刘洪洋
- 作品数：16 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途
- 本发明公开了一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途，具体公开了一种乳头瘤病毒嵌合蛋白，其骨架是乳头瘤病毒的L1蛋白或乳头瘤病毒的L1蛋白的突变体，所述的骨架上嵌合至少一个来自人乳头瘤病毒33型L2蛋白或乳头瘤病毒33型L2蛋白突...
- 许雪梅陈雪王志荣刘洪洋望硕张婷胡美丽
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒(HPV)31型中和单克隆抗体的制备及性质鉴定
- 2020年
- 目的:构建获得HPV31构象依赖的中和单抗。方法:采用昆虫细胞表达的HPV31 L1VLP(virus-like particle,VLP)免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,收集杂交瘤细胞培养上清,首先采用HPV31 VLP-ELISA及HPV31假病毒中和实验筛选分泌HPV31中和单抗的杂交瘤细胞株,然后纯化单克隆抗体,分别采用假病毒中和实验及ELISA实验对纯化后单克隆抗体进行鉴定,包括抗体的亚型及其结合表位的构象特征、针对HPV31的中和IC50及针对HPV16、HPV18、HPV33、HPV45、HPV52、HPV58、HPV6、HPV11的交叉中和活性。结果:筛选获得9株HPV31构象依赖中和单抗,其中3株HPV31特异性中和单抗中有2株的IC50<10 ng/mL,分别是XM31-13(0.36,Ig G1)及XM31-23(7.10,Ig G1),6株交叉中和单抗中亦有2株的IC50<10ng/mL,分别是XM31-19(7.14,Ig G1)、XM31-20(6.91,Ig G1)。结论:获得的9株HPV31构象依赖的中和单抗,特别是其中4株单抗IC50值<10 ng/mL的4株单抗,可用于含HPV31L1VLP多价疫苗的质控疫苗的研究。
- 夏百成刘洪洋郝亚茹张婷马铭饶许雪梅
- 关键词：单克隆抗体中和活性
- 截短型人乳头瘤病毒16型L1蛋白及其应用
- 本发明涉及截短型人乳头瘤病毒16型L1蛋白及其应用。具体地，本发明涉及一种截短型HPV16 L1蛋白、编码其的核苷酸、包含所述核苷酸的载体、重组Bacmid、重组杆状病毒、包含所述重组杆状病毒的昆虫细胞、由所述HPV16...
- 许雪梅张婷陈雪刘洪洋周艳望朔
- 文献传递
- 一种可诱发高滴度的针对人乳头瘤病毒HPV16,HPV52,HPV58中和抗体反应的HPV16嵌合病毒样颗粒疫苗的研究被引量：3
- 2018年
- 人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒（VLP）主要诱发型别特异性中和抗体,增加L1VLP型别虽可扩大保护范围,但疫苗生产成本显著增加。HPV16,HPV52及HPV58是我国的主要高危型别。本文将HPV58次要衣壳蛋白L2aa.16-37多肽（与HPV52L2aa.16-37序列相同）插入HPV16L1的h4-βJ coil区,利用昆虫表达体系构建获得16L1h4-58dEVLP,协同人用佐剂氢氧化铝和单磷酰脂质A（Alum-MPL）免疫小鼠。活性检测结果显示16L1h4-58dE VLP免疫血清可中和17种HPV假病毒中的16种,其中针对HPV16的平均中和抗体滴度最高（滴度,76 800）,与HPV16L1VLP对照组的相当（P〉0.05）;重要的是,针对HPV58及HPV52的平均中和抗体滴度均大于103（分别为4 050和1 725）;另外,还可中等滴度中和HPV45（550）,HPV18（506）,HPV33（500）,HPV39（463）,HPV68（431）,HPV6（300）,HPV57（150）,HPV11（125）及较低滴度的中和HPV2/HPV27（40）,HPV35（38）,HPV5（25）,HPV31（13）,但对HPV59没有中和活性。因此,以本研究构建16L1h4-58dE VLP进行广谱HPV疫苗的研究,可望降低疫苗成本,具有应用前景。
- 陈雪王志荣刘洪洋张婷许雪梅
- HPV31 L1 C端截短基因可在昆虫细胞表达体系中高水平制备L1 VLP疫苗被引量：1
- 2019年
