杜鹏
- 作品数：11 被引量：6H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：博士研究生创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人白介素-6受体小分子拮抗剂高通量筛选模型的建立被引量：1
- 2014年
- 目的建立新的白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)小分子拮抗剂高通量筛选模型。方法PCR扩增IL-6R胞外区基因,将其克隆至真核表达载体构建重组质粒p ABHis-IL6R,瞬时转染HEK293T细胞进行分泌表达。利用Western印迹实验、受体配体结合实验对表达产物进行活性验证。利用二者的相互作用以及Fc片段与酶标二抗结合的特性建立基于ELISA法的IL-6R拮抗剂筛选模型,并用Z'-因子检测与已知拮抗剂ab47215对该模型的稳定性与可靠性进行评估。结果成功构建了真核表达载体p ABHis-IL6R,并对IL-6R进行了分泌表达。所表达的IL-6R能够被特异性抗体识别,能够与其配体rh IL-6特异性地结合,并表现出良好的量效关系。经测算得出,该模型的Z'-因子为0.53,满足高通量筛选的要求。ab47215能够剂量依赖性地阻断IL-6R与其配体的结合,其IC50=(0.55±0.11)μg/ml。结论建立了一种新颖而简便的IL-6R拮抗剂筛选模型,为寻找高效、低毒的小分子拮抗剂奠定了基础。
- 阎雨何阳阳张畅庞晓斌杜鹏孙志伟王双杜冠华
- 关键词：拮抗剂酶联免疫吸附测定
- 人源抗人α干扰素抗体及其应用
- 本发明提供了一种人源抗人α干扰素抗体及其编码基因与应用。通过基因工程手段和噬菌体表面展示技术结合运用，从全合成单链人抗体库中筛选出抗人IFNα多个亚型的基因工程单链抗体，并获得其抗体的可变区基因序列，在此基础上构建全人单...
- 孙志伟王双杜鹏仇玮祎余云舟
- 文献传递
- 人源抗人多亚型干扰素α抗体及其应用
- 本发明提供一种人源抗人多亚型干扰素α抗体及其编码基因与应用。运用X射线结晶学和计算机辅助药物设计方法对人源抗人干扰素α抗体AIA22进行分子设计与改造获得的干扰素α抗体能特异结合受体IFNAR2结合区；与抗原表位为受体I...
- 孙志伟王双杜鹏仇玮祎徐磊
- 文献传递
- 一株靶向IFNα多亚型的全人源治疗性抗体
- 性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一种表现有多系统损害的慢性系统性自身免疫病,其发病机制复杂.目前临床上的常规治疗手段主要是使用糖皮质激素和其它免疫抑制剂,不良反应严重.研究...
- 杜鹏徐磊王双仇玮祎孙志伟
- 关键词：系统性红斑狼疮Α干扰素
- 文献传递
- 表皮生长因子受体胞外区在哺乳动物细胞HEK293T中的分泌表达和鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:融合表达表皮生长因子受体(EGFR)胞外功能区,为制备针对该分子的特异性抗体提供可用的靶标抗原。方法:通过PCR扩增EGFR胞外区基因,将其克隆入真核表达载体pABhFc中,重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,进行EGFR的瞬时分泌表达,纯化获得电泳纯级的分泌蛋白,并通过ELISA、Western印迹、Biacore3000系统对融合蛋白进行鉴定。结果:经测序证实扩增得到了正确的EGFR胞外区基因序列,SDS-PAGE初步确认获得了单、双体的EGFR胞外区,ELISA检测证实双体融合蛋白hFc-EGFR可与商业化的EGF特异性结合,Western印迹检测证实单体融合蛋白His-EGFR可与商业化抗体特异性结合;经Biacore3000蛋白分子相互作用系统测定,双体融合蛋白hFc-EGFR与商业化抗体爱必妥的亲和力达0.5 nmol/L。结论:利用哺乳动物细胞HEK293T分泌表达系统获得了结构正确的单、双体2种类型的EGFR胞外区融合蛋白纯品,将用于抗EGFR特异性抗体的筛选。
- 张畅唐珮何阳阳杜鹏孙志伟王双庞晓斌
- 关键词：表皮生长因子受体胞外区真核表达分泌表达结合活性
- 重组人源抗人多亚型IFN-α抗体项目研究简介
- 系统性红斑狼疮(SLE)是一种表现有多系统受累的慢性系统性自身免疫病,发病机制复杂,危害严重.军事医学科学院生物工程研究所依托蛋白质工程研究室的全合成噬菌体人抗体库平台、高通量固相筛选平台、抗体成药性评价系统、蛋白质结晶...
