楼莎
- 作品数：7 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程研究所更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金协和青年科研基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- pIRES<,2>-AcGFP<,1>-Nuc-TFPI真核双表达载体的构建及鉴定
- 人类组织因子途径抑制因子（TFPI）是外源性凝血途径的主要抑制因子，具有抑制FXa和FⅦa-TF复合物的功能，是机体主要的抗凝血因子之一。由于TFPI兼具抑制血栓形成、平滑肌细胞增殖和单核细胞趋化的三重功能，因此在血管再...
- 楼莎
- 关键词：GFP基因治疗血管再狭窄
- 文献传递
- 含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体及构建方法
- 本发明公开了含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体及构建方法，载体是用下述方法制成：以序列表SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所述序列为PCR引物，以pIRES-TFPI为模板，扩增出人组织因子途径...
- 冷希岗楼莎宋丽萍朱敦皖董霞刘兰霞
- 文献传递
- 组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH 3T3细胞中表达
- 2011年
- 目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚酶链反应(PCR)扩增TFPI全长cDNA,经酶切后插入到pIRES2-AcGFP1-Nuc载体中,构建成双顺反子真核表达载体,重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFP1-Nuc-TFPI。将其转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达,以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达。结果经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达;RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高。结论成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体,并使其在NIH3T3细胞中顺利表达。
- 宋丽萍楼莎朱敦皖刘兰霞张海玲董霞董庭婷冷希岗
- 关键词：组织因子途径抑制因子绿色荧光蛋白血管再狭窄
- 生物载体与生物大分子对分子信标探针应用的影响
- 目的明确实验研究中常用的某些物质对分子信标(molecular beacons,MB)探针的结构稳定性及杂交前后荧光强度的影响,初步了解影响与作用的程度,从而尽可能规范MB探针的杂交反应条件,减少或避免误差或偏差,有效提...
- 周波王海燕刘珍宝楼莎朱敦皖张海玲宋丽萍冷希岗
- 文献传递
- 应用纳米与分子探针技术对IgG抗原水平的检测
- 2009年
- 人们研究并逐步认识了纳米金与DNA等相互作用的特性和条件,并对以纳米金为基础发展起来的生物条码技术进行了更加深入的研究与应用。基于纳米金的生物条码及其相关技术研究与应用日益广泛,并不断有创新,本研究应用纳米技术并结合分子探针技术对低浓度的抗原水平进行检测。该生物条码技术常被用于检测某些蛋白、核酸、细胞或细胞因子的水平,并由此形成了不同于PCR、ELISA但仍具有高灵敏度特性的检测方法。通过磁性微球标记单抗以捕获、富集待测抗原,修饰多抗与亲和素的纳米金并结合分子信标探针起到信号扩增的作用。通过二硫键(—S—S—)分子信标探针茎部3’端的碱基T连接一生物素分子。待测抗原可将磁球与纳米金系统进行连接,然后应用二硫苏糖醇(DTT)将连接于纳米金上的MB切割下来,并与其环部完全互补配对的靶序列杂交后测定荧光强度。荧光强度与待测抗原水平(含量)相关。
- 周波王海燕楼莎刘珍宝朱敦皖冷希岗
- 关键词：分子探针磁性微球分子信标生物素
- 双顺反子表达人组织因子途径抑制因子和绿色荧光蛋白重组病毒的构建及其在内皮祖细胞中表达被引量：1
- 2010年
- 目的 构建双顺反子表达人组织因子途径抑制因子（TFPI）与绿色荧光蛋白（GFP）的逆转录病毒表达载体pMSCV-TFPI-IRES-GFP,并观察其在大鼠内皮祖细胞（EPCs）中的表达,为进一步研究TEPI在预防血管再狭窄中的作用奠定基础.方法 将人全长TFPI cDNA亚克隆到逆转录病毒载体pMSCV-IRES-GFP中,获得定向插入重组子pMSCV-TFPI-IRES-GFP,采用酶切图谱分析和测序进行鉴定.用磷酸钙法经293T细胞包装,收集病毒上清,感染EPCs.用荧光显微镜和流式细胞术观察感染后细胞内GFP表达情况.RT-PCR检测EPCs中TFPI mRNA的表达水平,ELISA法检测EPCs细胞培养上清中TFPI蛋白的含量.结果 经限制性内切酶酶切图谱分析证实重组病毒中含有人TFPI的cDNA片段,基因测序结果与Genebank中TFPI cDNA序列相符.荧光显微镜观察及流式细胞仪检测显示,90%以上的感染细胞中存在GFP表达;RT-PCR分析显示,重组病毒感染细胞中TFPI mRNA水平明显增高;ELISA法检测发现,感染重组病毒的EPCs培养上清中有TFPI蛋白表达.结论 本研究成功构建重组pMSCV-TFPI-IRES-GFP真核表达载体,其在EPCs中能够同时表达TFPI和GFP,为TFPI基因结合血管内皮祖细胞进行血管再狭窄防治研究的进一步深入开展奠定了良好实验基础.
- 王海燕宋丽萍朱敦皖周波刘珍宝楼莎冷希岗
- 关键词：内皮祖细胞逆转录病毒载体组织因子途径抑制因子
- 应用纳米与分子探针技术对IgG抗原水平的检测
- 本实验主要应用纳米技术并结合分子探针技术对低浓度的抗原水平进行检测.通过标记单抗的磁性微球捕获、富集待测抗原,修饰多抗与亲和素的纳米金并结合分子信标探针则起到信号扩增的作用.通过二硫键(-S-S-)分子信标探针茎部3&#...
- 周波王海燕楼莎刘珍宝朱敦皖冷希岗
- 关键词：分子探针技术分子信标
