尚江华
- 作品数：44 被引量：95H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 摩拉水牛二酰甘油酰基转移酶2基因的多态性检测被引量：4
- 2018年
- 本研究旨在检测水牛二酰甘油酰基转移酶2(diacylglycerolacylt-ransferase,DGAT2)基因的单核苷酸多态性(SNP),探究摩拉水牛多态性位点的群体遗传特征。以广西水牛研究所的57头摩拉水牛为材料,PCR扩增DGAT2基因的部分序列(外显子2及内含子2、3),通过常规测序法检测其SNP,并运用遗传多样性分析软件(POPGENE)和SPSS软件对群体的多态性位点进行基因频率、基因型频率、多态信息含量(PIC)、有效等位基因数(Ne)及遗传杂合度(He)的检测。结果表明,在摩拉水牛DGAT2基因外显子2和内含子2、3上共发现了9个SNPs位点(IVS2.54G>A、IVS2.158A>G、EVS2.191A>G、EVS2.228A>G、IVS3.311C>T、IVS3.444A>G、IVS3.451A>C、IVS3.466C>T、IVS3.521C>T),其中EVS2.191A>G位点的突变导致氨基酸由异亮氨酸突变为缬氨酸,突变位点间存在一定程度的连锁遗传但接近连锁平衡状态。从基因频率上看,IVS2.158A>G、EVS2.191A>G、IVS3.311C>T、IVS3.451A>C、IVS3.466C>T和IVS3.521C>T 6个SNPs位点的两个等位基因频率有较大差异,提示等位基因频率较大的基因个体可能更适合生存。9个SNPs位点在摩拉水牛品种上多处于高度多态,杂合度在0.1744~0.4975之间,说明摩拉水牛群体中DGAT2基因遗传多态性丰富,具有较大的育种价值和性状改良潜力。
- 鄢胜飞尚江华黄丽华杨春艳郑海英李孟琪于农淇Mahmoud Moussa覃广胜黄加祥张秀芳
- 关键词：摩拉水牛DGAT多态性
- 水牛活体采卵和无透明带胚胎培养体系的优化
- 2020年
- 本研究旨在探索哺乳动物体外受精(IVF)胚胎单独或少量培养时发育效率低、无透明带胚胎的体外发育潜能受阻的问题,以期建立提高水牛活体采卵(ovum-pick-up,OPU)和徒手克隆(handmade clone,HMC)胚胎发育潜能高效稳定的体外生产体系。研究首先比较了单个微滴内共培养的胚胎数量(1、3、5、10和20枚)对胚胎发育效果的影响;而后采用微穴体系(well-of-the-well,WOW)和辅助共培养体系(培养微滴中添加包埋IVF胚胎的琼脂糖小块)培养OPU-IVF胚胎,并用WOW体系培养无透明带的徒手克隆重构胚,与传统的微滴培养体系比较其体外发育效果。结果表明:单个微滴内培养的胚胎数量为1、3和5枚时,囊胚发育率极显著低于10枚和20枚组(P<0.01);与微滴培养体系相比,辅助共培养和WOW体系均极显著提高OPU-IVF胚胎的囊胚率(P<0.01),且WOW培养体系极显著促进HMC重构胚的卵裂率和囊胚率(P<0.01)。综上所述,胚胎群体培养有助于胚胎发育,在保证系谱明确的前提下琼脂糖包埋辅助胚胎共培养体系和WOW体系提高了OPU-IVF体外胚胎发育效率,且WOW体系还可用于无透明带胚胎的高效培养。
- 杨春艳郑海英李玲玉黄加祥黄春丽尚江华
- 关键词：水牛
- 人骨髓基质细胞作为核移植供体细胞的相关生物学特性研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究作为核移植供体细胞的人骨髓基质细胞相关生物学特性。方法应用密度梯度离心法分离培养人骨髓基质细胞，并对其进行形态观察、免疫荧光分析细胞骨架结构、端粒酶活性测定、核型及细胞周期分析。结果培养的细胞具有正常的大小、形态、细胞骨架结构：在融合密度达80%-90%时，G0＋G1期细胞所占的比例较高，约占92．58％；检测传至第7代的人骨髓基质细胞具有正常染色体数目（46，XY），端粒酶活性为0．567。结论形态良好、染色体数目正常的人骨髓基质细胞可以作为核移植的供体细胞。
- 邹雨汐姜晓丹尚江华滕晓华邹飞秦玲莎
- 关键词：骨髓基质细胞供体细胞细胞骨架
