吴凯峰
- 作品数：18 被引量：12H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺炎链球菌减毒活菌疫苗
- 本发明涉及一种用于预防肺炎链球菌感染的肺炎链球菌减毒活菌疫苗，该疫苗为含有肺炎链球菌SPD_1672基因功能缺陷的D39△1672肺炎链球菌菌株的组合物，能够有效预防肺炎链球菌感染，安全性强、保护效果好、易大规模生产、具...
- 尹一兵张雪梅吴凯峰姚润庞丹
- 文献传递
- 操纵子comCDE调控肺炎链球菌转化的分子机制研究
- 2009年
- 目的:探讨操纵子comCDE对调控肺炎链球菌转化的分子机制。方法:将D39野生菌株与comE基因缺陷菌株(△comE)分别用感受态刺激因子(Competence-stimulating peptide,CSP)诱导转化,记录不同时间点的转化率,并采用FQ-PCR技术检测其comE的mRNA表达水平,并通过双向电泳及图像分析比较CSP诱导后不同时间点的蛋白质表达谱差异及野生菌株与△comE菌株的蛋白质表达谱差异。结果:D39菌株在CSP诱导后不同时间点都能发生转化,其中0 min时转化率最高,其comE的mRNA表达量在CSP诱导10 min后表达显著增加,20 min时迅速回落(P<0.05)。△comE菌株不能被CSP诱导发生转化。蛋白质组学研究显示,△comE菌株有6个蛋白较D39菌株的表达量显著增加;CSP诱导10 min时有6个蛋白表达显著增加,而在20 min时又迅速回落;二者有2个蛋白相同;有1个蛋白在加入CSP后表达显著降低。结论:基因comE的存在是CSP诱导转化必需的,CSP诱导转化可能有非comE依赖途径,而comE可能有除转化以外调控功能,且不依赖于CSP。
- 袁泰先朱兴华吴凯峰尹楠林胥文春王虹尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌双向凝胶电泳
- 肺炎链球菌减毒活菌疫苗
- 本发明涉及一种用于预防肺炎链球菌感染的肺炎链球菌减毒活菌疫苗，该疫苗为含有肺炎链球菌SPD_1672基因功能缺陷的肺炎链球菌菌株的组合物，能够有效预防肺炎链球菌感染，安全性强、保护效果好、易大规模生产、具备推广使用的潜力...
- 尹一兵张雪梅吴凯峰姚润庞丹
- 文献传递
- ClpP融合蛋白诱导的免疫反应可抵抗不同型别肺炎链球菌的侵袭性感染
- 2008年
- 目的ClpP融合蛋白在调节肺炎链球菌其他毒力因子表达和入血过程中起重要作用，评价Trx—ClpP融合蛋白对不同型别肺炎链球菌的侵袭性感染的免疫保护效果，为后续蛋白疫苗的开发提供依据。方法含有重组质粒pET-32a（＋）／ClpP工程菌B121（DE3）经IPTG诱导后表达Trx—ClpP融合蛋白，纯化后与铝佐剂？昆合经腹腔注射免疫小鼠，而对照小鼠则用PBS与铝佐剂混合免疫。免疫程序：初次免疫5周后用ELISA法测小鼠针对ClpP融合蛋白的抗体免疫应答水平，末次免疫2周后用12个型别肺炎链球菌攻击，监测其生存时间。结果重组ClpP融合蛋白主动免疫BALB／c小鼠后，产生了高滴度的anti—ClpP融合蛋白抗体，对多个血清型的肺炎链球菌菌血症小鼠模型的保护效果较对照组具有统计学意义。结论ClpP融合蛋白免疫小鼠后可抵抗1、2、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F等12个型别的肺炎链球菌侵袭性感染，提示以ClpP融合蛋白为活性成分的疫苗具有较高的开发价值。
- 李岱容王虹吴凯峰张雪梅尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌疫苗
- ClpP粘膜免疫预防小鼠发生肺炎链球菌性肺炎和败血症被引量：3
- 2009年
- 目的:肺炎链球菌毒力蛋白ClpP鼻腔粘膜免疫BALB/c小鼠,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值。方法:利用制备的ClpP多克隆抗体,分析ClpP在肺炎链球菌表面表达情况;ClpP蛋白粘膜免疫小鼠,TIGR4型肺炎链球菌分别经腹腔和鼻腔攻击,分析肺炎链球菌小鼠肺内定植情况并监测小鼠生存时间。结果:流式细胞技术证实了TIGR4肺炎链球菌表面表达ClpP毒力蛋白,粘膜免疫ClpP可以特异产生系统性和粘膜性的ClpP抗体,并可减少TIGR4肺炎链球菌在小鼠肺内的定植,延长小鼠生存时间。结论:ClpP粘膜免疫可预防小鼠发生肺炎链球菌性肺炎和败血症,进一步证实ClpP蛋白可作为肺炎链球菌的候选蛋白疫苗。
- 陈怡婷曹炬李岱容吴凯峰尹楠林尹一兵
- 关键词：粘膜免疫肺炎链球菌CLPP
- 肺炎链球菌LytR蛋白影响细菌生长和磷壁酸的合成
- 2019年
- 为了初步明确lytR基因的保守性以及探讨LytR蛋白在肺炎链球菌中的生物学功能。本研究利用PCR和测序方法分析lytR基因20种不同序列型肺炎链球菌临床分离株的保守性;利用Western blotting技术分析lytR在细菌不同生长阶段的表达情况;随后,利用红霉素片段替代lytR基因构建D39ΔlytR缺陷菌株,通过生长曲线分析、电镜下形态观察、以及磷壁酸含量测定揭示LytR蛋白在细菌生长、细菌形态以及磷壁酸合成中的作用。研究发现20种不同序列型肺炎链球菌临床菌株的lytR基因序列一致性>99.3%;Western blotting结果显示lytR在细菌不同生长阶段稳定表达;D39ΔlytR缺陷株生长明显变缓,细菌表现为不成熟自溶;D39ΔlytR全菌磷壁酸含量显著减少,而培养基上清中的磷壁酸含量显著增多。本研究表明lytR基因非常保守,在肺炎链球菌不同生长阶段均有表达,并可能通过连接酶的作用影响细菌生长和参与肺炎链球菌磷壁酸的合成,有望成为一种新的抗生素和药物靶点。
