李书华
- 作品数：61 被引量：144H指数：6
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- 重组腺相关病毒介导MDA-7基因表达抑制肝癌形成的体内实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨含PEG启动子的腺相关病毒介导的黑色素瘤分化相关基因MDA-7（rAAV-PEG-MDA-7）在裸鼠体内的抗肝癌作用及机制。方法构建肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型，尾静脉注射编码重组可溶性MDA-7蛋白的重组腺相关病毒载体rAAV—PEG—MDA-7，观察对肝癌生长的抑制作用。采用RT—PCR、免疫组化、Western blot及ELISA方法分析MDA-7的体内表达情况；Tunnel法和免疫组化检测MDA-7对肿瘤细胞的诱导凋亡和微血管生成抑制效应。结果荷瘤裸鼠尾静脉注射rAAV—PEG—MDA-7后，裸鼠肝细胞中有MDA-7表达，其他组织中无MDA-7表达；血清中MDA-7蛋白持续表达，注射2w后蛋白表达达高峰（200ng／ml）；裸鼠皮下瘤生长受抑制，抑瘤率为62％；Tunnel及免疫组化分析显示，rAAV—PEG—MDA-7可诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤微血管形成。结论含PEG启动子的重组腺相关病毒表达系统rAAV—PEG—MDA-7具有良好的肿瘤靶向性和肝向性，MDA-7在裸鼠肝脏中高效表达，可抑制肝癌生长，其抗肿瘤机制可能为通过诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成的协同作用。
- 徐波李书华蔡文松翁杰锋朱光辉夏金堂
- 关键词：肝细胞血管形成
- 增殖细胞核抗原、表皮生长因子受体和B淋巴细胞瘤基因在非小细胞肺癌中的表达及临床意义被引量：1
- 2008年
- 目的研究增殖细胞核抗原（PCNA）、表皮生长因子受体（EGFR）和B淋巴细胞瘤基因（BCL-2）3种基因蛋白与非小细胞肺癌（NSCLC）临床病理特征的关系。方法应用S-P免疫组化法检测44倒手术切除NSCLC标本中3种基因蛋白的表达。结果44例标本中37例（84．09％）PCNA过度表达，30例（68．18％）EGFR过度表达，19例（43．18％）BCL-2过度表达。PCNA、EGFR及BCL-2阳性表达率在NSCLC淋巴结有元转移患者间均有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）。PCNA和EGFR阳性表达率与患者生存时间长短组间有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）。但是3种蛋白阳性表达率均与肿瘤大小、分化程度无相关性（P〉0．05）。结论PCNA、EGFR和BCL-2基因过度表达可能与NSCLC的转移、预后有关。
- 张绘宇马宁芳李书华张雅洁
- 关键词：非小细胞肺癌免疫组化增殖细胞核抗原表皮生长因子受体
- 中药癌痛克对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡作用及机制研究被引量：6
- 2008年
- 目的通过观察不同浓度癌痛克对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的作用,以及在相应状态下细胞内视网膜母细胞瘤(Rb)基因相对表达量的改变,探讨中药癌痛克的抗胃癌作用机制。方法以不同浓度癌痛克作用SGC-7901细胞,CCK-8检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率细胞周期,RT-PCR方法检测细胞内Bcl-2基因表达变化。结果2～50μg/ml癌痛克可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其抑制及诱导凋亡效应呈浓度依赖性;细胞周期分析处于G1期细胞百分比明显增多,处于G2/M期的细胞减少,Rb基因mRNA表达上调。结论中药癌痛克可通过抑制SGC-7901细胞增殖或诱导其凋亡,且其机制可能通过上调Rb基因表达途径使细胞阻滞在G1期,进而诱导细胞凋亡。
- 肖焕擎杨洁孙政李书华
- 关键词：胃癌凋亡
- 磷酸酰肌醇-3激酶抑制剂对小鼠气道炎症影响的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的观察磷酸酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂LY294002对卵白蛋白诱导哮喘小鼠气道炎症的影响。方法Balb／c小鼠30只，采用随机数字表法分为3组，每组10只：LY294002处理组、卵白蛋白组、正常对照组。通过卵白蛋白多次腹腔注射致敏和反复雾化激发，建立哮喘小鼠模型。末次抗原激发后48h收集支气管肺泡灌洗液和骨髓标本，计数细胞总数和嗜酸性粒细胞，并行肺组织学检查。结果与卵白蛋白组比较，LY294002处理组支气管肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸性粒细胞绝对数明显减少（P〈0．05）：肺组织中细支气管、血管周围嗜酸性粒细胞浸润得到控制，气道黏液分泌减少。结论P13K特异性抑制剂LY294002对卵白蛋白致敏的哮喘小鼠气道炎症具有抑制作用。
- 喻宁芬喻宁芳邓礼于力翁志媛陈英肖雪张又祥李书华
- 关键词：哮喘气道炎症
- CD133阳性/阴性肺癌细胞的分选、鉴定及差异基因的筛选被引量：6
- 2015年
