危敏
- 作品数：47 被引量：97H指数：5
- 供职机构：深圳市南山区妇幼保健院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 应用DNA芯片技术研究细胞松弛素B诱导K562细胞脱核的分子机制
- 该研究观察到在体外培养的条件下,CB对K562细胞有诱导脱核作用,且这种作用与药物浓度呈正相关,并随着处理时间的延长而增强.同时CB对K562细胞生长增殖有明显抑制作用.为进一步阐述CB作用的分子机制,我们首先应用限制性...
- 危敏
- 关键词：K562细胞细胞松弛素B限制性显示技术CDNA芯片
- 文献传递
- 同时进行HBV、HCV检测60-mer长链寡核苷酸芯片的研制
- 2007年
- 孙朝晖马文丽危敏王从容王蜀燕石玉玲
- 关键词：寡核苷酸芯片HCV检测CDNA芯片长链
- HPV病毒检测分型芯片的研制和优化
- 2009年
- 研制和优化寡核苷酸芯片以初步实现对多种常见HPV（Human papillomavirus）病毒的分型检测．应用生物学软件对四型常见HPV病毒（6、11、16、18型）的全基因组序列进行分析，设计具有型特异性、熔解温度（Tm）相近的-60mer寡核苷酸探针，对玻片片基进行优化处理后，点样制备成寡核苷酸基因芯片．将含HPV全长基因序列的质粒作为阳性标准品，利用梯度限制性荧光标记技术对其进行荧光标记，标记好的样品与芯片杂交．结果显示HPV样品与相应的型特异性探针杂交有明显的荧光信号，而与阴性对照探针和空白对照探针没有杂交信号．通过对芯片片基处理和样品荧光标记方法的优化，可以提高芯片检测的杂交特异性和荧光信号强度．
- 危敏马文丽孙朝晖张晋芳李凌郑文岭
- 关键词：寡核苷酸芯片
- 应用寡核苷酸芯片对乙型肝炎病毒转染HepG2细胞基因表达谱的研究
- 2008年
- HBV与肝细胞之间相互作用的分子机制还不清楚，对HBV蛋白调控宿主细胞基因表达情况也了解甚少。本实验选用基因芯片进行HBV基因表达谱改变的研究，筛选HBV感染应答基因，探讨HBV感染的分子致病机制，寻找预防和治疗HBV感染的靶点。
- 孙朝晖杨慧兰危敏王从容石玉玲
- 关键词：表达谱
- 长链非编码RNA SPATA31D5P吸附微小RNA-320a促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭
- 2021年
- 目的乳腺癌(BC)中存在多种长链非编码RNA(lncRNA)的异常表达,并且与生存预后密切相关。本研究旨在探讨lncRNA SPATA31D5P在乳腺癌中的表达并通过吸附miR-320a影响乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。方法收集乳腺癌组织及癌旁组织各30例,采用Real-time PCR检测SPATA31D5P在乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中的表达水平。选择乳腺癌MDA-MB-231细胞转染针对SPATA31D5P siRNA干扰载体,采用CCK-8法、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)法、Transwell小室实验和细胞划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的改变。采用生物信息学方法筛选可与SPATA31D5P互补结合的miRNAs,Real-time PCR及双荧光素酶报告实验验证SPATA31D5P对miR-320a的调控作用。结果乳腺癌组织中SPATA31D5P水平显著高于邻近正常乳腺组织,各乳腺癌细胞系中SPATA31D5P表达都高于正常乳腺上皮细胞MCF10 A。siRNA干扰组的SPATA31D5P水平为0.288±0.052,低于空白对照组的1.114±0.096和阴性对照(NC)组的1.079±0.128(P<0.01)。与NC组和空白对照组相比,干扰组MDA-MB-231细胞的增殖活力明显下降并出现G_(1)期阻滞,凋亡率明显增加(P<0.01);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(14.36±1.75)%和(26±1.52)个,低于NC组的(52.25±1.87)%和(67.33±2.91)个(P<0.01)。双荧光素酶实验证实,SPATA31D5P能够直接调控miR-320a的表达及荧光素酶活性。结论 SPATA31D5P在乳腺癌中高表达,干扰其表达能有效抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向调控miR-320a有关。
- 危敏余海浪王涵多郜蕊雷洁
- 关键词：乳腺癌长链非编码RNA实时定量聚合酶链反应
- AQP1在维甲酸诱导红白血病细胞红系分化中的作用被引量：2
- 2012年
