崔艳
- 作品数：9 被引量：23H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 展示狂犬病病毒保护性抗原的重组犬2型腺病毒的构建
- 2008年
- 本试验以犬2型腺病毒全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2为基础,以8202株狂犬病病毒基因组为模板,通过PCR扩增得到狂犬病病毒糖蛋白膜外区基因(8202-G″)。通过MluⅠ和EcoRⅠ双酶切pPolyⅡ-CAV-2质粒,获得含有Ⅸ蛋白的340bp片段,将其克隆入pEGFP-C1-dAseⅠ质粒中,构建pEGFP-SIX载体,该载体经AseⅠ单酶切插入8202-G″,即在编码Ⅸ蛋白基因的最后密码子与终止密码子之间按与Ⅸ蛋白编码链相同转录方向插入8202-G″基因,获得重组基因组质粒和pPolyII-CAV-2-ⅨG(34.8kb)。酶切鉴定结果显示,目的基因均克隆进Ⅸ蛋白中。
- 王燕张守峰崔艳徐振波于恒智扈荣良张乐萃
- 关键词：糖蛋白犬2型腺病毒重组病毒
- 核因子κB降低小鼠胚胎成纤维细胞中Lmp2基因转录
- 2011年
- 目的研究在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中,核因子κB(NF-κB)对Lmp2基因转录的影响。方法利用NF-κB荧光素酶报告基因检测MEF和c-abl/arg缺失株(DKO)中内源性NF-κB活性;构建包含Lmp2启动子序列和NF-κB结合序列突变体的荧光素酶报告基因,通过双荧光素酶报告系统,研究NF-κB对Lmp2启动子转录活性的调控,并应用定量PCR、Western印迹比较Lmp2基因在MEF和DKO细胞中表达水平。结果 DKO细胞中内源性NF-κB活性上调;DKO细胞中Lmp2基因启动子的转录活性发生下调,并且NF-κB结合序列突变后,其转录活性升高;定量PCR和Western印迹结果表明,DKO细胞中Lmp2基因mRNA和蛋白表达水平比较MEF细胞均发生下调。结论 MEF中内源性NF-κB可负调控Lmp2基因转录,并降低其蛋白表达水平。
- 崔艳陈婷秦雪梅孙梦梅李平曹诚
- 关键词：NF-ΚB小鼠胚胎成纤维细胞LMP2转录启动子
- 霍乱弧菌O139多糖抗原的提取方法及优化
- 2010年
- 目的:研究霍乱弧菌O139多糖抗原的提取方法,以获得高纯度的多糖抗原。方法:采用热酚水法提取霍乱弧菌O139的脂多糖(LPS),并增加了DNaseⅠ、RNase消化步骤,以去除DNA及RNA的污染;进一步采用酸水解法获得脱毒的O特异性多糖(O-SP)。结果:经生化方法检测,证实提纯的LPS和O-SP纯度较高,能满足进行霍乱免疫研究的要求。结论:该方法简便可行,值得推广。
- 王远朱晓辉崔艳刘萱李平彭莉马清钧曹诚
- 关键词：霍乱弧菌O139脂多糖纯化
- 胎球蛋白A的纯化及其对3T3-L1脂肪细胞胰岛素通路的抑制作用被引量：6
- 2010年
- 目的对胎球蛋白A(AHSG)蛋白进行纯化,并探讨其对脂肪细胞胰岛素通路的调节作用。方法通过硫酸铵沉淀、PEG沉淀、DEAE离子交换和Protamine亲和层析方法纯化血浆中的AHSG蛋白。培养3T3-L1前脂肪细胞并分化为成熟脂肪细胞,置于低糖DMEM培养基培养,然后加入终浓度为100μg/ml和600μg/ml的AHSG及终浓度为600μg/ml的人白蛋白(HAS)分别进行培养,最后用不同浓度(0、10、20nmol/L)的胰岛素刺激细胞。采用Western blotting检测AHSG和HSA对3T3-L1脂肪细胞胰岛素下游分子IRS-1和Akt的磷酸化水平的影响。结果从血浆中纯化的AHSG蛋白纯度达90%以上。纯化的AHSG在100μg/ml浓度下可以减弱胰岛素对IRS-1蛋白磷酸化的影响,在600μg/ml浓度下可以完全抑制IRS-1蛋白磷酸化;纯化的AHSG在100μg/ml浓度下可以减弱胰岛素对Akt蛋白磷酸化的影响,在600μg/ml的浓度下可以明显抑制Akt蛋白的磷酸化,而600μg/ml的HAS则不能抑制IRS-1和Akt蛋白的磷酸化。结论从血清中纯化出的AHSG在生理浓度下可以抑制胰岛素对3T3-L1细胞中IRS-1和Akt蛋白的磷酸化作用,在脂肪细胞胰岛素通路中扮演着重要角色。
- 陈婷靳彦文瞿秀华崔艳李大培何章荣朱晓辉曹诚
- 关键词：胎球蛋白A胰岛素蛋白激酶类
- 犬2型腺病毒通用载体的构建及鉴定被引量：5
- 2007年
- 为了获得能够携带较大外源基因的犬2型腺病毒E3区缺失性载体,以犬2型腺病毒全基因组质粒pPolyⅡ-CAV-2及E3区重组质粒pVAX-E3为基础,缺失1381bp的E3区片段(92.6%的E3区全序列),插入Linker-NF(内含NotⅠ、ClaⅠ、FseⅠ多克隆位点),获得重组载体质粒pPolyⅡ-CAV-2-ΔE3(NF)(31.9kb)。以AscⅠ和PmeⅠ双酶切,游离重组基因组,在脂质体LipofectamineTM2000介导下,转染MDCK细胞系,获得了E3区缺失的重组病毒CAV-2-ΔE3(NF)。通过病毒的形态学观察,血凝性、生长特性、感染性实验证明,该重组病毒与母源病毒没有差异。重组病毒CAV-2-ΔE3(NF)可以作为载体表达外源基因,其外源基因插入片段不小于3.3kb。