- 目的利用昆虫细胞表达体系制备人乳头瘤病毒(HPV)31 L1病毒样颗粒(VLP)疫苗。方法化学合成法获得昆虫Sf9细胞偏性密码子优化的、C端删除27个氨基酸编码序列的HPV31 L1截短基因(HPV31 L1MΔC),构建重组杆状病毒,感染Sf9细胞进行表达;分别采用超声破碎、含离子型表面活性剂(1%SDS等)或含非离子型表面活性剂(0.5%TritonX-100)的裂解缓冲液,制备细胞裂解上清;氯化铯超速离心法纯化后经动态光散射及透射电子显微镜鉴定;0.1μg的HPV31 L1MΔC VLP于第0和2周肌肉免疫BALB/c小鼠,第4周采集血清分析中和活性。结果 3种裂解方法制备的上清均显示HPV31 L1MΔC蛋白的特异表达,其表达量约占裂解上清总蛋白的10%;采用非离子型表面活性剂获得的裂解上清纯化后,目的蛋白纯度高,产量达11.5 mg/L;纯化蛋白的水化分子直径为103.3 nm,均一性好;电镜分析为直径50～60 nm的VLP。免疫血清中HPV31中和抗体滴度为1 440。结论 HPV31 L1MΔC在昆虫细胞表达体系制备的VLP产量高、免疫原性好,可用于生产含HPV31 L1 VLP的多价疫苗。
- 郝亚茹张婷刘洪洋王志荣周艳夏百成许雪梅
- 关键词：病毒样颗粒中和抗体昆虫细胞
- 截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白及其应用
- 本发明涉及截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白及其应用。具体地，本发明涉及截短型HPV58 L1蛋白，其编码核苷酸，包含所述核苷酸的载体、重组Bacmid、重组杆状病毒，包含所述重组杆状病毒的昆虫细胞，由所述HPV58L1蛋...
- 许雪梅王志荣刘洪洋张婷望硕陈雪胡美丽
- 文献传递
- 一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途
- 本发明公开了一种乳头瘤病毒嵌合蛋白及其用途，具体公开了一种乳头瘤病毒嵌合蛋白，其骨架是乳头瘤病毒的L1蛋白或乳头瘤病毒的L1蛋白的突变体，所述的骨架上嵌合至少一个来自HPV58型L2蛋白或HPV58型L2蛋白突变体的多肽...
- 许雪梅陈雪王志荣刘洪洋望硕张婷胡美丽徐雁英周艳乔良
- 一种复合疫苗佐剂及其应用
- 本发明提供一种复合疫苗佐剂及其应用。其中复合疫苗佐剂由下列成分组成：水包油乳剂、TLR刺激剂及稳定剂。本发明亦提供一种免疫组合物，包含上述复合疫苗佐剂和抗原。所述复合疫苗佐剂与抗原联合应用，能有效增强疫苗的体液免疫反应及...
- 许雪梅张婷陈雪刘洪洋周艳望朔
- 文献传递
- 截短型人乳头瘤病毒16型L1蛋白及其应用
- 本发明涉及截短型人乳头瘤病毒16型L1蛋白及其应用。具体地，本发明涉及一种截短型HPV16 L1蛋白、编码其的核苷酸、包含所述核苷酸的载体、重组Bacmid、重组杆状病毒、包含所述重组杆状病毒的昆虫细胞、由所述HPV16...
- 许雪梅张婷陈雪刘洪洋周艳望朔
- HPV18 L2保守中和表位肽协同MF59与CpG-ODN免疫可诱发广谱中和抗体反应
- 2020年
- 目的:人乳头瘤病毒(HPV)次要外壳蛋白L2保守中和表位肽可诱发交叉中和抗体,研究L2保守中和表位肽免疫原性的特点利于HPV通用疫苗的研发。HPV18是第二常见的优势流行高危型,但18L2保守表位肽的免疫活性未见报道。方法:本研究采用化学法合成HPV18 L2N端多肽(18RG-1)并偶联KLH获得18RG1-KLH肽;联合MF59/CpG-ODN复合佐剂或弗氏佐剂皮下免疫BALB/c小鼠5次,用假病毒中和实验检测抗血清针对α6、α7、α9及α11亚属中多个致癌型HPV的中和抗体。结果:MF59/CpG-ODN复合佐剂多肽组抗血清对所有6种检测型别的中和活性与弗氏佐剂多肽组的相当。MF59/CpG-ODN佐剂多肽组抗血清具有广谱中和活性,中和范围至少包括14种致癌型HPV,中和抗体滴度最高的为HPV45(438)和HPV18(325),其次为HPV68(163)和HPV70(150),这四种优势中和型别均为α7亚属。结论:首次发现HPV18 L2 RG1保守中和表位免疫血清可诱发广谱中和抗体反应(其中对α7亚属的HPV中和活性最强,为优势中和型别)。研究结果为基于L2保守表位的广谱HPV疫苗研发奠定基础。
- 马铭饶郝亚茹张婷刘洪洋王志荣夏百成周艳许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒18型