- 目的建立稳定抑制水通道蛋白1(AQP1)表达的K562细胞株,探讨AQP1在维甲酸(RA)诱导红白血病细胞红系分化中的作用。方法 RA处理K562细胞,通过real-time PCR法检测γ-珠蛋白表达和分光光度法检测血红蛋白的含量研究RA对K562细胞红系分化的影响。Real-time PCR法、蛋白质印迹法检测RA诱导后K562细胞AQP1转录和蛋白表达水平的变化。设计特异AQP1 shRNA序列,构建pSUPER-retro-puro重组质粒转染K562细胞,筛选建立稳定抑制AQP1基因表达的K562细胞株(K562-shAQP1);通过比较K562-shAQP1细胞株与对照组细胞在维甲酸诱导后γ-珠蛋白和血红蛋白的表达,研究AQP1在维甲酸诱导K562细胞红系分化中的作用。结果 RA处理K562细胞后红系分化指标γ-珠蛋白和血红蛋白的表达均明显增加,同时AQP1 mRNA及蛋白表达随RA作用时间显著增加(P<0.01)。pSUPER-retro-puro-shAQP1干扰载体转染K562细胞后AQP1基因在转录和蛋白水平上的表达均被抑制,差异有统计学意义(P<0.01);K562-shAQP1细胞与对照K562细胞相比,在RA诱导后γ-珠蛋白和血红蛋白表达受到不同程度的抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 RA诱导K562细胞红系分化后AQP1表达显著增加,而抑制AQP1基因的表达可部分阻断RA诱导红系分化的作用,说明AQP1在RA诱导K562细胞红系分化过程中发挥重要作用。
- 危敏石嵘姜立王妮莎马文丽
- 关键词：水通道蛋白1维甲酸红系分化K562细胞
- SUSD2基因干扰表达载体的构建及在A549细胞中鉴定被引量：1
- 2017年
- [目的]构建SUSD2基因短发夹RNA(shRNA)的表达载体,并在人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞中鉴定。[方法]设计合成SUSD2基因shRNA片段,连接到经Bam HⅠ和EcoRⅠ双酶切的psi-m H1 shRNA载体中,构建干扰表达载体psi-m H1-SUSD2 shRNA,酶切后测序鉴定;将干扰载体psi-m H1-SUSD2 shRNA转染A549细胞,荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot法检测干扰载体的干扰效率。[结果]酶切和测序结果显示成功构建了SUSD2基因shRNA的表达载体,q-PCR和Western Blot结果显示最佳干扰载体可使SUSD2 mRNA相对表达量下调75%以上,并可明显抑制A549细胞中SUSD2蛋白的表达。[结论]成功构建了SUSD2基因干扰表达载体,并在A549细胞中有效干扰SUSD2基因的表达。
- 危敏叶华秀蔡翠霞
- 关键词：短发夹RNAA549细胞非小细胞肺癌
- 体外针对X基因的小干扰RNA的抗乙型肝炎病毒效应研究
- 2009年
- 目的:探讨体外针对乙型肝炎病毒(HBV)X基因的小干扰RNA(siRNA)对HBV复制和抗原表达的抵制作用。方法:利用siRNA表达框架法设计针对HBV X基因的siRNA,转染HepG2.2.15细胞,RT-PCR半定量检测转染前后X基因的表达;ELISA法测定各组24、48、72h HBsAg和HBeAg的含量;荧光定量PCR检测48h时HBV DNA的变化。结果:制备了HBV X基因的siRNA,转染后24、48和72h,HBV X基因mRNA的量分别减少了57%、78%和40%;siRNA能抑制HBsAg和HbeAg的分泌,抑制高峰在48h,抑制率分别为42%和43%;荧光定量PCR证实HBV DNA的复制亦受到抑制。结论:针对HBV X基因的siRNA在体外具有抑制HBV复制和抗原表达的作用。
- 孙朝晖石玉玲杨慧兰危敏王蜀燕
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因RNA干扰
- 生物化学与分子生物学双语教学的实践被引量：13
- 2008年
- 双语教学是我国高等教育教学改革的重要内容，也是培养高素质、复合型人才的一项长远战略规划。从双语教学的实践出发，分析了目前医科院校生物化学与分子生物学双语教学中存在的问题，并针对其存在的问题提出了改进措施。
- 危敏马文丽李凌彭翼飞朱利娜
- 关键词：生物化学分子生物学教学改革双语教学
- 血浆miR-92a与骨肉瘤预后相关性研究被引量：5
- 2016年
- 背景与目的:骨肉瘤是儿童和年轻成人最常见的原发性恶性骨肿瘤,目前尚无高特异度、高灵敏度的预后预测指标。该研究旨在探讨血浆mi R-92a表达水平与骨肉瘤临床病理及预后的关系。方法:收集30例健康体检者和45例骨肉瘤患者术前及术后血浆,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测血浆mi R-92a水平。以术前mi R-92a≥5为界限,将骨肉瘤患者分为高表达组和低表达组。结果:骨肉瘤患者血浆mi R-92a水平显著高于正常体检人群,患者术前mi R-92a水平远高于术后。患者术前mi R-92a表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小和组织学类型等无关,而与Enneking分期、肿瘤坏死率和肺转移相关。Kaplan-Meier分析高表达mi R-92a的骨肉瘤预后差(P=0.035)。结论:骨肉瘤患者血浆mi R-92a表达水平与生存率相关,可能是骨肉瘤一项有价值的预后指标。
- 孟伟张力黎健伟危敏
- 关键词：骨肉瘤实时荧光定量聚合酶链反应
