张林
- 作品数：11 被引量：68H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 环氧合酶2基因沉默对嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 足细胞损伤是进行性肾损害的主要原因[1],足细胞环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）的表达增强致使足细胞易于受到进一步损伤[2].特异性COX-2抑制剂对许多慢性肾脏疾病有减轻蛋白尿、延缓肾损害进展的作用,但作用机制尚未完全阐明[3-5].我们前期研究发现在嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside,PAN）诱导的足细胞凋亡过程中C OX-2的表达增多,而特异性COX-2抑制剂塞来昔布则可以减轻PAN诱导的足细胞凋亡[6],推测塞来昔布抑制足细胞凋亡的作用可能是通过抑制COX-2的表达实现的.但塞来昔布抑制凋亡可能并不完全依赖对COX-2的调节.本研究应用COX-2小分子干扰RNA（small interfere RNA,siRNA）技术将足细胞COX-2基因沉默,比较正常条件永生性小鼠足细胞与PAN诱导凋亡的小鼠足细胞中COX-2的表达水平,观察足细胞Nephrin及CD2相关蛋白（CD2-associated Protein,CD2AP）的表达,进一步研究足细胞COX-2基因沉默对足细胞可能的保护作用机制,为临床上延缓慢性进行性肾损害的治疗提供新的依据.
- 孙怀鑫孔维信汪年松张林丁露露郝传明陈靖
- 关键词：嘌呤霉素氨基核苷环氧合酶2基因沉默特异性COX-2抑制剂进行性肾损害CD2相关蛋白
- 小鼠足细胞Tbxa2r基因敲低方法探讨
- 2015年
- 目的设计并筛选对足细胞血栓素A2受体(Tbxa2r)基因表达敲低效果最佳的siRNA序列。方法培养永生性小鼠足细胞(MPC5),取生长占培养板70%细胞用于实验。设计4条siRNA序列(Tbxa2r-mus-1150、Tbxa2r-mus-1309、Tbxa2r-mus-1677、Tbxa2r-mus-1884),经转染效率验证后转染足细胞。将细胞分为四组:干扰组(以筛选出的干扰序列转染细胞)、空白组(正常细胞样品)、模拟组(只加转染试剂的细胞样品)、阴性对照组(转染无序干扰系列的细胞样品)。Real-time PCR检测各组细胞Tbxa2r基因,Western blot法检测Tbxa2r蛋白。结果筛选出干扰效果最强的siRNA序列Tbxa2r-mus-1677,其转染24 h后对Tbxa2r基因表达干扰效果较小,而在转染48 h后足细胞Tbxa2r基因相对表达量最低。转染72 h后,细胞Tbxa2r蛋白相对表达量明显降低。结论采用Tbxa2r特异性siRNA技术成功敲低足细胞Tbxa2r基因表达,并筛选出敲低效果最佳的siRNA序列。
- 孔维信邓振兴张林孙怀鑫丁露露
- 关键词：足细胞
- 胰头癌行胰腺全系膜切除75例报告被引量：44
- 2013年
- 目的探讨胰头癌行胰腺全系膜切除的方法和策略。方法 2010年5月至2012年8月,上海交通大学医学院附属新华医院共施行胰头癌胰腺全系膜切除75例,手术标本三维空间切缘均行病理检查。结果平均手术时间262 min,平均术中出血415 mL。17例发生术后并发症,无围手术期死亡病例。53例标本三维空间切缘病理检查达到R0切除,R0切除率为70.7%。结论胰腺全系膜切除技术安全可行,有助于提高胰头癌R0切除率。
- 吴文广吴向嵩李茂岚杨桂华丁琦晨丁琦晨翁昊丁倩张林张林束羿俊曹阳包润发束羿俊顾钧陆建华龚伟施伟斌彭淑牖
- 关键词：胰头癌
- 载氟尿嘧啶聚乳酸碳纳米管复合材料对胃癌细胞株的体外杀伤效应被引量：1
- 2014年
- 目的制备荷载氟尿嘧啶（5-Fu）的聚乳酸（PLLA）碳纳米管（CNT）复合材料（5-FU-PLLA-CNTs），并探讨其对人胃癌细胞株（MGC803和MNK45）的体外杀伤效应。方法以PLLA—CNTs为原料，采用超声乳化法荷载5．FU；通过扫描电子显微镜观察5-FU—PLLA—CNTs形态和结构；用紫外可见光光度仪测定不同时间5-FU．PLLA．CNTs的5-FU释放量及累计释放量，并绘制体外释放曲线；设计实验组（不同浓度的5-Fu—PuA—CNTs）及阳性（相应浓度的5-FU）和阴性对照组（不加任何药物），用CCK8法检测不同浓度的5-Fu．PLLA-CNTs对MGC803和MNK45的增殖抑制作用；流式细胞术检测5-FU—PuIA—CNTs作用前后细胞凋亡的变化。结果成功制备5-FU．PLLA．CNTs药物深层薄膜，薄膜载药率为（4．