- 兔卵母细胞孤雌激活及不同添加物对激活胚胎发育的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探寻一种稳定有效的卵母细胞激活方法及体外培养体系，为下一步的治疗性克隆胚激活及培养实验提供相关参照。方法（1）选取具有第一极体的成熟兔卵母细胞随机分组。比较1．2kV／cm、1．6kV／cm、2．0kV／cm场强的电激活及5μg／mL离子霉素（ION）激活对兔卯母细胞孤雌激活效果；（2）激活处理后的卵母细胞，分别在添加0、10、20、40、80ng／mL白血病抑制因子（LIF）及添加0、1×、2×胰岛素、转铁蛋白、硒化钠复合物（ITS）的M199液中培养，比较孤雌胚胎的卵裂率、8-16细胞胚胎比例、桑囊率以及囊胚细胞总数情况。结果（1）不同激活方式对兔卯母细胞的激活效果差异较大。ION处理组存活率高于2．0kV／cm电激活处理组，差异有统计学意义（P〈0．05）；而在分裂率、8-16细胞率、桑囊率上，10N处理组高于1．2kV／cm电激活处理组，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）20ng／mLLIF组桑囊率高于80ng／mLLIF组，差异有统计学意义（P〈0．05）。在囊胚细胞总数上，20ng／mLLIF组高于40ng／mLLIF和80ng／mLLIF组，差异有统计学意义（P〈0．05）。1×ITS组的桑囊率高于2×ITS组，差异有统计学意义（P〈0．05）。此外，0×ITS组及1×ITS组的囊胚细胞总数分别为166．00枚、147．40枚，多于2×ITS组（78．00枚），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论ION处理激活新西兰大白兔卵母细胞能获得较好的分裂率和囊胚率；添加20ng／mLLIF、1×ITS可以促进兔孤雌激活胚胎的后期发育。
- 邹雨汐尚江华秦玲莎唐艳萍姜晓丹
- 关键词：胚胎发育孤雌激活卵母细胞
- 水牛体外生产胚胎发育能力的研究
- 2013年
- 为了探讨屠宰场卵巢体外生产胚胎(IVF)、OPU(ovum pick-up)-IVF胚胎以及体细胞核移植胚胎(SCNT)的发育能力和发育速度,研究比较了3种不同来源胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚形成时间。结果:屠宰场卵巢-IVF、OPU-IVF和SCNT胚胎的分裂率没有显著差异(52.5%、63.4%、56.4%,P>0.05),而OPU-IVF胚胎的囊胚发育率显著高于SCNT胚胎(36.4%vs 19.8%,P<0.05);对屠宰场卵巢-IVF胚胎而言,7 d囊胚的比率(46.8%)高于6 d、8 d和9 d的囊胚比率(17.7%、23.0%、12.5%,P<0.01);OPU-IVF 7 d囊胚的比率(44.5%)高于6 d、8 d和9 d的囊胚比率(17.6%、27.8%、9.7%,P<0.01)。SCNT 6 d和7 d的囊胚比率(49.6%、31.3%)高于5 d、8 d和9 d的囊胚比率(7.4%、8.5%、1.7%,P<0.01)。试验表明SCNT胚胎的发育能力要显著低于OPU-IVF胚胎,而OPU-IVF胚胎与屠宰场卵巢-IVF胚胎的发育能力没有显著差异;SCNT胚胎的囊胚形成时间早于IVF胚胎。
- 杨春艳庞春英郑海英黄芬香尚江华王建杨炳壮梁贤威
- 关键词：水牛体外生产胚胎发育能力
- CART对FSH诱导下水牛颗粒细胞雌二醇分泌及相关基因表达的影响被引量：3
- 2020年
- 本试验采用无血清培养体系培养原代水牛卵巢颗粒细胞,研究了外源可卡因-苯丙胺调控转录肽(exogenous cocaine amphetamine regulated transcript,CART)对促卵泡激素(FSH)诱导下颗粒细胞产生雌二醇(E2)的影响及其相关基因的表达情况。采用Long-term培养方法在无血清培养液中分别添加不同浓度的FSH(0、0.25、0.5、1、2、4 ng/mL)培养7 d,利用双抗体夹心法检测各孔的E2浓度,筛选出最佳添加浓度;将原代颗粒细胞随机分成4组(2组对照组(无FSH)和2组最佳FSH添加组)培养6 d后,其中一组对照组和FSH添加组分别与25μg/mL CART共作用24 h,检测E2浓度的变化并对颗粒细胞中CART受体(CARTPT)和芳香化酶基因(CYP19A1)进行定量检测。