- 背景与目的研究表明多种实体肿瘤中存在肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs),肿瘤干细胞与非肿瘤干细胞的生物学特性存在已有的明显差异,而CD133被认为是肿瘤干细胞的标记物,因此CD133阳性细胞与CD133阴性细胞可能存在明显差异。本研究通过分选人肺腺癌A549细胞中的CD133阳性及CD133阴性细胞,鉴定两组细胞的生物学特性并在人组织标本进行验证,利用基因芯片筛选转移相关差异基因。方法采用磁式分选(magnetic activated cell sorting,MACS)的方法对人肺腺癌A549中CD133阳性细胞、CD133阴性细胞进行分选,通过无血清条件培养、平板克隆、血清诱导分化及基因芯片等实验,比较两组细胞"sphere"形成、细胞增殖、细胞分化以及差异基因,并在人组织标本进行CD133表达与临床特性的验证分析。结果 CD133阳性细胞能在无血清培养基中悬浮生长并形成"sphere";其平均克隆形成率(57.1%)明显高于CD133阴性细胞(3.3%);CD133阳性细胞能被血清诱导分化、表达腺癌标志物CK7;两组细胞中的19个转移基因表达水平相差两倍或以上,差异最高达12倍;肺癌组织中CD133阳性细胞主要分布于癌巢周边,数量稀少,其表达与肿瘤组织学分型、分级及临床分期无关。结论 CD133阳性肺腺癌A549细胞具有CSCs特性;两组细胞在转移相关基因的表达存在明显差异,其中CD82可能在CD133阳性细胞的转移机制中起重要作用。
- 郑少秋李书华王红艳谢晓斌张雅洁
- 关键词：CD133转移相关基因
- HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒表达系统的构建与鉴定
- 2011年
- 目的：构建靶向结肠癌细胞的人端粒酶逆转录酶HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定。方法：根据GenBank中的HTERT启动子（HTERTp）序列设计引物，以人胚肾293细胞提取基因组DNA为模板，PCR扩增HTERTp，并将HTERTp序列克隆入pDC312质粒中，构建成HTERTp调控的腺病毒质粒pSG—HTERTp；NK4 cDNA酶切并回收克隆至pSG—HTERTp载体中，构建成pSG—HTERTp／pA—NK4穿梭质粒，脂质体法在293细胞中包装重组腺病毒；噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒；RT-PCR检测NK4基因的转录；Western Blot检测NK4蛋白的表达。结果：成功构建出成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒，滴度为4．5×10^9空斑形成单位（pfu）／mL，且PCR扩增及western bolt电泳均呈阳性表达。结论：成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒，为进一步研究NK4基因的作用机制打下实验基础。
- 黄桂填肖焕擎曾山崎徐波蔡文松李书华
- 关键词：NK4基因腺病毒
- 可活化细胞穿膜肽-聚N-（2-羟丙基）甲基丙烯酰胺-Ad.mda-7.egfp接合物的合成及跨膜运输途径检测
- 2015年
- 目的：合成一种由可活化细胞穿膜肽（ACPP）、水溶性高分子聚合物聚N-（2-羟丙基）甲基丙烯酰胺（pHPMA）修饰腺病毒的接合物，并初步探索该接合物的跨膜运输途径。方法通过化学合成的方法合成ACPP。将肺腺癌细胞株A549、乳腺癌细胞株MDA-MB-231、肺支气管上皮细胞株HBE和肝癌细胞株HepG2均分为两组，分别加入培养基及终浓度为10 mg/L基质金属蛋白酶抑制剂强力霉素，12 h后加入ACPP，通过荧光显微镜观察并鉴定ACPP对各细胞的穿膜活性。通过化学修饰法合成接合物pc-Ad. mda-7.egfp及ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp，通过荧光显微镜观察并初步鉴定接合物的合成和对A549细胞的穿膜活性。应用流氏细胞术检测接合物感染A549细胞的能力。通过荧光显微镜观察并鉴定接合物ACPP-pc-Ad. mda-7. Egfp在A549细胞内定位及穿膜活性。结果合成了ACPP 100 mg。ACPP对A549、MDA-MB-231、HepG2细胞株具有靶向性穿膜活性，而HBE细胞内未见绿色荧光，强力霉素组细胞经过强力霉素作用后与ACPP-FITC孵育，4种细胞内均未见明显绿色荧光反应，强力霉素阻断了ACPP的肿瘤选择性穿膜作用。合成了两种接合物pc-Ad.mda-7.egfp（粒径420.6 nm）及ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp（粒径462.2 nm）。将ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp、pc-Ad.mda-7.egfp接合物、Ad.mda-7.egfp与A549细胞共培养后，可见空白对照组（培养基）无绿色荧光蛋白表达，pc-Ad.mda-7.egfp接合物仅见微量绿色荧光蛋白表达，ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp、Ad.mda-7.egfp组所有细胞均可见强烈绿色荧光蛋白表达。经流氏细胞仪检测，ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp组A549细胞PI荧光值明显高于pc-Ad.mda-7. egfp组。经荧光显微镜观察证实接合物ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp大量分布于A549细胞胞质，而pc-Ad. mda-7.egfp仅出现少量内吞性囊泡。结论成功合成了ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp接合物，并证实ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp以非内吞途径进行跨膜运输。
