朱敏
- 作品数：32 被引量：135H指数：7
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 东方田鼠特异DNA片段的克隆及核苷酸序列分析被引量：15
- 2001年
- 目的 获得东方田鼠的特异DNA序列。方法 Aβ基因使用PCR ,基因克隆 ,斑点杂交 ,DNA序列分析 ,生物信息学技术。结果 根据小鼠MHCⅡ外显子 2及其两侧序列 ,合成引物并扩增东方田鼠基因组DNA ,将PCR产物回收、测序后 ,分别设计内引物扩增东方田鼠基因组DNA ,其中一对引物可得到特异性扩增带 ,将得到的DNA片段插入PGEM Teasy载体 ,进行序列分析。用这对引物扩增人、昆明小鼠、BALB c小鼠及C57BL 6J小鼠基因组DNA ,均无扩增产物。以东方田鼠特异性扩增产物为探针进行斑点杂交 ,除东方田鼠基因组DNA外 ,其他几种动物基因组DNA均为阴性结果。进一步对该DNA片段进行了BLAST同源性搜索和外显子预测 ,在Genbank中没有发现高度同源序列 ,并且找到一个可能的外显子 ,该外显子由 69个氨基酸组成。结论 获得的DNA片段为东方田鼠的特异片段 ,这将为从分子水平深入研究东方田鼠的遗传背景、生物进化规律以及东方田鼠抗日本血吸虫的机理奠定基础。
- 杨榕胡维新朱敏彭兴华
- 关键词：东方田鼠DNA片段斑点杂交动物基因组生物进化
- 改进方案构建人糖皮质激素受体α基因正、反义重组逆病毒载体
- 2005年
- 目的 构建人糖皮质激素α(hGRα)cDNA的表达重组体 ,为较大DNA片段的克隆提供借鉴 ,并为利用反义核酸技术探讨hGRα功能及其作用机制提供实验材料。方法 L -PCR扩增hGRαcDNA ,克隆至T载体 ;随后通过改进的连接方案进行亚克隆。结果 限制性酶增和序列分析表明克隆及亚克隆成功。结论 成功构建于hGRαcDNA的逆转录病毒载体pLXSN正义及反义重组子。
- 朱敏何庆南周钢胡维新
- 关键词：基因克隆
- 检测STAT2基因多态性的PCR-PIRA方法的建立
- 2013年
- 目的:为了检测信号转导和转录活化蛋白2(signal transducer and activator of transcription factor 2,STAT2)基因的rs12422499和rs2066807两个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),建立一种简单、可靠的多聚酶链式反应-引物介导的限制性分析法(polymerase chain reaction-primer introduced restriction analysis,PCR-PIRA)。方法:微量盐析法提取外周静脉全血DNA,设计引物扩增STAT2基因的rs2066807及rs12422499位点所在的基因片段,采用限制性内切酶PsyI及BseDI分别酶切相应PCR产物,凝胶电泳方法观察酶切结果。同时将PCR产物进行DNA测序。结果:PCR扩增rs2066807基因片段,长度为469bp,经PsyI酶切后电泳,根据酶切产物片段大小判断rs2066807的C/C(469 bp)、G/G(262 bp、207 bp)、C/G(469 bp、262 bp及207bp)三种基因型;PCR扩增rs12422499基因片段,长度为189 bp,经BseDI酶切后电泳,根据酶切产物片段大小判断rs12422499的C/C(189 bp)、G/G(134 bp、55 bp)、C/G(189 bp、134 bp及55 bp)三种基因型。将PCR产物直接进行DNA测序,SNP测序结果与PCR-PIRA方法获得的结果一致。结论:成功建立了一种检测STAT2基因SNPs的PCR-PIRA法,该方法只需简单的PCR扩增和酶切消化,因此操作简单、方便;通过与直接测序结果比较,显示该方法可信。PCR-RIPA方法不仅为检测STAT2基因多态性提供了实验手段,也为检测其他基因点突变提供了实验方法。
- 袁媛黄玉梅钟待鸣朱敏姚芳玲黎明
- 关键词：单核苷酸多态性
- 骨关节病关节软骨细胞线粒体DNA突变检测被引量：2
- 2000年
