卢晓昭
- 作品数：14 被引量：46H指数：4
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金World Health Organization国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 高浓度葡萄糖通过p38MAPK-TXNIP/TRX-ROS通路抑制MC3T3-E1细胞成骨分化被引量：2
- 2014年
- 目的:研究高浓度葡萄糖抑制MC3T3-E1细胞成骨分化的机理。方法:建立MC3T3-E1细胞成骨分化诱导体系,观察不同浓度葡萄糖(5.5mM和22mM)对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响;用不同浓度的p38 MAPK抑制剂Fr167653(0.1μM、1.0μM和10μM)进行药物干预,观察MC3T3-E1细胞在22mM葡萄糖浓度下成骨分化的变化情况。通过钙含量检测、Real time PCR检测相关分化的变化;用Western Blot方法检测MC3T3-E1细胞分化过程中p38 MAPK磷酸化状态、TXNIP表达水平的变化;使用胰岛素二硫键还原法检测细胞内TRX活性水平;使用活性氧检测试剂盒检测细胞内自由氧生成水平。结果:体外诱导条件下,高浓度(22mM)葡萄糖通过升高p38 MAPK磷酸化水平,上调TXNIP表达水平,同时降低TRX活性,使细胞内自由氧生成增加,抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化;Fr167653通过抑制p38 MAPK磷酸化,下调TXNIP表达同时升高TRX活性,抑制细胞内自由氧生成,解除高浓度葡萄糖对细胞成骨分化的抑制作用。结论:高浓度葡萄糖通过p38 MAPK-TXNIP/TRX-ROS信号通路抑制MC3T3-E1细胞成骨分化。
- 吴宁卢晓昭曹晓瑞于立峰陶惠人朱庆生
- 关键词：糖尿病性骨质疏松症P38成骨细胞分化
- 日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析被引量：1
- 2003年
- 目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。
- 卢晓昭彭鸿娟陈晓光
- 关键词：日本血吸虫表达序列标签基因克隆
- 人GDDR基因启动子的克隆和报告基因载体构建被引量：8
- 2011年
- 目的:克隆人GDDR基因的启动子;构建GDDR启动子的报告基因载体并进行活性分析。方法:设计合成GD-DR启动子引物,采用PCR技术从人基因组DNA中扩增GD-DR启动子;将扩增片段插入T载体并利用酶切与测序进行鉴定;亚克隆该基因至pGL3-Basic荧光报告基因载体;瞬时转染细胞,用双荧光素酶报告基因系统检测报告基因载体的活性。结果:PCR扩增得到人GDDR基因启动子;成功构建pGL3-GDDR-promoter报告基因载体,测序结果表明启动子序列正确;双荧光素酶报告基因检测系统证实构建的报告基因载体具有启动子活性。结论:成功地构建人GDDR基因启动子的克隆及其报告基因载体的构建,为深入研究GDDR转录表达的调控机制提供基础。
- 祁胜宾双剑博卢晓昭杜建军
- 关键词：基因启动子荧光素酶报告基因
- 血吸虫基因组计划
- 2001年
- 对血吸虫基因组计划的建立、发展和现状进行简述,并介绍了基因组研究中用到的一些生物学技术。
- 卢晓昭
- 关键词：血吸虫基因组计划生物技术
- 荧光内参在校正Caspase-3／7活性检测偏差中的应用被引量：1
- 2010年
- 目的改进Caspase-3／7活性检测方法。方法在顺铂诱导的HeLa细胞凋亡模型中，分别利用传统的和改良的实验方法检测Caspase-3／7的活性变化，并与Western印迹实验结果进行方法学比较。结果改良的实验方法显示不同剂量顺铂诱导下，HeLa细胞Caspase-3／7活性有剂量依赖性增高，与Western印迹实验结果相一致，但传统实验方法显示HeLa细胞Caspase-3／7活性呈现先增高后降低的趋势。结论由于参测细胞数不同，导致这种Caspase-3／7活性检测方法不能真实反映细胞凋亡程度。本研究成功建立了一种新的改良型Caspase-3／7活性检测方式，这种检测方法可以排除不同凋亡诱导方式诱导细胞凋亡时所产生的因参测细胞数不同所造成的Caspase-3／7活性检测的误差。
- 晋亮杨国栋傅海燕卢晓昭韦梦影于芳卢兹凡
- 关键词：凋亡内参顺铂PARP
- 非诺贝特通过FoxO1抑制心肌肥大被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨非诺贝特(fenofibrate)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肥大心肌细胞的抑制作用及对FoxO1表达的影响。方法:首先采用AngⅡ诱导心肌细胞肥大,将细胞分为三组:对照组:未给予任何干预;心肌细胞肥大组:AngⅡ(10-7mol/L)刺激细胞;治疗组:先给予fenofibrate(10-5mol/L),30min后AngⅡ(10-7mol/L)刺激细胞。应用蛋白免疫印迹法(western-blotting)和实时定量PCR法(real time PCR)检测各组细胞中转录因子FoxO1的蛋白质及mRNA含量,心肌细胞肥大的判断使用脑钠肽(brain natriuret icpepide BNP)。结果:心肌细胞肥大组的FoxO1表达较对照组明显降低,而治疗组的FoxO1表达较心肌肥大组明显升高。结论:非诺贝特可能通过上调FoxO1表达,从而抑制心肌细胞肥大。
