刘晓健
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：上海市浦东医院(复旦大学附属浦东医院)更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金上海市卫生局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默泡膜蛋白1对SW480细胞增殖与侵袭影响的研究被引量：2
- 2016年
- 目的泡膜蛋白1(vacuole membrane protein-1,VMP1)是近年来新发现的一个重要功能的抑癌基因。为明确VMP1在结直肠癌中的功能和意义,本研究通过慢病毒载体沉默结直肠癌细胞系SW480中VMP1基因的表达,探讨VMP1基因沉默后对结直肠癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用。方法应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测5种结直肠癌细胞系中VMP1的表达状况;设计人VMP1基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染VMP1高表达的结直肠癌细胞系,运用蛋白质印迹法鉴定其对VMP1基因的沉默效果;VMP1基因沉默后,通过MTT法和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力。结果 VMP1在5种细胞系中存在差异性表达。具有低转移潜能的HT-29和SW480细胞与具有高转移潜能的LoVo、RKO和SW620细胞相比,有更高的VMP1表达水平,其中mRNA表达差异有统计学意义,t=3.88,P=0.005;而蛋白表达差异有统计学意义,t=14.29,P<0.001。选取低转移细胞株中VMP1表达相对较高的SW480细胞作为研究对象,构建VMP1shRNA慢病毒载体沉默SW480细胞中VMP1的表达。蛋白质印迹结果提示,VMP1稳定沉默的SW480细胞构建成功。在稳定沉默VMP1基因后,MTT法显示SW480细胞的增殖速度在24和48h显著升高,F值分别为79.77和12.35,P值分别为<0.001和0.025。软琼脂克隆形成实验结果显示,SW480细胞的集落数目显著增多,F=75.23,P<0.001。二者均表明SW480细胞增殖能力增强。流式细胞技术检测显示,VMP1基因沉默后可抑制SW480细胞凋亡,F=84.44,P<0.001。Transwell迁移实验结果显示,VMP1沉默后SW480迁移能力增强,F=155.90,P<0.001。结论 VMP1基因可能与结直肠癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了结直肠癌的发生、发展。
- 郭显智叶小磊车晓航唐来芹刘晓健余明华
- 关键词：结直肠肿瘤细胞增殖迁移
- 重组人骨桥蛋白促进结直肠癌HCT116细胞上皮-间质转化被引量：1
- 2017年
- 目的:探究外源性重组人骨桥蛋白(recombinant human osteopontin,rhOPN)对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、侵袭以及上皮-间质转化的影响。方法:实验分为对照组、rhOPN组和anti-rhOPN组,结直肠癌HCT116细胞不进行任何处理或分别用400 ng/mL rhOPN、10μg/mL抗rhOPN抗体处理。之后,应用CCK-8法、划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测各组细胞中E-cadherin、N-cadherin以及vimentin的表达情况。结果:rhOPN或抗rhOPN抗体处理HCT116细胞12 h后,rhOPN组细胞增殖能力明显强于对照组(P<0.05),anti-rhOPN组细胞增殖能力明显弱于对照组(P<0.05)。rhOPN或抗rhOPN抗体处理HCT116细胞24 h后,rhOPN组细胞迁移率高于对照组(P<0.01),anti-rhOPN组细胞迁移率低于对照组(P<0.05)。rhOPN或抗rhOPN抗体处理HCT116细胞36 h后,rhOPN组侵袭细胞数高于对照组(P<0.01),anti-rhOPN组侵袭细胞数低于对照组(P<0.05)。rhOPN或抗rhOPN抗体处理HCT116细胞24 h后,rhOPN组细胞中N-cadherin和vimentin蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05,P<0.01),E-cadherin蛋白的表达水平则低于对照组(P<0.01);anti-rhOPN组细胞中N-cadherin和vimentin蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05,P>0.05),E-cadherin蛋白的表达水平则高于对照组(P<0.05)。结论:rhOPN可以促进结直肠癌HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭,这一作用可能与细胞上皮-间质转化有关。
- 黄仁宏全应军陈进宏崔鹏闵志均刘晓健
- 关键词：结直肠肿瘤骨桥蛋白质细胞运动上皮-间质转化
- 霍奇金淋巴瘤中IκBα基因异常的研究
- 目的：观察霍奇金淋巴瘤中IκBα蛋白、mRNA的表达特征及基因突变，并探讨其分子病理学意义。方法：应用免疫组织化学技术观察22例霍奇金淋巴瘤IκBα的蛋白表达;应用原位杂交技术检测22例霍奇金淋巴瘤中IκBα的mRNA表...
- 刘晓健
- 关键词：霍奇金淋巴瘤突变细胞株