- 李书华许泽鹏陈艺瑛陈婷婷刘谕昆李灏马少丹张雅洁
- 关键词：蛋白质转运
- VEGF-C反义多肽对人乳腺癌细胞体内外抑制效应的研究
- 2007年
- 目的 检测VEGF-C反义多肽在体内外抑制乳腺癌细胞的生物学活性,探讨以VEGF-C反义多肽用于乳腺癌基因治疗的应用前景。方法 制备靶向VEGF-C的反义多肽,通过与乳腺癌细胞株MCF-7共培养,MTT法检测细胞增殖抑制率,人工基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力;构建乳腺癌细胞MCF-7裸鼠皮下移植瘤模型,瘤体内注射VEGF-C反义多肽,观察其对乳腺癌细胞的抑制作用;Western Blot检测VEGF-C在瘤组织的表达情况;免疫组织化学分析肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管密度。结果 VEGF-C反义多肽具有较强的生物学活性,对乳腺癌细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑增殖效应呈时间和浓度依赖性;25、50、100μg/ml VEGF-C反义多肽对侵袭重组基底膜的抑制率分别为41.2%、56.7%和60.8%（P〈0.05）;瘤组织内给予VEGF-C反义多肽后,Western blot分析VEGF-C在瘤组织中的表达降低,肿瘤生长受制,抑瘤率为52%（P〈0.05）;免疫组化分析VEGF-C反义多肽可抑制肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管形成。结论 制备出的VEGF-C具有良好的生物学活性,通过抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭转移能力及肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管形成而发挥抗乳腺癌作用。
- 肖焕擎徐波陈熙文朱光辉李书华
- 关键词：乳腺癌
- 重组腺病毒载体pDC316-hIL--24的构建及病毒滴度测定被引量：2
- 2014年
- 目的构建重组腺病毒载体pDC316-hIL-24,并测定病毒滴度。方法从HEK293细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-24基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglⅡ和HindⅢ双酶切定向插入到pDC316-EGFP穿梭质粒中。构建重组穿梭质粒pDC316-EGFP-hIL-24,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC316-hIL-24,经HEK293细胞扩增,TCID50法测定重组腺病毒滴度。结果成功构建出表达h IL-24基因的重组腺病毒载体(pDC316-hIL-24),获得了高滴度表达hIL-24基因的重组腺病毒。结论重组腺病毒表达载体(pDC315-hIL-24)的成功构建及重组腺病毒的获得有利于进一步开展肿瘤的转基因治疗研究。
- 李书华陈婷婷刘谕昆李灏陈艺瑛张雅洁
- 关键词：重组腺病毒载体病毒滴度
- VEGF-C短发夹RNA对人乳腺癌细胞的体内外抑制作用的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨靶向血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的短发夹RNA(shRNA)质粒载体在体内外对乳腺癌细胞株MCF-7生物学活性的抑制作用。方法:倒置荧光显微镜及流式细胞术检测细胞的转染率,RT-PCR及免疫印迹法检测转染细胞内VEGF-C mRNA及蛋白的表达变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,人工基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力。MCF-7裸鼠皮下尾静脉注射VEGF-C shRNA表达载体,观察其对乳腺癌生长的抑制作用。ELISA方法检测VEGF-C在肿瘤组织中的蛋白浓度,免疫组织化学分析肿瘤组织VEGFR-3阳性脉管密度。结果:VEGF-C shRNA能高效转染入MCF-7细胞中,细胞VEGF-C mRNA及蛋白表达水平显著下降,生长增殖受抑(F24 h=515.51,F48 h=859.97,F72 h=992.91,P均=0.000 1)。体外侵袭人工基底膜能力减弱(F=133.36,P=0.000 1)。全身系统性给予VEGF-C shRNA后,VEGF-C shRNA组肿瘤体积缩小(F=498.05,P=0.000 1);瘤组织VEGF-C浓度降低(t=30.75,P=0.001);免疫组化分析VEGF-C shRNA组肿瘤组织中VEGFR-3阳性脉管生成减少(F=265.49,P=0.000 1)。结论:VEGF-C在乳腺癌增殖、侵袭转移和VEGFR-3阳性脉管形成中发挥重要作用,通过RNA干扰技术实现VEGF-C沉默在乳腺癌的基因治疗中具有较好的应用前景。
- 肖焕擎徐波陈熙文朱光辉李书华
- 关键词：RNA干扰
