祁晶晶
- 作品数：31 被引量：93H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项上海市浦江人才计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 产NDM-1型碳青霉烯酶奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性分析
- 2023年
- 由金属β-内酰胺酶介导的耐碳青霉烯类抗生素的细菌在全球范围内蔓延,blaNDM-1是其中典型且关键的一种。奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)广泛分布于自然环境以及哺乳动物肠道内,可携带多种耐药基因,有潜在的人畜共患风险。为了调查奇异变形杆菌在养禽场内的耐药情况,本研究从浙江、江苏等地采集病料,通过选择性培养基分离、生化实验、PCR方法鉴定奇异变形杆菌,分析分离株的耐药性,根据耐药性结果检测产碳青霉烯酶耐药基因的携带情况,最后对产NDM-1型碳青霉烯酶分离株进行全基因组测序分析。经过选择性培养基分离、生化实验及PCR检测共鉴定到10株奇异变形杆菌,药物敏感性结果显示,分离株PM01对氟苯尼考、复方新诺明、硝基呋喃、头孢菌素类抗生素耐药,且对碳青霉烯类抗生素耐药;PCR检测显示,PM01株携带blaNDM-1耐药基因。全基因组测序发现blaNDM-1基因位于染色体中,通过线性比对分析显示其与人源大肠杆菌以及肺炎克雷伯菌共享相似的遗传背景。研究结果表明,携带blaNDM-1的奇异变形杆菌可能会导致肠杆菌科细菌间碳青霉烯类耐药性的传播,具有潜在的公共卫生学意义。
- 王芷洋彭浩恒郭伟奇王帝张贝贝王欣宇胡剑刚祁晶晶田明星鲍衍清李海花王少辉
- 关键词：奇异变形杆菌碳青霉烯酶耐药性全基因组测序
- 广西地区鸡胚中沙门菌的分离鉴定及耐药性分析被引量：2
- 2022年
- 为了解广西地区鸡胚中沙门菌的流行情况及耐药现状,本研究对广西某些鸡场送检的病死鸡胚进行沙门菌的分离鉴定。然后利用PCR方法鉴定沙门菌临床分离株的血清型及毒力因子,并检测其耐药性。结果显示,经选择性培养基和PCR鉴定分离到18株沙门菌,分离率为13.95%(18/129)。血清型鉴定显示:分离株均为鸡白痢沙门菌。毒力基因检测发现shdA基因的分布率只有22.22%,其余15个毒力基因的分布率均为100%。药敏试验结果显示,沙门菌分离株对卡那霉素、庆大霉素、氯霉素、美罗培南、亚胺培南均敏感;但对林可霉素、克林霉素、罗红霉素、红霉素、利福平的耐药率达100%,表明鸡白痢沙门菌的多重耐药现象严重。本研究提示鸡白痢可能是导致鸡胚死亡及孵化率低的原因,因此应严格进行鸡白痢的防控净化工作。
- 信素华陶程琳张耀东王瑶李妍易正飞田明星李涛祁晶晶丁铲高崧王少辉于圣青
- 关键词：鸡胚鸡白痢沙门菌毒力基因耐药性
- 基于脂蛋白P80的滑液支原体抗体ELISA检测方法的建立及应用被引量：5
- 2020年
- 【目的】研究滑液支原体(Mycoplasma synoviae, MS)脂蛋白P80的免疫反应性及其在MS血清抗体ELISA检测中的应用。【方法】对MSP80的氨基酸序列进行生物信息学分析、原核表达和纯化,并用免疫印迹法分析其与6种不同MS分离株阳性血清的免疫反应性以及与其他禽病原血清的交叉反应性;运用纯化的MS P80表达蛋白作为包被抗原建立了MS血清抗体的间接ELISA检测方法,对其敏感性和重复性进行检测;比较检测了与美国爱德士检测试剂盒对50份临床血清样品的阳性符合率。【结果】生物信息学分析预测MS P80蛋白为脂蛋白且含有信号肽,其在MS种内同源性高达98%-100%,与其他种属P80蛋白同源性在25%-34%之间,成功表达和纯化了MS P80重组蛋白(rMS P80);Western blotting分析表明纯化的rMS P80具有良好的免疫反应性和特异性;运用rMS P80建立的MS血清ELISA抗体检测方法可对不同株MS阳性血清进行抗体效价检测,而对其他禽病原阳性血清均无交叉反应性;该检测方法的批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%,重复性良好;与美国IDEXX检测试剂盒比较,本文建立的ELISA抗体检测方法敏感性更高,阳性符合率为75%,阴性符合率为89.47%,总样本符合率为86%。【结论】MS P80具有较好的免疫反应性、种内保守性和种间特异,并且可用作MS抗体检测的靶标抗原。
