韩小虎
- 作品数：22 被引量：14H指数：3
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- 新型黄病毒NALSV检测方法的建立及应用
- 2022年
- 蜱是多种病原体的储存宿主和传播媒介,近年来由蜱体内新发现了多种潜在的人兽共患病病原,因此对蜱所携带病原的早期识别和建立相应的检测与防范措施尤为重要。对辽宁省部分地区采集的长角血蜱样本进行宏转录组测序,发现其中存在一种新的黄病毒科病毒成员,是潜在的人兽共患病病原。为建立针对该病毒快速、灵敏的检测方法,选择其糖蛋白VP1基因进行引物探针设计,通过对反应条件及反应体系的优化,建立了基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR检测方法,标准方程为y=-3.4436x+33.063,相关系数(R^(2))为0.9999;此方法可检出最低拷贝数为2.5×10copies·μL^(-1),与普通PCR相比,灵敏度提高约10^(4)倍,具有良好的灵敏度;与其他相近病毒的阳性质粒进行反应均无扩增,说明其具有良好的特异性;实验结果的变异系数均低于0.5%,重复性良好;对不同浓度质粒在不同时间进行反应,CT值无显著变化,稳定性良好。采用本方法对2020及2021年采集于辽宁省及内蒙古自治区的18个地区540头蜱进行检测,发现阳性样本数为234头,阳性率为43.3%。结果表明:所建立的实时荧光定量PCR检测方法具有特异性强,灵敏度高,线性关系、重复性及稳定性良好等特点,此检测方法的建立,填补了NALSV在实时荧光定量PCR检测方面的空白,为NALSV的病原检测提供了新的技术方法,对NALSV的分布监测、临床诊断及相关研究奠定了基础,具有一定的现实意义及应用价值。
- 车金姜峰陈瑶毕誉丹周奕辰姜凤华马永春杨鹏飞赵永祥陈泽良韩小虎
- 关键词：实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- 一种布鲁氏菌A19株特异性多肽、ELISA检测试剂盒及应用
- 本发明公开了一种布鲁氏菌A19株特异性多肽、ELISA检测试剂盒及应用，属于生物检测技术领域。具体公开一种布鲁氏菌A19株特异性多肽作为抗原在制备布鲁氏菌A19抗体检测试剂盒中的应用，所述特异性多肽的氨基酸序列如SEQ ...
- 刘宝山陈泽良沈国顺刘金玲韩小虎张欢张招杜方原刘梦志杨国丽
- 一种PCV2 ORF3特异性多肽及应用
- 本发明公开了一种PCV2ORF3特异性多肽及应用，涉及生物技术领域。本发明公开了一种PCV2ORF3特异性多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了该特异性多肽在制备检测PCV2抗体的ELISA试剂盒中...
- 刘宝山陈泽良沈国顺刘金玲韩小虎张欢叶银波杜方原刘梦志杨国丽
- 反刍动物埃立克体微滴数字PCR方法的建立及初步应用被引量：3
- 2023年
- 为建立反刍动物埃立克体(E.ruminantium)准确定量的微滴数字PCR方法(ddPCR),本研究以E.rum-inantium pCS20基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,建立了E.ruminantium ddPCR方法。利用本研究建立的ddPCR方法检测E.ruminantium、牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、无形体、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体等,结果显示仅E.ruminantium出现特异性扩增,而与其他寄生虫均无交叉反应,特异性强;将pUC57-pCS20重组质粒标准品10倍倍比稀释(1×10^(-1)拷贝/μL~1×10^(5)拷贝/μL)后,利用该ddPCR方法检测,结果显示,该方法对重组质粒标准品的检测限为1.8拷贝/μL,比相应荧光定量PCR方法的敏感性高10倍,本实验建立的ddPCR方法敏感性高;批内和批间重复性试验结果变异系数(CV)均小于2%,重复性好。利用建立的ddPCR方法对50只钝眼蜱样品检测,结果显示,阳性样品反刍动物埃立克体核酸的最低拷贝数为26拷贝/μL,ddPCR和荧光定量PCR检测试剂盒的检出率均为16.0%(8/50)。本研究首次建立的ddPCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,可作为E.ruminantium准确定量检测的有效手段。
- 王素华王忠才黄凌哲吕继洲吴绍强赵治国付海滨韩小虎张舟
- 一种布鲁氏菌A19株特异性多肽、ELISA检测试剂盒及应用
- 本发明公开了一种布鲁氏菌A19株特异性多肽、ELISA检测试剂盒及应用，属于生物检测技术领域。具体公开一种布鲁氏菌A19株特异性多肽作为抗原在制备布鲁氏菌A19抗体检测试剂盒中的应用，所述特异性多肽的氨基酸序列如SEQ ...
- 陈泽良刘宝山沈国顺刘金玲韩小虎张欢张招杜方原刘梦志杨国丽
- 文献传递
- 用于鉴别布鲁氏菌S2/019株和其它株的DNA片段、引物及其检测方法
- 本发明公开了一段用于鉴别布鲁氏菌S2/019株和其它布鲁氏菌菌株的特异性DNA片段，基于该特异性片段及其上下游序列，设计了三条引物，在以待测样本基因组为模板的PCR反应中，如果扩增出145bp和251bp的两条条带，说明...
- 刘宝山陈泽良沈国顺刘金玲韩小虎张欢杨博涵
- 文献传递
- 一种基于实时荧光定量PCR技术检测阿龙山病毒的引物探针组、试剂盒和应用
- 本发明提供了一种基于实时荧光定量PCR技术检测阿龙山病毒的引物探针组、试剂盒和应用，属于病毒检测技术领域。本发明提供了一种基于实时荧光定量PCR技术检测阿龙山病毒的引物探针组及其检测方法，仅针对阿龙山病毒能够实现阳性检测...
- 韩小虎曹雪陈泽良姜峰金鑫徐昭艳郝雅婷郭美麟方瑶琦陈娜
- 一种基于布鲁氏菌BvrR序列的LAMP引物及其使用方法
- 本发明公开一种基于布鲁氏菌BvrR序列的LAMP引物，包括上游外引物SEQ ID No.1、下游外引物SEQ ID No.2、上游内引物SEQ ID No.3和下游内引物SEQ ID No.4，分别命名为BF、BB、BF...
- 刘宝山陈泽良刘金玲杨国丽韩小虎沈国顺张欢
- 文献传递
- 一种用于检测副猪嗜血杆菌的RPA引物、RPA探针、试剂盒及核酸检测方法
- 本发明公开一种用于检测副猪嗜血杆菌的RPA引物、RPA探针、试剂盒及核酸检测方法，其中RPA引物包括正向引物为infBRPAF，其序列为：CATTGAATCAGCWGGYCCATCAATTCCTGTGGA，反向引物为in...
- 刘宝山尹荣焕姚龙泉韩小虎吴长德
- 文献传递
- A19布鲁氏菌GroES缺失突变株构建及应用
- 本发明是关于一种A19布鲁氏菌GroES缺失突变株构建与应用，属于布鲁氏菌疫苗研究领域。通过设计GroES的上、下游区域及kana抗性基因的PCR引物，扩增目的基因上、下游两个长度的同源性核苷酸片段及kana抗性基因，采...
- 陈泽良刘宝山韩小虎隋昀原张欢刘金玲沈国顺
- 文献传递
