目的:以黑蒜提取物为研究对象,探讨其对脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞的体外抗炎作用及其机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的黑蒜提取物对RAW264.7细胞活性的影响;采用Griess法检测黑蒜提取物对LPS刺激RAW264.7细胞的一氧化氮(NO)释放量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中PGE2、IL-1β及IL-6的分泌量;采用反转录PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测COX-2、i NOS m RNA及蛋白的表达。结果:黑蒜提取物能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO、PGE2、IL-1β和IL-6的分泌,不同程度从转录和翻译水平抑制COX-2和i NOS的表达。结论:初步证实了黑蒜具有抗炎作用,其作用与在转录水平和翻译水平上抑制i NOS和COX-2有关。
为了探讨荷叶总黄酮对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制,建立以H_2O_2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)为氧化应激损伤模型,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测正常细胞的存活率与损伤程度,用试剂盒测定不同浓度荷叶总黄酮对H_2O_2刺激PC12细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)、蛋白质羰基含量的影响并检测Caspase-3活力的变化;Real Time PCR检测胞浆内Bcl-2与Bax的基因mRNA的表达。结果表明荷叶总黄酮能显著提高H_2O_2损伤的PC12细胞存活率,显著减少H_2O_2刺激的PC12细胞中MDA与蛋白质羰基的生成,显著提高CAT活性,但对提高SOD活性不显著。PC12细胞损伤可增加凋亡相关蛋白Bax mRNA的表达,加入荷叶总黄酮后有降低作用;同时H_2O_2使Bcl-2 mRNA的表达降低,加入荷叶总黄酮后有提高作用。荷叶总黄酮在给药浓度较低的情况下,对H_2O_2损伤的PC12细胞发挥着明显的保护作用,其作用机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。
