赵帆
- 作品数：10 被引量：6H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 靶向人乙型肝炎病毒siRNA的构效关系研究被引量：1
- 2008年
- 目的:在体外模型HepG2.2.15细胞中研究靶向人乙型肝炎病毒(HBV)小分子干扰RNA(siRNA)的构效关系。方法:靶向HBV基因不同位置合成21条siRNA,分析多条siRNA在HBV 8个基因型(共120条序列)中的保守性情况以及siRNA的二级结构特点。利用乙肝表面抗原(HBsAg)ELISA定量方法与荧光定量PCR方法检测siRNA在不同浓度下(1,10,100 nmoL/L)对HepG2.2.15细胞中乙肝病毒HBsAg和mRNA表达的抑制情况。SPSS进行定量构效关系(QSAR)分析。结果:半数(13/21)的siRNA以浓度依赖模式抑制靶基因的表达(P<0.05)。其中537,672,1263,1658等序列活性显著高于阳性对照序列。QSAR分析显示siRNA基因型同源性(P<0.01)、S/P和X区(P<0.05)与siRNA活性有紧密关系;重叠基因[S/P/前基因组(pregenome)mRNA]区域局部靶mRNA二级结构保守性、发卡环、多茎环和茎的碱基数目与siRNA活性相关(R=0.994,P=0.009)。结论:siRNA的靶点序列、siRNA本身的一级序列与二级结构对其抑制靶基因的活性有显著影响,具有明显的构效关系。优选siRNA可能作为治疗多基因型乙肝感染的候选序列。
- 付洁汤仲明高新赵帆钟辉李鹏温茂荣孙效宋海峰钱小红
- 关键词：定量构效关系重叠基因
- 靶向肿瘤血管的抗体免疫治疗
- 2008年
- 肿瘤细胞引起多样性和易突变性很难直接用药物治疗,并且肿瘤细胞的耐药性也已成为治疗的一个瓶颈。靶向肿瘤血管的抗体治疗通过靶向实体肿瘤内血管内皮细胞生长增殖的相关靶点,切断肿瘤细胞的营养供应从而达到治疗肿瘤的目的。本文中总结了近年来世界各国已上市或处于临床阶段及实验室阶段的靶向肿瘤血管抗体药物,并阐述了该治疗策略的特点及部分抗体药物的作用机制,提出目前存在的问题和相关解决方法,为靶向肿瘤血管的抗体治疗研究提供一定的参考。
- 崔健赵帆张纪岩于继云
- 关键词：抗体药物免疫治疗
- 乙肝病毒感染导致Mrell下调及基因组断裂被引量：3
- 2008年
- 【目的】乙肝病毒的持续感染与肝细胞癌的发生密切相关。本文探讨了乙肝病毒感染后导致宿主蛋白Mre11的变化,并研究这种蛋白的变化可能导致肝癌发生的机制。【方法】本文通过Western blot检测了乙肝病毒感染HL7702细胞及肝癌组织标本的Mre11蛋白的变化,并且通过RNA干涉的方法干扰了Mre11的表达,用连接介导PCR检测基因组的变化。【结果】本研究发现乙肝病毒感染细胞导致Mre11表达下调,肝癌组织也可以发现Mre11表达下调;下调Mre11表达可以导致细胞基因组的断裂增多。【结论】HBV感染导致Mre11表达下调导致基因组不稳定,这可能与HBV感染导致细胞恶性转化相关。
- 刘煜杨小丽侯宁波赵帆张艳红袁静何湘钟辉
- 关键词：乙肝病毒肝细胞癌DNA损伤修复
- 人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo^+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS。用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF- 7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS。筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台。
- 贾永侠赵帆马红芳李力黄蓓郑子瑞宋婷魏从文何湘张艳红钟辉
- 关键词：MAVS转录活性
- 线粒体抗病毒信号蛋白MAVS真核表达质粒的构建及表达
- 2008年
