高北
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：上海海洋大学食品学院更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鱼类来源的两种抗菌肽BPI和LEAP2的cDNA克隆及重组表达载体的构建
- 抗生素的滥用导致了大量的耐药菌株的出现,寻找结构特异的新型药物来对抗这些耐药菌已经成为当务之急。抗菌肽是具有强抗菌作用小分子多肽,是生物先天免疫的重要组成成分,可保护机体免受革兰氏阳性菌和阴性菌、真菌、病毒等病原微生物的...
- 高北
- 关键词：抗菌肽重组表达载体
- 文献传递
- 斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)LEAP2成熟肽在大肠杆菌中的融合表达被引量：6
- 2014年
- 以斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)肝脏为基因克隆的材料,通过RT-PCR对编码LEAP2成熟肽区域41个氨基酸的cDNA片段(mLEAP2)进行克隆。根据斑点叉尾鮰与其他鱼类、哺乳动物及两栖动物等其他物种LEAP2成熟肽区域氨基酸序列的比对结果,发现存在14个保守的氨基酸残基,其中4个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽的羧基端区域,在空间上可形成两对二硫键,推测与LEAP2的抗菌活性有关。进一步构建重组表达质粒pET32a-mLEAP2,使mLEAP2基因与携带有6×His-tag标签和肠激酶识别位点的硫氧还蛋白trxA基因融合,转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,在25℃下,经0.7 mmol/L IPTG诱导培养16 h后,成功表达了trxA-mLEAP2融合蛋白。Tricine-SDS-PAGE显示,细胞经超声破碎后,上清和沉淀中均含融合蛋白,采用固化金属离子亲和层析(IMAC)对其进行纯化,得到了纯化的融合蛋白。
- 高北陶妍
- 关键词：斑点叉尾鮰RT-PCR
- 斑点叉尾鮰BPI抗菌肽的cDNA克隆及原核表达载体的构建被引量：1
- 2012年
- 杀菌/渗透增强蛋白(bactericidal/permeability increasing protein,BPI)是生物机体细胞中表达的一种能够特异性杀灭革兰氏阴性菌的抗菌类蛋白,该蛋白包括氨基端和羧基端两个结构域,其中氨基端结构域主要承担杀菌和中和内毒素的功能。参考已经报道的对人类BPI进行重组DNA表达的研究结果,首先通过RT-PCR和巢式PCR从斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)鳃中克隆了编码BPI氨基端活性结构域的cDNA片段"BPI_(Ntd)",该片段由175个氨基酸残基组成,其中63个氨基酸残基在空间上形成一个非极性的脂质结合袋,与革兰氏阴性菌外膜上脂多糖(LPS)结合,从而改变细菌膜的通透性,达到杀菌的效果。根据斑点叉尾鮰与其他生物之间BPI氨基酸序列的比对结果,发现氨基端存在40个保守的氨基酸残基,其中9个高度保守的残基位于脂多糖结合区域内。为了进一步建立原核表达系统,根据pET-32a(+)和pET-28a(+)两种质粒的不同特点,选择其作为原核表达质粒,将"BPI_(Ntd)"片段分别插入两种质粒,通过菌落PCR、EcoRⅠ和HindⅢ双酶切反应以及DNA测序等方法,证明了重组表达质粒"pET-32a-BPI_(Ntd)"和"pET-28a-BPI_(Ntd)"已被成功构建。
- 高北陶妍
- 关键词：斑点叉尾鮰CDNA克隆原核表达
- 斑点叉尾LEAP2成熟肽在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性被引量：5
- 2017年
- LEAP2(Liver expressed antimicrobial peptide-2)抗菌肽是一类主要在动物肝脏中表达的小分子肽,它们在动物的免疫系统中发挥了重要作用。斑点叉尾(Ictalurus punctatus)LEAP2的一级结构由信号肽和原前体肽组成;原前体肽由66个氨基酸残基组成,近羧基端的41个残基组成了其成熟肽区域(m LEAP2),该区域决定了LEAP2的生物学活性。本文以斑点叉尾m LEAP2为研究对象,通过建立毕赤酵母表达系统,实现了m LEAP2在毕赤酵母中的重组DNA表达,优化的表达条件为:29℃、p H 6、250 r/min、0.5%甲醇、120 h。Tricine-SDS-PAGE分析表明:表达产物经固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化后,获得了高纯度的目的蛋白。经Folin-酚法测定,纯化产物的浓度为0.22 mg/m L,推算至表达量为2.2 mg/L。进一步通过MALDI-TOF/TOF质谱分析对纯化产物的结构进行鉴定,结果证明:获得的纯化产物为预期的重组体m LEAP2(rm LEAP2)。此外,抑菌实验结果显示rm LEAP2具有明显的抑制枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的活性。
- 孙立人陶妍高北
- 关键词：毕赤酵母
- 斑点叉尾鮰BPI抗菌肽的cDNA克隆及原核表达载体的构建
- 杀菌/渗透增强蛋白(bactericidal/permeability increasing protein,BPI)是生物机体细胞中表达的一种能够特异性杀灭革兰氏阴性菌的抗菌类蛋白,该蛋白包括氨基端和羧基端两个结构域,...
- 高北陶妍
- 关键词：斑点叉尾鮰BPI结构域CDNA克隆原核表达
- 文献传递
- 斑点叉尾鮰LEAP-2抗菌肽在毕赤酵母中的表达
- LEAP-2(Liver expressed antimicrobial peptide-2)抗菌肽是由生物肝脏细胞表达的一类具有抗菌作用的碱性小分子肽,它们在机体免疫系统中发挥了重要作用,被认为是抗生素的理想替代品。本...
- 孙立人高北陶妍
- 关键词：斑点叉尾鮰毕赤酵母
- 文献传递