结果发现:①在培养液中不添加CART时,颗粒细胞中E2浓度随着FSH添加浓度的升高呈先升高后降低的趋势,当FSH添加浓度为1 ng/mL时,E2浓度达到最高值116.16 pmol/mL,显著高于对照组和其他浓度组(P<0.05);②添加外源CART显著降低了FSH作用下颗粒细胞培养液中E2的浓度(P<0.05),两对照组(0 FSH和0 FSH+CART)差异不显著(P>0.05);③在添加1 ng/mL FSH时,CART作用24 h后显著降低了FSH诱导下颗粒细胞中CYP19A1 mRNA的表达(P<0.05),而细胞中CARTPT mRNA的相对表达量显著升高(P<0.05)。在0 ng/mL FSH下,添加25μg/mL CART作用24 h,颗粒细胞中CYP19A1和CARTPT mRNA的表达与不添加CART组相比差异不显著(P>0.05)。由此推测CART在水牛卵巢发育中是一种负向调控信号,抑制卵泡的健康发育,且需一定量的FSH诱导CART对颗粒细胞增殖分化的负向压力。
- 李玲玉郑海英于农淇尚江华黄加祥杨春艳
- 关键词：CARTFSHE2水牛颗粒细胞
- RAPD标记鉴别四个水牛品种的初步研究
- 2020年
- 为进一步保护和开发中国本地水牛和国外引进水牛的遗传资源,建立快速区分鉴别本地和引进水牛品种的方法。设计57条随机扩增多态性(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)引物,对本地沼泽型水牛和国外引进的河流型(摩拉,尼里拉菲和地中海)水牛之间的遗传差异进行了调查。以128头水牛DNA样本为模板,通过PCR扩增从57条RAPD引物中筛选并优化反应条件。实验结果显示,筛选得到了5条可用于区分本地沼泽型水牛与引进河流型水牛的引物(OPG6,OPG7,S11,S40和S1013),建立了RAPD鉴别区分沼泽与河流水牛的方法。本实验的结果为中国水牛的杂交改良、良种培育和本地水牛种质资源的保护等工作提供了理论和实验依据。
- 于农淇郑海英杨春艳鄢胜飞李孟琪黄加祥尚江华
- 关键词：水牛RAPD
- 我国水牛繁殖生物技术研究进展被引量：1
- 2015年
- 水牛适应和抗病力性强、耐高温高湿、耐粗饲、易饲养、使用年限长,非常适合我国南方的饲料资源和气候条件,而且水牛奶营养丰富,现今我国正致力于发展水牛奶业。引入的河流型水牛,体格大,生长快速,产奶量高,与本地水牛杂交后代的奶水牛产奶量达到1200~2000kg,可显著提高本地水牛的产奶性能。但由于水牛的繁殖性能低下,我国水牛杂交改良面临着良种种源匮乏的问题,要突破这个瓶颈,必须集成现代动物繁殖技术（如人工授精、超数排卵、体外胚胎生产、核移植、转基因和胚胎移植等技术）,
- 李婥杨春艳尚江华郑海英黄芬香
- 关键词：核移植胚胎生产产奶性能胚胎冷冻超数排卵同期发情
- 人骨髓基质细胞移入兔去核卵母细胞的异种克隆研究
- 本实验选用人骨髓基质细胞((hBMSCs)和去核兔卵母细胞重组构建异种治疗性克隆胚，比较不同融合电压强度、不同注核方式对构建重构胚的影响，同时通过与兔卵丘细胞(rCCs)和兔骨髓基质细胞(rBMSCs)构建的同种重构胚比...
- 尚江华邹雨汐姜晓丹陈镇洲秦玲莎徐如祥
- 关键词：骨髓基质细胞异种克隆卵丘细胞
- 文献传递
- 水牛Smad4基因的克隆及其真核表达载体的构建被引量：3
- 2017年
- 为了阐明Smad4基因在水牛卵巢颗粒细胞增殖及胚胎发育中的分子机制,试验采用RT-PCR扩增并克隆水牛Smad4基因,对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,构建Smad4基因的真核表达载体,通过脂质体转染法转染体外培养的牛卵巢颗粒细胞。结果表明,试验克隆得到水牛Smad4基因编码序列,编码区全长为1 662bp,编码553个氨基酸。通过BLAST对水牛Smad4基因的核苷酸序列进行同源性比对,结果显示,水牛Smad4基因与牛的同源性为99%,与绵羊、猪、马、人的同源性分别为98%、96%、96%和95%。系统进化树分析表明,Smad4基因在不同物种的进化过程中具有高度的保守性。试验成功构建了水牛Smad4基因的真核表达载体pEGFP-N1-Smad4,并在水牛卵巢颗粒细胞中表达出较强的绿色荧光蛋白Smad4-EGFP融合蛋白。本研究成功克隆了水牛Smad4基因,并成功构建了Smad4基因的真核表达载体,为进一步研究Smad4基因在水牛胚胎发育过程中的分子机制奠定基础。
- 鄢胜飞张秀芳黄玥萌郑海英杨春艳覃广胜黄加祥尚江华
- 关键词：水牛SMAD4基因克隆真核表达载体
