张国强
- 作品数：3 被引量：12H指数：1
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种克服靶细菌限制修饰障碍导入外源DNA的方法
- 本发明公开了一种克服靶细菌限制修饰障碍导入外源DNA的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤：1)将靶细菌基因组中所有DNA甲基转移酶编码基因在自身限制修饰系统缺失的大肠杆菌中共表达，得到重组菌A；2)将外源DNA分子导入...
- 温廷益张国强邓爱华
- 文献传递
- 一种克服靶细菌限制修饰障碍导入外源DNA的方法
- 本发明公开了一种克服靶细菌限制修饰障碍导入外源DNA的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤：1)将靶细菌基因组中所有DNA甲基转移酶编码基因在自身限制修饰系统缺失的大肠杆菌中共表达，得到重组菌A；2)将外源DNA分子导入...
- 温廷益张国强
- 含苏氨酸操纵子重组质粒的构建及其对大肠杆菌L-苏氨酸积累的影响被引量：12
- 2009年
- 【目的】通过分子生物学手段构建重组质粒,将其转入野生型大肠杆菌W3110,分析含苏氨酸操纵子基因的质粒及质粒定点突变解除反馈抑制时,对L-苏氨酸积累的影响。【方法】以W3110染色体DNA为模板,PCR扩增苏氨酸操纵子基因,即启动子THrLp、编码前导肽基因thrL以及thrA、thrB、thrC基因,通过重叠延伸PCR的方法对thrA基因定点突变,解除苏氨酸对它的反馈抑制,构建出重组表达质粒pWYE112和pWYE134,5L发酵实验测定L-苏氨酸的产量。【结果】经5L发酵罐发酵产酸实验,W3110的L-苏氨酸产量为0.036±0.004g/L,携带含苏氨酸操纵子质粒的W3110菌株L-苏氨酸产量为2.590±0.115g/L,质粒上thrA解除反馈抑制后,L-苏氨酸的产量增加到9.223±1.279g/L。【结论】过表达苏氨酸操纵子基因可以使L-苏氨酸积累,进一步解除thrA基因的反馈抑制,可以增强L-苏氨酸积累的效果,为L-苏氨酸工程菌改造的进一步研究奠定了基础。
- 张雪闫继爱于雷张国强张芸陈宁温廷益
- 关键词：L-苏氨酸重叠延伸PCR大肠杆菌发酵定点突变
