公共文化服务平台

成骨肉瘤细胞SOSP-9607中miRNA的克隆与验证被引量：19: 2007年; 背景与目的:microRNA(miRNA)是一类非编码蛋白,并参与转录后调节的单链小分子RNA(约20～25个碱基),对基因表达具有重要调控作用,与肿瘤的发生存在着密切的关系。本研究拟克隆成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中miRNA,并对部分功能性基因进行验证。方法:以SOSP-9607细胞作为实验对象,分离提取细胞内小片段RNA(≤200nt),多聚腺苷酸化和5′连接子连接后,通过RT-PCR进行反转录和扩增,克隆到pCR4-TOPO载体上得到大约109bpDNA片段,测序后经过生物信息学分析确定miRNA的表达情况。根据当前miRNA的研究现状,在克隆到的miRNA中选取部分功能性miRNA和新发现miRNA,合成相应探针后与从SOSP-9607细胞、HeLa细胞和成骨肉瘤组织中分离出的小片段RNA进行Northern印迹验证。结果:克隆测序后得到182个克隆体,经生物信息学分析发现有47个miRNA(25种),其中含有23种已知的miRNA和2种Nature杂志上预测的miRNA(miR-165和miR-166)。选取的三条实体瘤相关的miRNA(miR-21、miR-20a、miR-17-5p)以及两条预测的miRNA进行Northern印迹验证,miR-21、miR-20a、miR-17-5p在SOSP-9607细胞和成骨肉瘤组织中均表达,预测的miR-165和miR-166在SOSP-9607细胞和成骨肉瘤组织中亦均表达,但miR-166在HeLa细胞中没有表达。结论:克隆了SOSP-9607细胞中的miRNA,并验证了部分功能性miRNA的表达,提示miRNA与肿瘤发生可能有密切的关系。; 高杰杨彤涛裘秀春鱼兵韩建伟范清宇马保安; 关键词：骨肉瘤 MICRORNA 克隆 NORTHERN BLOT

mirRNA-17-5p抑制物对骨肉瘤细胞系SOSP_9607增殖和凋亡的影响被引量：1: 2010年; 目的:探讨miR-17-5p抑制物对于骨肉瘤细胞系SOSP_9607细胞增殖和凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,进一步计算抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡。将SOSP_9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-17-5p抑制物(hsa-miR-17-5pinhibitors)抑制SOSP_9607细胞内miR-17-5p的活性。结果:与对照组相比,实验组显著抑制SOSP_9607细胞的增殖,有明显的剂量依赖性(P<0.01)。随着浓度从50nmol/L逐渐增加至200nmol/L,抑制率逐渐增高(P<0.01)。实验组凋亡率(9.6±1.8)%与阴性对照组凋亡率(3.5±0.4)%相比明显增高(P<0.01)。结论:miR-17-5p抑制物通过抑制SOSP_9607细胞中miR-17-5p的活性对SOSP_9607细胞的增殖和凋亡发挥重要作用。; 赵广义赵健高杰许啸闫康吴家昌杨彤涛马保安; 关键词：骨肉瘤细胞增殖细胞凋亡

miR-15a和miR-16-1模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响被引量：1: 2011年; 目的:探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法:将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a+miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物(hsa-miR-15a mimics)上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果:通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高(P<0.05);实验组的细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。结论:上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。; 蔡承魁贠喆张涛姜扩高杰裘秀春马保安; 关键词：骨肉瘤细胞凋亡细胞增殖

microRNA和干细胞的研究进展被引量：3: 2007年; 目的介绍microRNA（miRNA）起源、功能及其与干细胞的关系的研究进展。方法查阅近年有关文献，并对miRNA和干细胞进行综合分析。结果miRNA是一类非编码蛋白并且参与转录后调节的单链小分子RNA（20～25个碱基），对基因表达具有重要调控作用。近年来发现存在着一个庞大的miRNA家族，参与调控生物体生长发育等许多复杂的生命过程，并且与干细胞的自我更新和多向分化存在着紧密关联。结论miRNA作为一种新的调控基因表达的小分子RNA，可以成为干细胞研究的新途径。; 高杰杨彤涛裘秀春范清宇马保安; 关键词：MICRORNA 干细胞基因调控

miR-30c对人骨髓间充质干细胞成骨潜能的影响: 目的：前期研究中发现miR-30c在人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的成骨分化过程中呈低表达状态,本文拟观察抑制miR-30c的表达对人骨髓间充质干细胞(MSC)成骨潜能的影响。方...; 高杰; 关键词：骨髓间充质干细胞 MIRNA 成骨分化

