刘宇思
- 作品数：13 被引量：9H指数：2
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- 鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白可增强DnaJ蛋白的免疫反应被引量：2
- 2014年
- 目的:明确鞭毛蛋白的黏膜佐剂作用,并研究其与DnaJ蛋白联合免疫对肺炎链球菌感染的保护作用。方法:含有重组质粒pET-28(a)/鞭毛蛋白基因的大肠杆菌DE3经IPTG诱导后表达鞭毛蛋白,纯化后用于后期动物实验如下:将C57BL/6小鼠随机分为四组通过鼻腔分别滴入鞭毛蛋白(10μg)与DnaJ蛋白(10μg)混合剂(实验组)、DnaJ蛋白(10μg)(对照组1)、DnaJ蛋白(10μg)与GST蛋白(10μg)混合剂(对照组2),每组均30μl。通过检测抗体的效价、亚型以及细胞因子水平来评估鞭毛蛋白能否提高肺炎链球菌DnaJ蛋白诱导的免疫效应;然后用肺炎链球菌D39(5×107CFU)进行鼻腔攻毒,观察小鼠的生存率,以评估其保护效应。结果:实验组较对照组产生更高效价的血清IgG(其中主要产生IgG1)和更高水平的细胞因子IFN-γ、IL-17A和IL-4;另一方面实验组对致死性D39感染的保护率达60%,DnaJ蛋白免疫组的保护率为50%。结论:鞭毛蛋白与DnaJ蛋白联合应用可以增强宿主对DnaJ蛋白的免疫反应,并且对致死剂量的肺炎链球菌感染有保护作用,提示鞭毛蛋白可以作为肺炎链球菌DnaJ蛋白疫苗的佐剂应用。
- 严明刘宇思张帅胥文春王虹张雪梅
- 关键词：鞭毛蛋白肺炎链球菌佐剂
- 肺炎链球菌溶血素突变体及其作为粘膜免疫佐剂的应用
- 本发明公开了肺炎链球菌溶血素突变体及其作为粘膜免疫佐剂的应用，所述的突变体的基因包括核苷酸序列为SEQ？ID？NO.2的ΔPly。本发明以肺炎链球菌溶血素突变体(ΔPly)为粘膜免疫佐剂，制备肺炎链球菌融合蛋白质疫苗，用...
- 尹一兵张雪梅刘宇思胥文春王虹
- 文献传递
- 人胱抑素C的原核可溶性表达纯化及多克隆抗体的制备
- 目的构建人胱抑素C(Cystatin C,CysC)基因的原核表达质粒pET32(a)-CysC,表达带有硫氧还原蛋白(Trx)的Trx-CysC融合蛋白,制备人Trx-CysC多克隆抗体。方法在不改变氨基酸序列的前提下...
- 陈特黄美容王鹏刘宇思王虹张雪梅胥文春
- 无融合标签人胱抑素C重组蛋白的制备
- 2012年
- 目的构建人胱抑素C(CysC)基因的原核表达质粒pCold TF-CysC,表达并制备去标签蛋白的CysC。方法用人CysC的全长编码基因插入原核表达载体pCold TF并测序鉴定。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、镍柱纯化后获得带有His标签的重组蛋白TF-CysC。利用GST-HRV 3C蛋白酶去除该融合蛋白的TF标签,再经分子筛一步法同时去除TF标签、3C蛋白酶获得CysC,SDS-PAGE鉴定其纯度。用该CysC免疫新西兰大白兔,制备抗血清,并用间接ELISA及Western blot鉴定。结果测序结果与Genbank中人CysC序列一致,实现了CysC可溶性高表达。纯化的无标签CysC纯度大于95%,分子质量约为13.3 ku,与预期相符。免疫家兔后,获得的抗血清效价达到1∶4×106以上,能特异性识别市售CysC蛋白。该蛋白稳定性良好,在4℃保存一个月未见明显下降。结论成功应用原核表达系统,获得了可用作免疫诊断试剂标准品的CysC,为进一步建立CysC的免疫检测方法奠定了基础。
- 陈特刘宇思谌海兰陈曦王虹张雪梅胥文春
- 关键词：胱抑素C原核表达蛋白纯化
- 无标签NT-proBNP重组蛋白的获得及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2012年
- 目的通过原核表达,获得不带标签的NT-proBNP重组蛋白,并用其免疫新西兰大白兔,制备兔抗NT-proBNP抗体。方法从重组菌pET-32a(+)-NT-proBNP提取重组质粒,通过PCR扩增出目的 DNA片段,插入pCold TF载体,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白。经镍柱亲和纯化、HRV 3C蛋白酶酶切、镍柱亲和纯化,制备不带标签的纯蛋白质,并用临床商品化试剂盒验证其抗原性。用该蛋白质免疫新西兰大白兔制备抗体,western blot鉴定其特异性。结果成功获得高纯度的不带标签的NT-proBNP蛋白,该蛋白质能被商品化的试剂盒识别。用该蛋白质免疫新西兰大白兔成功制备出高效价高特异的抗体。结论成功制备高纯度的无标签NT-proBNP蛋白及其多克隆抗体,为NT-proBNP在临床上的广泛应用奠定了基础。
- 谌海兰陈曦徐绣宇谢佳瑛刘宇思赵家宁曾令斌陈特张雪梅尹一兵胥文春
- 关键词：N末端B型钠尿肽原原核表达蛋白质纯化多克隆抗体
- 去氧紫草素的应用
- 本发明公开了去氧紫草素(5，8-二羟基-2-(4-甲基-3-苯基)-1，4-萘二酮)在体外作为组氨酸激酶VicK抑制剂或者在制备组氨酸激酶VicK抑制剂中的应用，对体内对肺炎链球菌及临床耐青霉素肺炎链球菌均有一定的抗菌作...
- 尹一兵张雪梅张帅胥文春刘宇思
- 文献传递
- 热灭活肺炎链球菌D39X疫苗黏膜免疫小鼠可抵抗不同亚型肺炎链球菌感染被引量：2
- 2013年
- 目的研制一种安全、有效且易于生产的热灭活肺炎链球菌死菌疫苗D39X,评价其作为肺炎链球菌候选疫苗的可行性。方法通过热灭活肺炎链球菌突变菌株D39X,得到无毒的死菌疫苗,鼻腔免疫Balb/c小鼠,每周1次,连续4周。末次免疫1周后,间接ELISA检测免疫小鼠特异性抗体水平;同时检测抗体亚型及细胞因子水平,并进行不同菌株攻毒的主动保护实验。结果免疫组小鼠血清中特异性IgG和唾液中特异性IgA显著升高,IgG亚型主要为IgG1和IgG2b;免疫小鼠脾细胞特异性分泌IL-4和IL-17A;19F型肺炎链球菌在免疫小鼠中的载量显著低于对照组小鼠;灭活D39X黏膜免疫可有效延长肺炎链球菌D39、6B型和3型感染小鼠的生存时间;被动免疫也具有保护作用。结论热灭活的D39X黏膜免疫可诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫反应,有效抵抗不同血清型肺炎链球菌的感染,是一种有开发前景的肺炎链球菌疫苗。
- 徐绣宇王一平蔡莺莺刘宇思王虹胥文春何於娟尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌黏膜免疫
- 粘膜免疫DnaJ-△A146Ply融合蛋白对小鼠肺炎链球菌感染的保护效果及机制研究
- 目的:肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae，S.pn）主要定植于人类上呼吸道，能引起脑膜炎、中耳炎、肺炎、败血症等一系列严重的疾病，在全世界范围内有较高的发病率和病死率，尤其是对5岁以下的儿童和老...
- 刘宇思
- 关键词：肺炎链球菌融合蛋白疫苗粘膜免疫
- 人附睾蛋白4化学发光定量测定法的建立与评价被引量：1
- 2014年
- 目的建立人附睾蛋白4（HE4）的化学发光定量检测方法,并进行方法学评价。方法血清中HE4与包被抗HE4单克隆抗体的微磁珠和辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗HE4单克隆抗体反应形成双抗体夹心结构,HRP可催化发光底物液（含鲁米诺-H2O2-增强剂）产生大量光信号,根据光信号的量计算血清中HE4的浓度。依据国家体外诊断试剂性能评价指南性文件和美国临床和实验室标准化协会（CLSI）指南性文件,对本方法进行系统评价。结果建立的方法空白限（LoB）为1.014pmol/L、检测限（LoD）为5.252 pmol/L、定量检测限（LoQ）为10.568 pmol/L;甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）≤400 IU/mL、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）≤1 777μg/L、糖类抗原（carbohydrate antigen,CA）125≤3 500 U/mL、CA19-9≤3 500U/mL对本方法无明显交叉反应;线性范围为20-1 700 pmol/L;在100 000 pmol/L时未出现明显钩状（Hook）效应;批内变异系数（CV）为1.5%-3.6%;日间CV为3.8%-6.4%;回收率为98.36%-99.14%;血红蛋白≤4.8 g/L、胆红素≤1 077.5μmol/L、乳糜微粒≤6 000浊度、生物素≤50μg/L、类风湿因子≤1 000 U/L对测定结果无明显影响;37℃保存7 d后相对偏差为-6.63%-10.23%;建立的方法（Y）与Fujirebio公司的ELISA试剂（X）进行方法学比对,相关曲线为Y=1.023X-12.280,r=0.989 7（P〈0.01）。结论本研究建立的HE4磁微粒化学发光免疫测定法各项性能符合临床实验室需求,为卵巢癌的辅助诊断提供了有效工具。
- 罗湘宇刘宇思曾令斌赵家宁何敏杨卫平尹一兵胥文春
- 关键词：化学发光法卵巢癌
- 肺炎链球菌组氨酸激酶VicK的全长表达及其保守性分析被引量：1
- 2014年
- 目的全长表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)VicK蛋白并制备其多克隆抗体,对其进行保守性分析和亚细胞定位,为其作为抗菌药物筛选靶点提供实验依据。方法利用分子生物学技术构建pET-28a(+)-vicK原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达,经Ni-NTA亲和纯化后,通过试剂盒检测其激酶活性。将纯化的VicK蛋白免疫Balb/C小鼠,并用ELISA和Western blot方法分别检测其多克隆抗体的效价及特异性。采用流式细胞术对VicK蛋白进行表面定位分析。结果成功获得VicK全长蛋白,酶活性检测结果提示具有ATP激酶活性。VicK蛋白免疫小鼠获得效价达1:125000以上的多克隆抗体。Western Blot结果显示其能特异地识别1型、2型、3型、4型、6B及19F型S.pn中的VicK蛋白。流式结果表明VicK蛋白主要位于胞内。结论获得具有ATP激酶活性的S.pn VicK全长蛋白,且该蛋白保守表达于S.pn胞内。
- 张帅刘宇思王虹王哲王维张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌表达纯化多克隆抗体激酶活性