- 李忠张守峰崔艳王晓虎刘晔扈荣良
- 关键词：犬2型腺病毒重组病毒
- 犬2型腺病毒的分离鉴定及初步特性分析被引量：3
- 2008年
- 目的:从长春市某养殖场一病死幼犬子宫中分离、鉴定病毒并分析其特性。方法:样品处理物接种MDCK细胞,病变细胞培养物进行电镜负染观察,对分离的病毒进行细胞敏感谱和红细胞血凝谱测试,并以特异引物PCR扩增鉴定,进行动物回归试验,检测分离病毒的理化学特性。结果:子宫上皮组织匀浆物能使MDCK细胞发生腺病毒典型病变,电镜观察可见二十面体立体对称病毒粒子。病毒增殖能被5-碘脱氧尿苷(5-IUDR)所抑制,对乙醚、胰酶不敏感,对酸(pH 3.0)和热(50℃)有一定抵抗力,能凝集人和大鼠红细胞但不凝集豚鼠红细胞,用犬腺病毒(CAV)特异性引物可扩增出与CAV-2阳性对照相同大小的核酸片段。分离病毒经口鼻接种SN效价为0的2月龄以下幼犬,可使其全部发病,其中3只死亡。结论:从病死幼犬子宫分离获得一株腺病毒,PCR扩增证明其为犬腺病毒2型,命名为CC0710。动物回归试验表明,该病毒毒性较强。
- 张洋袁子国姜秋杰刘晔崔艳张守峰扈荣良
- 关键词：毒性
- 真核表达东方马脑炎病毒衣壳蛋白Capsid抑制IFNγ应答基因转录
- 2012年
- 目的克隆东方马脑炎病毒(EEEV)衣壳蛋白(Capsid)基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并初步研究其对干扰素(IFN)应答基因表达的影响。方法构建包含EEEV capsid基因的真核表达载体pcDNA3-Flag-capsid,以威格拉斯脂质体转染293细胞进行瞬时表达,Western印迹检测其表达情况;应用定量PCR比较IFN效应基因Gbp1,Gbp2和Isg15在pcDNA3-Flag-capsid和空载体转染细胞中mRNA表达差异。结果构建了EEEV Capsid真核表达质粒,并且该质粒能够在293细胞中有效表达,同时定量PCR结果表明,与空载体转染对照组相比,外源导入EEEV Capsid抑制IFN应答基因Gbp1,Gbp2和Isg15的转录。结论真核表达EEEVCapsid抑制细胞内IFN应答基因的表达,为研究EEEV致病机制奠定基础。
- 崔艳刘海楠李伟李平曹诚
- 关键词：真核表达
- 两株狂犬病病毒强毒株糖蛋白基因的克隆及潜在抗原表位分析被引量：6
- 2007年
- 通过RT-PCR分别获得了狂犬病病毒强毒CVS株、DRV82株糖蛋白基因,进行克隆及测序,并推导出氨基酸序列,与犬用疫苗弱毒株ERA、SRV9、犬源性街毒株CGX及人用疫苗株PG的糖蛋白序列进行比较。结果表明,以上狂犬病病毒毒株间的核苷酸同源性为83.1%～99.2%,氨基酸序列同源性为87.0%～98.5%。经Jameson-Wolf抗原表位优势图分析,CVS株与其他各株相比发现在304位、372位抗原表位优势升高;而DRV82株与其它各株差异不明显。抗原优势变化可能导致狂犬病病毒糖蛋白出现新的潜在抗原位点,为下一步构建不同毒株的狂犬病病毒糖蛋白重组疫苗奠定了基础。
- 崔艳李忠王雷张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白抗原位点
- 狂犬病病毒糖蛋白富集表位基因克隆及其在原核系统中的表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建狂犬病病毒标准强毒株(CVS-24)糖蛋白富集表位基因原核表达系统。方法通过RT-PCR扩增CVS-24株糖蛋白两段表位富集区基因,并将其克隆至载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-G1和pET-G2,转化大肠杆菌Rosetta,IPTG诱导表达。表达产物分别经12%SDS-PAGE和Western blot检测。结果大肠杆菌可高效表达目的基因,所表达的蛋白可被狂犬病病毒标准阳性血清所识别。经薄层扫描分析,目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的42%(G1)和34%(G2)。结论已成功构建了狂犬病病毒标准强毒株(CVS-24)糖蛋白富集表位基因原核表达系统,所表达的目的蛋白具有良好的免疫反应性,有可能作为检测狂犬病病毒血清抗体的候选基因。
- 王雷李忠刘晔崔艳卢彦欣扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白原核表达