- 目的 :探讨线粒体DNA突变在退行性疾病骨关节病发病中的意义。方法 :采用PCR -SSCP技术 ,结合线粒体DNA测序方法 ,检测了 8例骨关节病和 3例正常人的关节软骨细胞线粒体DNA在一个特点区域 (np:80 0 0— 90 0 0 )内的突变改变。结果 :在 8例骨关节病例中 ,有 4例出现了线粒体DNA突变 (不包含中性突变 ) ,其中单有点突变并导致氨基酸发生改变的有 2例 ,单有缺失突变的有 1例 ,既有点突变又有缺失突变的有 1例 ;此外 ,发现中性突变 (不改变氨基酸 )的有 4例 ;1例正常标本发现有线粒体DNA点突变存在 ;所有进行了DNA测序检测的标本均发现线粒体DNA886 0位点AG的突变。结论 :骨关节病与线粒体DNA突变有密切关系 ,但其因果关系尚待进一步研究。
- 吕红斌朱敏胡建中王嘉芙胡维新谢慎思
- 关键词：线粒体DNA突变骨关节病软骨细胞
- GRβ对肾小球系膜细胞糖皮质激素效应的影响(英文)被引量：2
- 2007年
- 目的:构建糖皮质激素受体β(GRβ)不同表达水平的肾小球系膜细胞株,研究GRβ对肾小球系膜细胞糖皮质激素效应的影响。方法:利用逆转录病毒载体pLXSN将重组GRβ正义和反义基因转入肾小球系膜细胞,经细胞培养、逆转录聚合酶链反应、基因测序和蛋白质印迹分析鉴定所构建的细胞株,应用MTT法和流式细胞术检测细胞内不同表达水平的GRβ对地塞米松的细胞增殖抑制效应和细胞周期变化的影响。结果:构建的肾小球系膜细胞分别有正确的GRβ正义和反义基因整合,转染了GRβ正义基因的肾小球系膜细胞内GRβ蛋白质表达水平明显高于转染了GRβ反义基因者(109.74±10.63vs.19.08±1.01,P<0.05);地塞米松对GRβ高表达的肾小球系膜细胞的增殖抑制效率显著低于GRβ低表达的肾小球系膜细胞(18.47%±2.12%vs.60.33%±5.29%,P<0.05)。在地塞米松的抑制下,转染了正义GRβ基因的细胞中,其S期细胞降低程度和G1期细胞升高的程度均明显低于未转染的细胞。结论:肾小球系膜细胞内高表达的GRβ具有拮抗糖皮质激素效应的作用,细胞内GRβ表达水平是决定细胞对激素敏感或抵抗的重要因素。
- 张磊何庆南朱敏周钢丁娟娟周频吴小川易著文
- 关键词：糖皮质激素受体Β糖皮质激素基因转染肾小球系膜细胞
- 反义单核细胞趋化蛋白1对大鼠系膜细胞增生的影响
- 2007年
- 目的研究反义单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）对系膜细胞MCP—1分泌及增生的影响。方法用逆转录病毒感染体外培养的系膜细胞，得到转染反义MCP—1的系膜细胞，经PCR及Southern印迹鉴定外源基因在系膜细胞基因组DNA上的整合。脂多糖（LPS）刺激反义MCP-1系膜细胞，以正常系膜细胞及转染空白载体的系膜细胞为对照，观察其增生情况。用RT-PCR法检测MCP-1、CC趋化因子受体2（CCR2）的mRNA表达。ELISA法检测细胞上清中MCP-1蛋白的分泌。结果经逆转录病毒转染得到的反义MCP-1的系膜细胞，其基因组DNA中有外源基因的整合。在正常的培养条件下，反义组与对照组系膜细胞的增生差异无统计学意义；MCP-1、CCR2的mRNA均有少量表达；MCP-1的蛋白也有微弱表达。在LPS的刺激下，反义组与对照组MCP-1的mRNA的表达均增高；MCP-1蛋白的分泌均增多。与对照组比较，反义组系膜细胞的增生受抑制[（16．83±1．16）×10^4／ml比（19．63±1．85）×10^4／ml]，MCP—1的mRNA的表达较少（0．424比0．866，P〈0．01），MCP—1蛋白的分泌减少。CCR2的mRNA表达与MCP-1的变化一致。结论（1）逆转录病毒载体pLXSN可有效地介导MCP-1 cDNA在系膜细胞的转染。（2）反义MCP-1可降低系膜细胞MCP—1的转录和翻译。（3）反义MCP—1的转染可降低系膜细胞在炎症状态时的增生。（4）大鼠系膜细胞具有CCR2的表达，在炎症状态时形成MCP-1、CCR2的自分泌环路。
- 张新萍易著文何小解何庆南朱敏周钢
- 关键词：单核细胞化学吸引蛋白质1趋化因子系膜细胞
- 一种BRCA1单倍型检测的PCR-PIRA方法的建立
- 目的:BRCA1基因是迄今为止发现的最重要的乳腺癌易感基因,其突变赋予家族遗传性乳腺癌高发生风险,但遗传性乳腺癌在发病人群中只占10%-20%,大量散发性乳腺癌的相对低风险可能与BRCA1基因广泛存在的单核苷酸多态性(s...