- 刘薇郑强荪郭万刚杨国栋卢晓昭
- 关键词：非诺贝特心肌肥大FOXO1
- 解偶联蛋白UCP1启动子荧光素酶报告基因载体的构建
- 2015年
- 目的:构建解偶联蛋白UCP1启动子荧光素酶报告基因载体,为寻找调控UCP1表达的小分子化合物提供有效工具。方法:从小鼠基因组DNA中PCR扩增小鼠UCP1启动子上游2000 bp序列,并将该序列连接到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,构建p GL3-UCP1启动子。测序正确后,提取质粒,然后将上述载体与p RL-TK载体共转染至HEK293细胞、小鼠白色脂肪前体细胞和小鼠棕色脂肪前体细胞,48 h后裂解细胞检测荧光素酶的活性。结果:通过PCR成功扩增获得了目的片段,并将其克隆至p GL3-basic中。与细胞内源UCP1表达水平相似,荧光素酶报告系统表明构建的p GL3-UCP1在棕色脂肪细胞中启动子活性最高,在白色脂肪细胞中活性较低,在HEK293细胞中基本没有活性。同时β3肾上腺素受体激动剂CL 316,243同样能够上调p GL3-UCP1的启动子活性。结论:成功构建了小鼠UCP1启动子荧光素酶报告基因载体,并证明在棕色脂肪细胞中,该启动子具有很强的启动子活性,而在白色脂肪和HEK293细胞中,启动子活性很低。该启动子报告系统有望为寻找激活UCP1的小分子化合物提供重要平台。
- 刘旭卢晓昭韦梦影王姗杨国栋
- 关键词：启动子转录调控药物筛选
- 活化T细胞核因子对组成性启动子SV40的调控作用被引量：2
- 2012年
- 目的:利用双荧光素酶报告系统探讨活化T细胞核因子(NFAT)能否调控常见组成性启动子CMV,SV40和TK,为不同条件下选择合适双荧光报告系统内参提供依据。方法:用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ分别从质粒pCDNA3.1和pRL-TK中切下CMV和TK启动子,克隆至pGL3-basic载体中,构建成pCMV-Luc和pTK-Luc载体。将构建pCMV-Luc和pTK-Luc以及商品化的pGL3-control(SV40启动子驱动),分别与SV40(pBIND)和TK(pRL-TK)两种启动子驱动的两种内参质粒共转染入HEK293细胞;观察过表达组成性活化NFAT后相对荧光素酶活性读数的改变。结果:成功构建了pCMV-Luc和pTK-Luc质粒,荧光素酶活性检测发现,常见组成性启动子SV40启动子对过表达组成性活化的NFAT存在一定的反应。结论:T细胞活化过程中重要的转录因子NFAT能够调控SV40启动子活性;表明常见组成性启动子SV40并非真正、绝对的组成性不变。因此,在荧光素酶报告系统内参选择时需要充分考虑该问题,本研究为合理选择内参质粒提供了一个可行策略。
- 濮军杨国栋卢晓昭韦梦影卢兹凡鲁建国
- 关键词：活化T细胞核因子内参
- RNA结合蛋白QKI在心肌肥大中的作用被引量：2
- 2012年
- 目的探讨RNA结合蛋白QKI在血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大中的作用。方法将H9C2细胞分为对照组与心肌肥大组(AngⅡ组),AngⅡ组采用血管紧张素Ⅱ(10-7 mol/L)刺激H9C2细胞建立肥大模型;2组均采用转染小干扰RNA抑制QKI的表达,腺病毒感染H9C2细胞过表达QKI5和QKI6,应用Western blot检测H9C2细胞中QKI水平,应用实时定量RCR检测对照组及AngⅡ组作用6,12,18,24,36h时心房利钠多肽表达水平。结果与对照组比较,AngⅡ组作用12h总QKI增加,其中QKI6升高明显(P<0.05);AngⅡ+siQKI组心房利钠多肽水平较AngⅡ+NC组增加(P<0.05);AngⅡ+Ad-QKI5组心房利钠多肽水平与AngⅡ+Ad-Ctrl组比较差异无统计学意义(P>0.05),AngⅡ+Ad-QKI6组心房利钠多肽水平较AngⅡ+Ad-Ctrl组降低(P<0.05)。结论 QKI6可抑制心肌肥大。
- 刘薇郭万刚郑强荪卢晓昭卢兹凡
- 关键词：心肌肥大
- RNA 结合蛋白 QKI 吸附海绵载体的构建及其对肝癌细胞增殖的影响
- 2015年
- 目的：构建针对 RNA 结合蛋白 quaking （QKI）的特异性吸附海绵载体（QRE-sponge）,验证其对肝癌细胞系 HepG2中内源性 QKI 分子的抑制作用。方法利用人源 QKI 的特异性识别效应原件（qua-king responsive element, QRE）序列,重复13个拷贝,串联克隆至 pEGFP-C2真核表达载体中,转染 HepG2肝癌细胞及293 T 细胞。通过 Real time PCR,双荧光素酶报告基因检测及 MTT 实验进一步验证该吸附海绵的效果及其对肝癌细胞系 HepG2增殖的影响。结果 pEGFP-C2-QRE-SP 载体经测序证实构建成功,可以成功的在 HepG2细胞中表达,其绿色荧光呈阳性,且转染24 h 后显著影响 HepG2细胞中 QKI 下游靶基因的表达（P ﹤0.05）。双荧光素酶报告基因系统显示, pGL3-QRE-SP 载体可以显著抑制外源性 QKI 的活性（P﹤0.05）。 MTT 结果显示 pEGFP-C2-QRE-SP 载体促进 HepG2细胞的增殖。结论 QKI 吸附海绵载体策略构建的 pEGFP-C2-QRE-SP 载体可以成功的诱骗吸附 QKI,并促进肝癌细胞系 HepG2增殖,为进一步研究 QKI的功能研究提供了良好工具。
- 韦梦影叶子晨卢兹凡卢晓昭
- 关键词：肝癌细胞