- 叶唯洁徐红梅张竞辉张雪梅尹一兵吴凯峰
- 关键词：肺炎链球菌
- 肺炎链球菌溶血素减毒突变体免疫小鼠可诱导抗体依赖的保护效应
- 2010年
- 目的 优化肺炎链球菌溶血素减毒突变体（△A146 Ply）蛋白小鼠免疫方案,评价其保护效果,并揭示△A146 Ply特异性抗体在保护中的作用.方法 分别使用△A146 Ply免疫小鼠1、2、3次,利用ELISA分析血清内特异性IgG滴度,效价测定1周后,使用肺炎链球菌D39菌株鼻腔攻毒评价3种免疫方式保护效力.通过肺内定植模型和败血症模型分析△A146 Ply对肺炎链球菌感染的保护效果.利用抗体吸附试验和模拟被动保护试验分析Ply特异性抗体的保护作用.结果 随着免疫次数的增加,小鼠血清内的IgG滴度显著升高.相比免疫两次的小鼠,3次免疫后的小鼠其体内的IgG升高超过20倍.在攻毒试验中,免疫3次后的小组接受同等剂量的D39攻毒,存活率最高,保护效率为50%.在定植模型中,△A146 Ply免疫后的小鼠,其肺内肺炎链球菌血清型19F的细菌量减少约50倍,14血清型菌减少超过20倍.在败血症模型中,使用1200 CFU的D39腹腔注射到免疫组及对照组小鼠体内,△A146 Ply免疫组有60%的小鼠能够抵抗这种致命剂量的D39感染,对照组小鼠全部死亡（P=0.0018）.在被动保护试验中,Ply特异性抗体被吸附完全后的抗血清完全不能保护小鼠抵抗致死剂量的D39感染,60%的小鼠在接受抗体特异的抗血清后存活,两组存活率差异有统计学意义.结论 △A146 Ply能有效抵抗肺炎链球菌的感染,证实保护作用与其特异性抗体密切相关.
- 吴凯峰张薇薇史静杨晓亮刘鑫胥文春何於娟张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌
- 一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达被引量：2
- 2010年
- 目的使用重叠PCR方法构建构建△Al46Ply突变体，原核可溶性表达△Al46Ply蛋白，并明确其毒力变化情况；分析肺炎链球菌溶血素（pneumolysin，Ply）在不同血清型肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae，SPN）中的表达情况。方法以SPND39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体pry基因所需引物；利用重叠PCR方法扩增合成△Al46ply突变体。通过溶血实验分析其溶血活性，利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力，并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况。结果突变体基因测序结果显示，Plyl46位密码子GCT3个碱基被缺失，△Al46ply突变体构建成功，并实现了△Al46Ply的可溶性表达，得到纯度〉90％的重组蛋白。△A146Ply蛋白浓度为100000ng／ml亦未表现出溶血活性。△Al46Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性。Western印迹结果显示，△Al46Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应。结论△Al46Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子，可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体。
- 吴凯峰张薇薇崔亚利张雪梅胥文春庞丹刘鑫王虹
- 关键词：肺炎链球菌溶血素重叠PCR突变体
- 三种肺炎链球菌表面蛋白联合诱导的特异性IgG抗体介导的免疫保护
- 在所有可通过疫苗预防的疾病中，肺炎链球菌疾病是导致全球5岁以下儿童死亡的首要病因。据世界卫生组织估计全球每年约有160万人死于各种肺炎链球菌疾病，其中5岁以下儿童占100万，90％以上的死亡病例在发展中国家。肺炎链球菌抗...
- 吴凯峰
- 关键词：肺炎链球菌免疫保护疫苗预防
- 文献传递
- SPD1672蛋白对肺炎链球菌磷壁酸合成和细菌增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的鉴定SPD1672基因在肺炎链球菌细胞壁多糖合成及增殖中的作用。方法通过生物信息学分析SPD1672蛋白可能的生物学功能,用替代失活法在肺炎链球菌D39菌株和R6菌株中敲除该基因,用电子显微镜观察基因缺失菌株与野生菌株荚膜厚度,Western blot检测磷壁酸合成量,最后以吸光度法测定肺炎链球菌体外增殖能力。结果成功构建SPD1672基因缺失菌;SPD1672基因缺失菌株与野生菌株相比,荚膜厚度无差异;而缺陷菌株的C反应蛋白结合量较野生菌显著减少(P<0.01),其磷壁酸含量也较野生菌显著下降。此外,SPD1672基因缺失菌体外增殖较野生菌缓慢(P<0.05)。结论 SPD1672蛋白影响肺炎链球菌磷壁酸合成和体外增殖能力,是肺炎链球菌的一种新毒力因子。
- 黄健张彦青黄美容吴凯峰胥文春王虹
- 关键词：肺炎链球菌