- 目的:构建线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)真核表达质粒。方法:从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得MAVS的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆进行测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-MAVS。借助脂质体转染pcDNA3/flag-MAVS质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用β干扰素的荧光素酶报告基因(IFN-β-luc)检测MAVS蛋白活性。结果:Western印迹实验证明pcDNA3/flnag-MAVS可以在HEK293T细胞中表达MAVS,并且能使IFN-β报告基因活性明显增强。结论:构建了重组质粒pcDNA3/flag-MAVS,在细胞中表达MAVS后具有刺激IFN-β转录的生物活性。
- 倪才飞赵帆郑子瑞黄蓓马红芳李力宋婷魏从文何湘张艳红钟辉
- 关键词：MAVSIFN-Β荧光素酶报告基因
- 病毒感染与宿主细胞DNA损伤应答
- 2007年
- 病毒感染宿主细胞后,利用细胞内的营养物质和原料进行复制和增殖,同时能引起宿主细胞启动抗病毒免疫应答的防御机制。此外,近年来的研究还表明病毒感染能够引起宿主细胞的DNA损伤应答,该反应是细胞另一种防止病毒入侵的自我保护机制。同时发现,病毒在长期进化过程中形成了不同的机制来对抗宿主细胞的DNA损伤应答,从而消除细胞对其复制和繁殖产生的不利影响。因此,研究和阐述病毒感染后引起宿主细胞DNA损伤应答途径的机制,可使我们采取相应对策选择新的抗病毒靶点,从而有利于新型抗病毒药物的开发。
- 赵帆钟辉马清钧
- 关键词：病毒感染DNA损伤
- 咖啡因及其类似物抗乙型肝炎病毒复制的作用及其在制备治疗病毒性肝炎药物中的用途
- 本发明涉及咖啡因及其类似物抗乙型肝炎病毒复制的作用及其在制备治疗病毒性肝炎药物中的用途，属于医药领域。本发明的优点是：1.抗病毒效果更好：从体外抗病毒模型HepG2 2215细胞抗原分泌抑制实验结果来看，与现有的抗病毒药...
- 钟辉马清钧张艳红赵帆侯宁波何湘
- 文献传递
- 7－氢氧基－星状孢子素在制备治疗病毒性肝炎的药物中的用途
- 本发明公开了7－氢氧基－星状孢子素在制备治疗病毒性肝炎的药物中的用途，属于医药领域。UCN01用于制备治疗病毒性肝炎的药物的用途。本发明的优点是：本发明开发了一种专门针对乙肝病毒复制的新的药物靶点，这种药物可以抑制所有肝...
- 钟辉侯宁波何湘赵帆张艳红马清钧
- 文献传递
- 酵母双杂交技术筛选与RIG-Ⅰ相互作用蛋白被引量：1
- 2009年
- 目的:筛选人脾细胞cDNA文库中与维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)所编码蛋白具有相互作用的蛋白基因。方法:通过聚合酶链反应(PCR),以HEK293T细胞RNA为模板扩增RIG-Ⅰ基因的2CARD结构域部分,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒pGBKT7-RIG-Ⅰ2CARD,转化到酵母细胞AH109感受态中,得到阳性克隆AH109[RIG-Ⅰ2CARD]。然后将人脾细胞cDNA文库转化进AH109[RIG-Ⅰ2CARD],在含有X-α-半乳糖(X-α-Ga1)四缺营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,提取质粒后转化DH5α大肠杆菌并经氨苄青霉素抗性筛选,挑取单克隆菌落抽提质粒,并进行测序,再进行生物信息学分析。结果:成功构建酵母诱饵蛋白表达质粒pG-BKT7-RIG-Ⅰ2CARD,并能在酵母中表达。筛选出阳性菌落59个,经生物信息学分析,最后从脾细胞cDNA文库中筛选出12个与RIG-Ⅰ2CARD有相互作用的蛋白基因。结论:成功克隆出RIG-Ⅰ2CARD基因,并从脾细胞cDNA文库中筛选出12种能与RIG-Ⅰ2CARD具有相互作用的蛋白基因。
- 郑子瑞侯宁波何湘赵帆魏从文戴玲钟辉
- 关键词：酵母菌蛋白质相互作用
- 咖啡因及茶碱在制备抗乙型肝炎病毒的药物中的用途
- 本发明涉及咖啡因及其类似物抗乙型肝炎病毒复制的作用及其在制备治疗病毒性肝炎药物中的用途，属于医药领域。本发明的优点是：1.抗病毒效果更好：从体外抗病毒模型HepG2 2215细胞抗原分泌抑制实验结果来看，与现有的抗病毒药...
- 钟辉马清钧张艳红赵帆侯宁波何湘
- 文献传递