54±0．43）％，包封率（21．56±2．36）％。体外释放实验显示，5-FU-PLLA-CNTs在24h内释放率为23．9％，呈缓慢上升趋势，至31d体外累计释放率达85．3％。CCK8实验显示，与对照组比较，5．Fu—PLLA．CNTs对两株胃癌细胞具有明显抑制作用（P〈0．01），随着药物浓度的增加，抑制作用增强；随着作用时间的延长，呈持续抑制状态。流式细胞仪显示，经1mg／孔5-Fu-PuJA。CNTs处理的实验组MGC803和MNK45细胞凋亡率与阴性对照组比较，差异具有统计学意义（均P〈0．05）；与阳性对照组比较，差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论5-FU-PLLA-CNTs具有良好的药物缓释性能，对胃癌细胞株具有明显的杀伤和抑制增殖作用，其最佳浓度为1mg／孔。
- 顾钧李茂岚吴向嵩吴文广张林丁琦晨杨佳华翁昊丁倩包润发束翌俊刘颖斌
- 关键词：胃肿瘤氟尿嘧啶聚乳酸体外杀伤效应
- 胰十二指肠切除术后胰瘘合并出血再手术方式探讨被引量：8
- 2013年
- 目的探讨胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy,PD)后胰瘘合并出血合理的再手术方式。方法2009年5月至2012年12月上海交通大学医学院附属新华医院共施行PD 143例,其中胰瘘合并出血3例,二次手术残胰行胰液外引流术、捆绑式胰肠吻合术和捆绑式胰胃吻合术各1例。结果 3例术后均未出现严重的并发症,其中第1例病人二次手术6个月后再次行胰液内引流术。结论捆绑式胰肠(胃)吻合以捆绑的方法替代直接缝合实现残胰的重建,是PD术后胰瘘合并出血值得尝试的手术方式。
- 吴文广吴向嵩李茂岚张林张林杨佳华丁琦晨翁昊曹阳翁昊丁倩陆建华顾钧董平
- 关键词：胰瘘再手术捆绑式胰肠吻合术捆绑式胰胃吻合术
- 环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响。方法 (1)以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象:分为正常对照组、5μl的siRNA组、10μl的siRNA组、15μl的siRNA组。经诱导分化成熟,在干扰48 h后用半定量RT-PCR和Western bolt分别检测COX-2 mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。(2)以10μl的siRNA组作为研究对象,分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组,用Western bolt检测nephrin蛋白、BAX蛋白及BCL-Xl蛋白的表达水平。结果 (1)与正常对照组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μl的siRNA组凋亡率明显增高。(2)1μl COX-2 siRNA转染组nephrin蛋白表达显著低于阴性转染组(P<0.05)。(3)与阴性转染组相比,10μl COX-2 siRNA转染组Bax蛋白表达显著上调,而Bcl-xl蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2的基因表达可以导致足细胞凋亡,并随着干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加;在干扰浓度为10μl时,足细胞nephrin蛋白的表达下调;BAX蛋白上调及BCL-Xl蛋白下调参与了足细胞的凋亡。
- 孙怀鑫孔维信汪年松张林丁露露郝传明陈靖
- 关键词：足细胞细胞凋亡
- 环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响,以进一步探讨足细胞凋亡的分子机制。方法将条件永生性小鼠足细胞株随机分为阴性转染组、5μL siRNA组、10μL siRNA组、15μL siRNA组。经诱导分化成熟,在siRNA干扰48 h后用半定量RT-PCR和Western bolt分别检测足细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。将10μL siRNA组分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组三个亚组,用Western bolt检测podocin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果与阴性转染组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μL的siRNA组凋亡率明显增高。