张洪昆
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：山东大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人Tim-3启动子的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建
- Tim-3(T-cell immunoglobulin-and mucin-domain-con'taming molecule-3,T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-3)是新近发现的免疫调节分子，特异表达于分化的Th1细胞，...
- 张洪昆
- 关键词：启动子过敏性疾病免疫性疾病逆转录病毒病毒表达
- 文献传递
- 人Tim-3启动子的克隆及其真核报告质粒的构建
- 2008年
- 目的克隆人Tim-3基因5′端非编码区处具有启动子活性的片段,构建其真核报告质粒,为进一步研究Tim-3表达调控奠定基础。方法以人基因组DNA为模板,针对人Tim-3启动子5′端非编码区处包括翻译起始点ATG和转录起始点TSS在内的-898^+242片段,设计特异性引物,PCR扩增该片段,命名为Tim-3P2,经双酶切后克隆入pGL3-Basic载体SacⅠ、XhoⅠ位点,构建pGL3-Tim-3P2荧光素酶报告质粒,与内参照pRL-TK用脂质体法瞬时共转染COS-7、RAW264.7和B16细胞系,通过双荧光素酶活性检测确定其启动子活性。结果pGL3-Tim-3P2经PCR、双酶切及DNA测序分析鉴定正确无误;pGL3-Tim-3P2转染RAW264.7和B16细胞(两种细胞均可表达内源性Tim-3)24 h和48h,双荧光素酶活性检测显示其启动子相对活性约为pGL3-Basic空载体的2倍;而pGL3-Tim-3P2转染不表达内源性Tim-3的COS-7细胞后检测不到荧光素酶活性。结论成功克隆并构建含有人Tim-3启动子的真核报告质粒,该载体具有特异性Tim-3启动子活性,为进一步研究Tim-3表达调控奠定了基础。
- 张洪昆鞠瑛栾芳郭春马春红
- 关键词：启动子