人GST-OPGL融合蛋白的原核表达与抗体制备: 2006年; 目的:克隆人骨保护素配体(OPGL)编码区基因,构建融合表达载体,在大肠杆菌中表达,并制备抗体。方法:采用RT-PCR法得到人骨保护素配体(OPGL)编码区cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-3,转化大肠杆菌感受态细胞JM 109,0.1mMβ-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,行SDS-PAGE电泳。将此融合蛋白免疫新西兰兔,W estern b lot鉴定。结果:获得人骨保护素配体编码区cDNA,构建原核表达载体pGEX-OPGL,转化菌株可表达人GST-OPGL蛋白,蛋白分子量约为43KD,蛋白表达量约为菌体总蛋白的21%。W estern b lot检测表明获得了免疫活性强的兔抗人的多克隆抗体。结论:获得人骨保护素配体编码区cDNA,在大肠杆菌中表达了人GST-OPGL融合蛋白,并获得了高效多抗。; 杨彤涛张勇高杰杨辉刘继中陈苏民范清宇马保安; 关键词：骨保护素配体基因融合

microRNA-194模拟物对成骨肉瘤细胞系SOSP_9607生物学特性的影响被引量：2: 2011年; 目的:观察miR-194模拟物对于成骨肉瘤细胞系SOSP_9607细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP_9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-194模拟物(hsa-miR-194mimics)转染成骨肉瘤细胞系SOSP_9607,增强SOSP_9607细胞内miR-194的活性。结果:与对照组比较,实验组细胞的增殖能力明显下降。实验组凋亡率(10.1±0.22)%与阴性对照组凋亡率(3.3±0.19)%相比明显增高(P<0.01)。与对照组比较,实验组细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少(P<0.01)。结论:通过转染miR-194模拟物增强SOSP_9607细胞中miR-194的活性对SOSP_9607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。; 靳雷高杰刘云燕马琼杨彤涛裘秀春范清宇马保安; 关键词：骨肉瘤细胞增殖细胞凋亡

miRNA在人骨髓来源间充质干细胞软骨诱导分化过程中的表达被引量：3: 2013年; 目的:研究miRNAs在人骨髓来源间充质干细胞软骨诱导分化过程中的表达情况。方法:以从骨髓中分离培养的MSCs及软骨诱导培养后的细胞为实验对象,利用基因芯片检测miRNAs的表达情况,由SAM分析得到MSCs较其诱导培养细胞中差异表达的miRNAs,再进行生物信息学分析。结果:①分离培养出的MSCs经软骨诱导培养21天后,已具有软骨细胞特性,经芯片检测并SAM分析,软骨诱导培养的细胞较MSCs高表达的miRNAs有6个:hsa-miR-572、hsa-miR-130b、hsa-miR-193b、hsa-miR-28、hsa-miR-152、hsa-miR-560;软骨诱导培养的细胞较MSCs低表达的miRNAs有2个:hsa-miR-424、hsa-miR-122a。②利用TargetScan预测其靶基因,并行生物信息学分析,其中hsa-miR-130b、hsa-miR-193b、hsa-miR-152及hsa-miR-424的预测靶基因中多为参与细胞分化、骨形成、软骨形成及干细胞表型相关的基因。结论:hsa-miR-130b、hsa-miR-193b、hsa-miR-152和hsa-miR-424等对人骨髓来源间充质干细胞的软骨分化起着重要调控作用。; 高杰韩建伟关凯杨彤涛李放; 关键词：间充质干细胞软骨分化 MICRORNA

miR-148a对人骨髓间充质干细胞成骨潜能的影响: 目的：观察抑制miR-148a的表达对人骨髓间充质干细胞(MSC)成骨潜能的影响。方法：由健康青年男性髂骨取骨术中抽取骨髓分离培养MSC,将其诱导分化为成骨细胞,通过实时定量PCR检测miR-148a在MSC及其诱导分化...; 杨彤涛高杰范清宇马保安; 关键词：骨髓间充质干细胞 MIRNA 成骨分化

人重组型caspase-6融合蛋白对骨肉瘤E10细胞的靶向促凋亡作用: 2007年; 目的:探讨Her2靶向重组人caspase-6融合蛋白对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用。方法:将抗Her2单链抗体基因e23sFv与绿脓杆菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和重构型caspase-6基因连接,构建成immunocaspase-6(e23sFv-PEⅡ-caspase-6)基因,将其克隆入质粒pCMV中,阳离子脂质体包裹法转染E10细胞;HE染色、电子显微镜观测转染后细胞形态学变化;免疫细胞化学染色检测目的基因表达;MTT法检测目的基因转染后细胞的生长状况。结果:目的基因转染后,HE染色、电子显微镜观察到细胞呈现典型的凋亡特征,免疫细胞化学染色检测出caspase-6的表达,MTT法检测发现细胞的增殖被明显抑制(P≤0.01)。结论:Her2靶向重组的人caspase-6融合蛋白能识别、结合Her2+骨肉瘤E10细胞,并促使其凋亡。; 单乐群周本根裘秀春许彦鸣张正平李伟高杰马保安杨安钢范清宇; 关键词：骨肉瘤融合蛋白

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

高杰

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

高杰

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