足细胞COX-2基因敲低组podocin蛋白表达显著低于足细胞阴性转染对照组(P<0.05)。与足细胞阴性转染对照组相比,足细胞COX-2基因敲低组BAX蛋白表达显著上调,而BCL-X1蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2基因表达可以导致足细胞凋亡,且随着siRNA干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加。在干扰浓度为10μL时,足细胞podocin蛋白的表达下调。BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。
- 张林孔维信孙怀鑫丁露露郝传明陈靖
- 关键词：足细胞细胞凋亡
- Tbxa2r基因敲低对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:观察足细胞血栓素A2受体(Tbxa2r)基因敲低对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)诱导的足细胞凋亡的影响。方法:通过目标序列设计4条siRNA,评价细胞转染效率后,RT-PCR检测siRNA干扰效果,蛋白质印迹法检测Tbxa2r蛋白表达,流式细胞仪检测PAN诱导的MPC5足细胞的凋亡情况。结果:目标序列在转染24 h后几乎没有干扰效果,而在48 h时第3条siRNA(Tbxa2r-mus-1677)干扰序列作用效果最好;在干扰72 h后,Tbxa2r蛋白表达量明显降低。PAN刺激48 h后,空白组与阴性对照组MPC5足细胞没有明显的凋亡现象,阳性对照组与Tbxa2r基因敲低PAN组细胞凋亡和坏死现象明显。结论:PAN能促进Tbxa2r基因敲低的足细胞发生凋亡和坏死。
- 邓振兴孔维信张林孙怀鑫丁露露
- 关键词：足细胞血栓素A2受体细胞凋亡
- 骨髓间充质干细胞与小鼠肝癌肝移植术后复发关系的实验观察被引量：7
- 2014年
- 目的 探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）与小鼠肝癌肝移植术后复发的关系.方法 利用肿瘤细胞爪垫移植成瘤后切除的方法建立肝癌肝移植术后复发模型.建模成功后将绿色萤光蛋白（GFP）标记MSCs注入615小鼠骨髓腔内,体视荧光显微镜观察MSCs在骨髓腔内增殖情况,肿瘤切除时经小鼠尾静脉注入经转化红色荧光蛋白（RFP）标记的615小鼠MSCs细胞,体视荧光显微镜定期观察肝脏复发前后GFP、RFP标记的MSCs在体内移行情况,复发后,处死小鼠,提取局部复发灶,病理切片证实复发灶病理类型.结果 利用肿瘤细胞爪垫移植成瘤后切除的方法可成功建立肝癌肝移植术后复发模型,造模成功率为37.5%,复发小鼠模型的肝脏大体标本和病理切片检查均符合肝癌表现.对30只有肝癌复发的小鼠通过GFP和RFP双通道荧光检测,4例检测出两种荧光活性、1例检测出GFP活性、25例未检测出任何荧光活性.结论 实验结果发现经骨髓腔内与尾静脉途径进入体内的MSCs可参与肝癌肝移植术后的复发;提示肿瘤宿主体内MSCs是肝癌肝移植术后复发可能的重要来源之一,可能是目前传统＂残存肿瘤细胞＂复发转移理论的完善与补充.
- 王雪峰梅佳玮廖传文张林李茂岚丁琪晨李松岗
- 关键词：骨髓间充质干细胞肝肿瘤肝移植
- 环氧合酶-2基因敲低对足细胞相关蛋白表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞相关蛋白表达的影响。方法:以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象,分为足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染组,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平,用Western bolt检测COX-2、Nephrin、Podocin、CD2相关蛋白(CD2AP)的表达水平。结果:与足细胞正常对照组及阴性转染组相比,足细胞COX-2基因敲低组COX-2蛋白表达明显降低、细胞凋亡率明显增高,而Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白表达则显著降低。结论:足细胞COX-2基因敲低可以导致足细胞凋亡,且足细胞Nephrin、Podocin、CD2AP蛋白的表达下调。
- 邓振兴孔维信张林孙怀鑫丁露露郝传明陈靖
- 关键词：足细胞细胞凋亡免疫学环氧合酶2免疫学
