：1: 2010年; 应用PCR技术从樱桃谷鸭总RNA中克隆CD3ε基因ORF序列（DuCD3ε）,通过生物学软件分析,切除信号肽和跨膜区,将胞外区cDNA（DuCD3ε）插入表达载体pET-28a,构建了E.coliBL21（pET-28a/DuCD3ε）原核表达系。经IPTG诱导表达、蛋白纯化,制备兔抗DuCD3ε多克隆抗体。应用免疫组织化学SABC方法在樱桃谷鸭外周血液涂片上进行初步应用。结果显示,DuCD3ε胞外区序列长252 bp,编码83个氨基酸。SDS-PAGE和Western-blot分析证实重组DuCD3ε（rDuCD3ε）在BL21大肠杆菌中表达,表达蛋白相对分子质量约为14 000,经3次免疫后,通过间接ELISA测定兔抗rDuCD3ε蛋白多克隆抗体效价为1：12 800。在鸭瘟病毒感染后不同时间,对照组CD3＋T淋巴细胞数占淋巴细胞总数的百分比为28%~47%,试验组CD3＋T淋巴细胞百分比为32%~77%,在感染后1~3 d外周血液中CD3＋T淋巴细胞比值急剧升高,3 d以后比值缓慢下降。结果表明,本试验成功表达CD3ε胞外区多肽,制备的兔抗樱桃谷鸭CD3ε多克隆抗体可用于鸭外周血中CD3＋T淋巴细胞标记染色,具有较好的特异性。; 李卫白家媛彭俊平谷长勤张万坡程国富陈敏胡薛英; 关键词：樱桃谷鸭多克隆抗体

麻鸭和樱桃谷鸭的CD3ε、CD4、CD8α基因ORF克隆及序列分析被引量：5: 2009年; 【目的】分析比较中国部分品种鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列,为研究CD3ε链、CD4和CD8α链的结构和功能及其抗体的应用提供依据。【方法】利用RT-PCR,对麻鸭、樱桃谷鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列克隆测定,应用Clustal(X1.83)和DNAstar生物学软件分别与GenBank上公布的北京鸭CD3ε(AF378704)、CD4(AF378701)和CD8α(AF378373)基因ORF序列进行序列分析。【结果】麻鸭、樱桃谷鸭、北京鸭CD3ε和CD4基因ORF序列及所编码的氨基酸同源性为99%;北京鸭和麻鸭CD8α基因ORF序列同源性为99%,与樱桃谷鸭的同源性为95%。麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序基因编码的氨基酸完全一致,与樱桃谷鸭的CD8α存在16处位点差异,其中胞外区有15个氨基酸的差异,使亲水性、抗原性以及此区域位于蛋白质表面的可能性都有明显差异。从遗传发生树得出樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列相互之间的遗传关系近;樱桃谷鸭、麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序列之间的遗传关系较远。【结论】樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列遗传变异性低,樱桃谷鸭与麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF之间具有较高遗传变异性。; 李卫白家媛许媛媛谷长勤张万坡程国富陈敏胡薛英; 关键词：CD4 CD8Α

柑桔原生质体抗寒机理及抗寒原生质体筛选培养的研究: 该试验以抗寒性不同的柑桔品种的胚性愈伤组织分离的原生质体为试材,探讨了柑桔抗寒机理,建立了在原生质体水平上鉴定抗寒性强弱的指标,并以Page桔柚(C.reticulata Blanco×C.grandis Osb.c...; 李卫; 关键词：柑桔原生质体抗寒性

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李卫