王海峰
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国农业大学食品科学与营养工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划吉林省教育厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源弹性蛋白酶基因原核载体构建及表达
- 2010年
- 从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到了ELA2B基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体中。然后用限制性内切酶BamH I和HindⅢ对重组质粒pGEM-T easy/ELA2B和大肠杆菌E.coli表达质粒pET30a进行双酶切,成功构建了原核表达载体pET30a/ELA2B。将重组质粒转化大肠杆菌表达宿主BL21中,通过PCR和表型鉴定表明,ELA2B基因已经整合到大肠杆菌BL21染色体上。用IPTG对重组的大肠杆菌BL21进行诱导表达,得到的蛋白经SDS-PAGE分析结果表明:菌体中含有一明显特异性蛋白,大小为28 kD。经包涵体复性后在弹性蛋白酶活性检测平板上发现有代表弹性蛋白酶作用的透明圈产生,可初步证实表达产物具有生物活性。
- 王海峰许文涛苏春元黄昆仑罗云波谷新晰邱芳萍
- 关键词：大肠杆菌基因克隆蛋白表达
- 甘草中甘草酸的提取工艺研究被引量：5
- 2010年
- 采用氨性醇提取法,经粉碎、抽提、过滤等工艺过程从甘草中提取甘草酸,并利用响应面试验设计考察提取温度、提取时间、氨水浓度、乙醇浓度4因素对甘草酸提取率的影响。结果表明,甘草酸的最佳提取条件是:提取温度为40.28℃,提取时间为5.84 h,氨水浓度为0.41%,乙醇浓度为16.78%。最优条件下粗甘草酸的提取率达到66.40%。
- 王海峰邱芳萍
- 关键词：甘草甘草酸
- 人源弹性蛋白酶基因真核载体构建及表达
- 2011年
- 从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到了ELA2B基因,并将其克隆到pGEM-Teasy载体中。然后用限制性内切酶EcoRⅠ和NotI对重组质粒pGEM-Teasy/ELA2B和毕赤酵母质粒pPIC9K进行双酶切,并且通过PCR技术去除ELA2B的信号肽,成功构建了真核表达载体pPIC9K/ELA2B,并将其转入毕赤酵母表达宿主GS115中。得到150株转化子,经含不同浓度G418的YPD平板筛选获得20株高拷贝转化子。甲醇诱导表达后,发酵液上清经SDS-PAGE检测,获得了大小约为28ku的目的条带。通过酪蛋白平板检测发酵液上清,出现透明圈,初步证明获得了有生物活性的弹性蛋白酶。
- 王海峰许文涛苏春元邱芳萍罗云波谷新晰田洪涛黄昆仑
- 关键词：毕赤酵母基因克隆蛋白表达
