王晶
- 作品数：7 被引量：37H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家重点新产品计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 枯草芽孢杆菌表达检测载体的构建与生物素合成酶（BioB）的表达检测
- 生物素/(vitamin H/)是动物机体维持正常生理机能所必需的B族维生素之一,在畜牧业、食品及医药等领域应用广泛。我国所用的生物素大部分从美国、日本等国家进口,价格昂贵。因此,有必要进行生物素合成的研究。由于化学法生...
- 王晶
- 关键词：枯草芽孢杆菌
- 文献传递
- 大肠杆菌hemA基因的高效表达及对5-氨基乙酰丙酸合成的影响被引量：1
- 2007年
- 大肠杆菌(Escherichia coli)中的hemA基因编码谷氨酰tRNA还原酶,该酶是E.coli生物合成5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)途径中的限速酶。本试验在pEXT20-hem AE.coliBL21(DE3)表达载体的基础上,从质粒克隆hemA基因克隆到载体,构建表达载体pET28a-hemA,以探讨更佳的重组大肠杆菌hemA基因的表达效果。对其蛋白质进行纯化,测得发酵菌液上清液中5-ALA含量达到42.5 mg/L;并对上清提取液中卟啉类物质的积累量进行初步测定,发现403 nm处吸收峰值明显高于同条件发酵提取pEXT20-hemAE.coliBL21(DE3)重组菌。试验表明,用表达载体可以更好地表达hemA基因。
- 袁新宇刘锦妮王晶杨琼吴雪珍姜发堂杨明明
- 关键词：大肠杆菌5-ALA
- 枯草芽孢杆菌bioW基因在大肠杆菌中的表达及其对宿主生长的抑制作用
- 2009年
- 【目的】克隆枯草芽孢杆菌(B.subtilis)生物素基因(bioW),在bioW基因缺陷型大肠杆菌中进行表达,探讨其对bioW基因缺陷型大肠杆菌的遗传互补作用和对宿主的生长抑制作用,为生物素基因工程菌的构建奠定基础。【方法】用大肠杆菌表达载体pEXT20和枯草芽孢杆菌bioW基因构建表达载体pEXT20-bioW,并将其转化到大肠杆菌DH5α和生物素基因缺陷型大肠杆菌株R876中,构建重组菌DH5α(pEXT20-bioW)和R876(pEXT20-bioW)。分别将R876、DH5α(pEXT20-bioW)、R876(pEXT20-bioW)在不同培养基和不同IPTG浓度下进行培养,检测bioW基因对bioW基因缺陷型大肠杆菌株的遗传互补和生长抑制作用。【结果】在生物素限制性培养基中,只有同时加入庚二酸和IPTG时,R876(pEXT20-bioW)才能生长。在不含IPTG的LB培养基中,R876(pEXT20-bioW)生长正常;在添加不同浓度IPTG的LB培养基中,DH5α(pEXT20-bioW)和R876(pEXT20-bioW)生长均受到不同程度的抑制。【结论】bioW基因对bioW基因缺陷型大肠杆菌有遗传互补作用。在大肠杆菌中,bioW基因的表达对宿主有生长抑制作用。
- 杨明明杨朝霞张西锋王晶刘锦妮岑沛霖
- 关键词：枯草芽孢杆菌大肠杆菌
- 6株奶牛乳房炎肺炎克雷伯菌的分离、鉴定及生物学特性被引量：17
- 2019年
- 为研究陕西关中地区奶牛乳房炎肺炎克雷伯菌的流行情况,从某规模化奶牛场无菌采集乳样53份,进行细菌分离鉴定。通过细菌形态学观察、生化试验以及16S rRNA序列分析,共分离出6株肺炎克雷伯菌,并对其进行药物敏感性、生物被膜形成、random amplified polymorphic DNA(RAPD)分型以及小鼠致病性的试验。生化特性结果表明6株肺炎克雷伯菌对各种糖的分解能力无明显差异。药敏试验结果表明,6株菌均对恩诺沙星、阿米卡星、环丙沙星、链霉素、庆大霉素、四环素、美罗培南、头孢曲松和头孢他啶敏感,对青霉素和氨苄西林耐药。生物被膜表型检测结果表明,6株菌均可产生生物被膜,其中菌株KP4为中等黏附,其他5株为弱黏附,生物被膜成分中均含有胞外多糖,不含卷曲菌毛和纤维素。RAPD分型结果表明,分离的6株菌株共分3个基因型,其中C型占50.00%(3/6),B型占33.33%(2/6),A型占16.67%(1/6)。小鼠致病性结果表明,分离株对小鼠均具有较强的致病性,被感染小鼠的肝脏、脾脏和肺脏均有不同程度的出血。本试验为防控陕西省内肺炎克雷伯菌引起的奶牛乳房炎提供依据。