- 杜鹏王双孙志伟
- 关键词：药物设计系统性红斑狼疮
- 抗体药物研发热点分析被引量：1
- 2017年
- 从新靶点、新技术、新适应证三个方面对当前抗体药物的研发热点进行了综述,并着重分析了肿瘤免疫治疗抗体、白介素抗体以及双特异性抗体的研究现状、特点和难点以及应用前景。
- 杜鹏孙志伟
- 关键词：肿瘤免疫治疗白介素双特异性抗体
- 抗α干扰素双特异性抗体的制备与初步评价被引量：1
- 2017年
- 目的:研制对α干扰素(IFN-α)中和活性有突破性提升的双特异性抗体。方法:以靶向IFN-α不同表位的中和单抗Amilimumab和Sifalimumab为基础,采用FIT-Ig(Fabs-in-tandem immunoglobulin)双特异性抗体平台技术,通过分子克隆方法构建针对IFN-α的双特异性抗体FIT2的表达载体,并在Free Style 293-F系统中进行瞬时转染表达;采用protein A柱亲和纯化目标双特异性抗体,SDS-PAGE初步考察目标抗体的相对分子质量、组分及纯度;采用forte BIO系统鉴定其整体结合活性,并分别确认双特异性抗体的2个抗原结合表位的活性;通过ELISA方法评价其特异性,37℃放置实验鉴定其稳定性,Daudi细胞增殖实验定量评价双特异性抗体的中和活性。结果:构建了双特异性抗体FIT2表达载体,在Free Style 293-F系统中实现了瞬转高效表达,表达量为127 mg/L,亲和纯化获得目标双特异性抗体FIT2,纯度可达98.5%;FIT2结构稳定,具有良好的特异性,未发现与其他类型的干扰素及细胞因子存在交叉反应;FIT2对IFN-α1b-His的结合活性显著优于2个亲本抗体,特别是解离过程的改善尤为明显;同时,FIT2有效保留了2个抗原结合表位的活性;细胞增殖实验结果显示,FIT2对IFN-α1b具有优越的中和活性,其中和效能显著高于任一亲本抗体,明显优于2个亲本抗体联用。结论:获得了对IFN-α1b中和活性有突破性提升的双特异性抗体FIT2,特异性良好且结构稳定,有望成为治疗IFN-α相关疾病的良好的成药候选分子。
- 陈鸿斌侯小娟袁旭东于晓妍徐磊王双郁雯科杜鹏孙志伟
- 关键词：双特异性抗体Α干扰素中和活性
- 人源抗人α干扰素抗体及其应用
- 本发明提供了一种人源抗人α干扰素抗体及其编码基因与应用。通过基因工程手段和噬菌体表面展示技术结合运用，从全合成单链人抗体库中筛选出抗人IFNα多个亚型的基因工程单链抗体，并获得其抗体的可变区基因序列，在此基础上构建全人单...
- 孙志伟王双杜鹏仇玮祎余云舟
- 文献传递
- 人源抗人多亚型干扰素α抗体及其应用
- 本发明提供一种人源抗人多亚型干扰素α抗体及其编码基因与应用。运用X射线结晶学和计算机辅助药物设计方法对人源抗人干扰素α抗体AIA22进行分子设计与改造获得的干扰素α抗体能特异结合受体IFNAR2结合区；与抗原表位为受体I...
- 孙志伟王双杜鹏仇玮祎徐磊
- 文献传递