- 贾天红任自敬杨斌陈文娟王丽朱敏刘静
- 关键词：BRCA1SNP基因分型
- 红霉素抑制人支气管上皮细胞白介素-8基因的表达被引量：1
- 2009年
- 目的从分子水平上探讨红霉素(EM)的抗炎作用机制,为临床长期应用小剂量红霉素治疗慢性气道感染性疾病提供理论依据。方法体外培养人支气管上皮细胞(16 HBE),将细胞随机分为8组,先加入红霉素干预,后加入肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激。分组如下:(1)空白对照组;(2)TNF-α(20ng/mL,16h);(3)EM(0.3μg/mL,24h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(4)EM(3μg/mL,24h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(5)EM(30μg/mL,24h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(6)EM(0.3μg/mL,48h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(7)EM(3μg/mL,48h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(8)EM(30μg/mL,48h)+TNF-α(20ng/mL,16h)。然后收集各组细胞分别提取RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测白介素-8(IL-8)mRNA。结果用前炎因子TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16 HBE)后,RT-PCR结果显示细胞IL-8 mRNA表达增高。先加入不同浓度及作用时间的红霉素,后加入前炎因子TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16 HBE),RT-PCR结果显示各组细胞IL-8 mRNA表达均降低,但其降低的水平与红霉素作用浓度及时间无明显关系。结论前炎因子TNF-α能激活人支气管上皮细胞IL-8基因的表达,使其表达增高,促进炎症的发生发展,在炎症进程中发挥着重要作用。红霉素能抑制人支气管上皮细胞白介素-8基因表达,这可能是红霉素的抗炎作用机制之一。
- 李梅华钟小宁柳广南何志义朱敏周刚
- 关键词：人支气管上皮细胞红霉素IL-8TNF-Α
- PCR-SSCP分析线粒体DNA突变的方法学改进被引量：7
- 2000年
- 在采用PCR -SSCP(PolymeraseChainReaction -SingleStrandConformationPolymorphism ,聚合酶链式反应 -单链构象多态性 )分析技术对 8例骨关节病患者软骨细胞线粒体DNA进行突变分析的过程中 ,针对区带多而杂乱的情况 ,改变变性剂成份和电泳电压 ,从而有效提高了检出灵敏度 ,同时极大地节省了时间。
- 朱敏吕红斌周钢谭文斌谢慎思
- 关键词：基因突变PCR-SSCP分析线粒体DNA
- 4.1N与相关蛋白质相互作用研究进展
- 2015年
- 蛋白4.1N是细胞骨架蛋白4.1家族的一员,具有保守的血影蛋白-肌动蛋白结合结构域、羧基端结构域、膜结合结构域及其相邻的调节结构域。本文综述4.1N与受体蛋白及其他特定蛋白质分子的相互作用研究情况,表明4.1N对细胞和机体正常生理、生命活动具有重要意义。
- 刘伟张小琼朱敏
- 关键词：蛋白质相互作用受体