- 王乐王晶王丽娟范玉堂王妍李勤凡
- 关键词：奶牛乳房炎肺炎克雷伯菌生物被膜RAPD
- 枯草芽孢杆菌bioI基因的克隆和高效表达及BioI蛋白的纯化
- 2008年
- 【目的】克隆和表达枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)bioI基因并纯化表达产物。【方法】提取B.sub-tilis1A747基因组DNA,从中扩增bioI基因并将其克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)的表达载体pET-28a(+)上,构建bioI的表达载体pET28a-bioI。将重组质粒pET28a-bioI电转化到大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,对表达产物BioI用Ni2+-NAT亲和层析树脂进行纯化,并对纯化蛋白进行波长扫描。【结果】成功构建了表达载体pET28a-bioI,酶切鉴定结果正确并在大肠杆菌中表达成功,经IPTG诱导8 h后,重组蛋白BioI的表达量占总可溶性蛋白的20%;波长扫描发现,重组蛋白BioI在400 nm处有特征吸收峰。【结论】bioI基因克隆表达成功,其表达产物BioI具有P450蛋白的特征,为蛋白性质的进一步研究和抗体的制备奠定了基础。
- 龚月生王晶刘锦妮袁新宇姬生跃王俊杨明明
- 关键词：枯草芽孢杆菌大肠杆菌BL21(DE3)
- 耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究被引量：3
- 2008年
- 【目的】研究耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达,并检测其酶学性质,为耐热β-半乳糖苷酶的应用和工业化生产奠定基础。【方法】利用基因工程的原理和方法,将来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的耐热β-半乳糖苷酶基因(bgaB)克隆到大肠杆菌pET表达系统(pET-28a(+)),并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。将构建的重组菌(pET28a-bgaB)在含硫酸卡那霉素的液体LB培养基中以IPTG为诱导剂,对表达产物的最适反应温度、最适反应时间I、PTG诱导浓度、热稳定性及酶促动力学进行检测。【结果】成功构建了表达载体pET28a-bgaB,并测得耐热β-半乳糖苷酶的最适反应温度为65℃,最适反应时间为6 h,IPTG的最佳诱导浓度为1 mmol/L,且具有良好的热稳定性;在诱导后6 h,耐热β-半乳糖苷酶的表达量占菌体总可溶性蛋白的20%,表达效率较高;对透析蛋白进行蛋白质定量,蛋白质量浓度为0.75 mg/mL,透析蛋白的耐热β-半乳糖苷酶活性为75 U/mL,比活性为100 U/mg;酶促动力学研究表明,耐热β-半乳糖苷酶的反应常数为0.398μmol/mL,最大反应速度为27.435μmol/(min.mL)。【结论】耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中得到成功表达,并且在很大程度上提高了耐热β-半乳糖苷酶的活性。
- 龚月生刘锦妮王晶杨明明袁新宇
- 关键词：Β-半乳糖苷酶基因大肠杆菌酶学性质
- 犊牛开食料中适宜蛋白质水平的研究被引量：13
- 2009年
- 对于犊牛来说，在瘤胃微生物体系还没有建立起来的时候利用植物性饲料蛋白的能力很有限，但在50日龄左右，犊牛瘤胃微生物体系基本建立。此时在先进的饲养模式下犊牛已经断奶，因此犊牛必须摄食非乳品营养——植物性饲料来满足生长发育的需求。其中蛋白质水平和来源对保障瘤胃微生物生长、创造适宜的瘤胃内环境是非常重要的。
- 黄利强龚月生崔伟王晶刘锦妮
- 关键词：蛋白质水平犊牛开食料微生物体系瘤胃内环境