- 王宇李浩然温政尚原冰刘婷丁铲高崧祁晶晶于圣青
- 关键词：脂蛋白滑液支原体免疫反应性间接ELISA
- 牛支原体临床分离株牛体毒力和免疫原性比较被引量：12
- 2013年
- 牛支原体肺炎是我国肉牛的新现传染病,目前尚无特异性预防措施。本研究比较3株牛支原体临床分离株和1株ATCC参考株PG45的牛体毒力和免疫原性,筛选免疫原性良好的强毒株,为牛支原体灭活疫苗研究提供侯选菌株。6月龄左右本地健康黄牛经气管注射相同剂量的牛支原体,连续观察22d后处死,记录攻毒前后试验牛的临床症状,血液白细胞变化,体重变化,特异性细胞免疫和体液免疫反应等;剖检观察病理变化和组织病理变化,并用免疫组化方法检测组织中抗原量。4株牛支原体菌株中,临床分离株XY毒力最强,导致牛体重减轻,临床症状明显,大体和组织病理变化严重,同时能诱导较好的免疫反应。然而,各株牛支原体抗原在感染牛肺和淋巴结的分布没有显著差异。通过牛体试验,筛选出1株牛支原体灭活疫苗研究侯选菌株,同时为牛支原体毒力研究和疫苗效力评价提供了牛体感染模型。
- 张瑞崔朋巴晓亮汪漫韩潇潇祁晶晶彭清洁陈曦胡长敏陈颖钰郭爱珍
- 关键词：牛支原体毒力免疫
- 双组分系统CpxR影响禽致病性大肠杆菌的耐药性、抗血清杀菌能力及毒力被引量：2
- 2021年
- CpxR是细菌中Cpx双组分系统(two component system, TCS)的反应调控蛋白,通过调控靶基因的转录表达,在细菌细胞膜稳定及毒力方面发挥作用。本研究旨在探究TCS CpxR对禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli, APEC)基本生物学特性、抗血清杀菌能力及致病性的影响。利用Red同源重组系统及互补质粒构建cpxR基因缺失株、互补株,然后比较分析野生株、基因缺失株与互补株的生长曲线、运动性、生物被膜形成能力、药物敏感性、抗血清杀菌能力、动物致病性的差异。结果显示:cpxR基因缺失株与野生株、互补株的生长速度和运动性能无明显差异,且缺失cpxR基因不影响APEC的生物被膜形成能力。然而,缺失CpxR导致APEC对阿米卡星和卡那霉素耐药性降低。血清杀菌试验结果显示,CpxR有助于APEC的抗血清杀菌能力。动物感染试验结果显示,野生株、cpxR基因缺失株和互补株对雏鸭的半数致死量(LD_(50))分别为7.50×10^(5)、7.50×10^(6)、1.33×10^(6) CFU,表明CpxR缺失显著降低APEC的毒力。综上表明,TCS CpxR在APEC耐药性、抗血清杀菌能力及毒力方面发挥作用,为阐明APEC的环境适应性、生存能力及致病机制提供参考。
- 易正飞张耀东王瑶朱红陶程琳AFAYIBO Dossêh Jean Ap tre李涛祁晶晶田明星丁铲于圣青王少辉
- 关键词：禽致病性大肠杆菌耐药性毒力
- 鸭疫里氏杆菌转座子随机突变库的构建被引量：2
- 2014年
- 通过接合转导的方法构建鸭疫里氏杆菌Yb2和CH3株的Tn4351转座子突变库,以便筛选和鉴定鸭疫里氏杆菌的功能基因。先将携带质粒pEP4351(含Tn4351转座子序列)的大肠杆菌BW19851(pEP4351)作为供体,与受体菌鸭疫里氏杆菌强毒株Yb2或CH3株进行接合转导,使质粒pEP4351导入Yb2或CH3株细菌内,进而转座子Tn4351随机插入鸭疫里氏杆菌的基因组中,然后用含红霉素和卡那霉素的胰酶大豆琼脂平板进行阳性接合子的筛选。用PCR扩增鸭疫里氏杆菌16S rRNA基因和红霉素抗性基因EmF进行转座子插入突变株的鉴定,最终成功地构建了鸭疫里氏杆菌Yb2株和CH3株各包含3 100株和2 520株突变株的Tn4351转座子随机突变库,接合转导效率分别为1.7×10-6和3.9×10-6。转座子随机突变库的构建为下一步根据突变株表型的变异来筛选和鉴定鸭疫里氏杆菌的毒力相关等基因奠定了基础。
- 倪欣涛卢凤英苗双朱寅玉邢林林俞慧祁晶晶王桂军胡青海
- 关键词：鸭疫里氏杆菌
- 检测大肠杆菌内c-di-GMP水平的双荧光素报告质粒的构建及应用
- 2023年
- 细菌通过调控第二信使环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)而促进其适应环境、存活及致病。【目的】本研究旨在建立有效的c-di-GMP水平检测方法,为大肠杆菌内c-di-GMP水平检测提供便利条件。【方法】根据c-di-GMP核糖开关受体的调控方式、荧光报告基因等设计引物,通过重叠聚合酶链反应(overlap polymerase chain reaction,overlap PCR)和同源重组酶构成基于核糖开关的双荧光素报告质粒pAmCherry-Vc2EGFP(pACVcE),然后构建c-di-GMP代谢基因过表达菌株和缺失菌株,利用pACVcE检测大肠杆菌内c-di-GMP水平。【结果】Overlap PCR扩增产物与目的靶序列一致,测序结果证明pACVcE序列正确。表达c-di-GMP合成酶DgcZ的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著升高,而表达c-di-GMP降解酶PdeK的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著降低。禽致病性大肠杆菌的胞内c-di-GMP水平检测发现c-di-GMP降解酶基因pdeK缺失后胞内的c-di-GMP水平显著升高。【结论】本研究构建了基于核糖开关的双荧光素报告质粒,可方便、快速检测大肠杆菌胞内c-di-GMP水平。
- 张贝贝胡剑刚王欣宇郭伟奇姚澜王芷洋王帝祁晶晶田明星鲍衍清王少辉
- 关键词：核糖开关
- 鸭疫里默氏杆菌质粒介导利福平耐药机制研究
- [目的]探究鸭疫里默氏杆菌利福平耐药机制,寻找新的药物靶点,为鸭疫里默氏杆菌防治提供技术理论。[方法]从全国不同规模化养殖场中,分离鸭疫里默氏杆菌,利用K-B纸片法,测定不同临床分离株对利福平最小抑菌浓度;采用随机突变方...
- 刘玲俐苏观志赵亚楠王少辉田明星祁晶晶李涛于圣青
- 文献传递
- 鸭疫里默氏杆菌对鸭胚肝细胞粘附入侵能力的研究被引量：2
- 2019年
- 为了分析鸭胚肝细胞用于鸭疫里默氏杆菌粘附入侵实验的可行性,本研究比较了鸭疫里默氏杆菌对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附和入侵能力。首先将构建的互补质粒pRES1-ompA通过双亲本接合转导的方法导入ompA基因缺失株Th4ΔompA中,构建得到缺失株的回复菌株cTh4ΔompA;然后比较了野生株Th4、缺失株Th4ΔompA及回复株cTh4ΔompA菌株对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附入侵能力。结果表明,与野生株Th4菌株相比,缺失株Th4ΔompA对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附能力分别降低了3.32倍和3.12倍,入侵能力分别降低了2.25倍和7.58倍,而cTh4ΔompA对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附入侵能力均得到部分回复。本研究结果表明鸭胚肝细胞可用于鸭疫里默氏杆菌粘附入侵能力的分析。
- 薛亚飞宫艳杉祁晶晶卜慧敏杨永胜陈妍高萌萌胡青海
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌VERO细胞粘附入侵
- 鸡滑液支原体磷酸甘油酸激酶的克隆表达及酶学活性测定被引量：5
- 2021年
- 磷酸甘油酸激酶(PGK)是生物进行糖酵解的关键酶,目前未见关于鸡滑液支原体(MS)PGK的相关研究报道。本实验采用Overlap PCR方法对MS的pgk基因进行点突变扩增,然后连接至pET-28a(+)表达载体并在大肠杆菌BL21中表达,纯化获得重组MSPGK(rMSPGK)蛋白,然后对纯化后的rMSPGK蛋白的酶学活性进行测定,包括温度、pH及不同底物对酶活的影响,并计算其酶比活力、米氏常数及最大反应速率。结果显示:最终获得了纯化的rMSPGK蛋白,其相对分子质量约为45 kDa;酶学活性测定显示,rMSPGK蛋白的酶比活力为100.70 IU/mg,最适酶促温度为37℃,最适pH为7.5;双倒数法求得rMSPGK蛋白相对于3-PGA的最大反应速率Vmax为370.37μmol/(L?min),米氏常数Km值为3.88 mmol/L;相对于ATP的最大反应速率Vmax为357.14μmol/(L?min),Km值为0.25 mmol/L。综上,本实验成功地表达了MS的PGK蛋白,并获得了酶活力较高的rMSPGK蛋白,为进一步研究鸡滑液支原体代谢和致病机制奠定了基础。
- 尚原冰祁晶晶王宇李浩然刘晓涵王少辉李涛田明星于圣青周铁忠
- 关键词：原核表达酶学活性
