周丽娜
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：天津科技大学更多>>
- 发文基金：科技型中小企业技术创新基金国家微生物菌种资源平台项目更多>>
- 相关领域：化学工程生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 产气肠杆菌菌体内核苷磷酸化酶的诱导表达被引量：1
- 2008年
- 目的:阿糖腺苷(Ara-A)是一种广谱抗病毒药物,临床上用于治疗多种病毒性疾病,同时也是合成阿糖腺苷单磷酸(Ara-AMP)的重要原料、本课题旨在寻找一种高效酶法生产嘌呤类阿糖核苷的方法。方法:以产气肠杆菌完整细胞为酶源,研究产气肠杆菌菌体培养条件对核苷磷酸化酶的影响及其诱导性。结果:胸苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶均可被多种核苷、核苷酸甚至碱基诱导。胞苷或胞苷酸的添加量为15-20mmol/L,诱导时间在0-8小时均可。经胞苷和胞苷酸诱导的菌体可使酶反应时间缩短6倍,大大提高了反应效率。经诱导的菌体,在反应后仍保持较高的核苷磷酸化酶活力:而未经诱导的菌体,一次反应后即丧失大量的酶活力。结论:核苷磷酸化酶的活性可以通过诱导而提高,以此优化阿糖腺苷的生产。
- 魏晓琨刘岩岩周丽娜丁庆豹王昌禄
- 关键词：产气肠杆菌核苷磷酸化酶阿糖腺苷
- 黑曲霉W3350脯氨酰内肽酶在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的:构建pET-PEP重组原核表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法:采用RT-PCR技术从黑曲霉(Aspergillus niger)W3350中扩增出脯氨酰内肽酶(PEP)的基因,插入表达载体pET-22b(+),经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和DNA序列测定验证,将正确的重组质粒转入大肠杆茵BL21(DE3)中,IPTG(终浓度1mmol/L)诱导获得表达。结果:表达产物进行超声破碎,经SDS-PAGE电泳检测,PEP分子质量大约为57kDa,与理论值相符,通过酶活方法测定脯氨酰内肽酶酶活为0.656U/ml,约是出发菌株的5倍。结论:首次成功构建表达载体pET-PEP并在原核细胞中表达,为进一步研究PEP的生物学功能奠定了基础。
- 周丽娜张鹭路福平王晓娟杨剑芳
- 关键词：RT-PCR黑曲霉脯氨酰内肽酶基因表达
- 蚓激酶基因F238在大肠杆菌中的表达及活性测定
- 应用PCR技术扩增获得蚓激酶成熟肽基因F238，并将其克隆至大肠杆菌质粒pET-22b(+)中，构建表达载体pET22b-F238。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，1.0 mmol/L IPTG、26℃条件下诱导...
- 杜连祥王晓娟周丽娜高伟
- 关键词：蚓激酶活性测定大肠杆菌PCR技术肽基因溶栓药物
- 文献传递
- 一种黑曲霉脯氨酸蛋白内肽酶及其制备方法
- 本发明涉及基因工程和酶学领域的一种黑曲霉脯氨酸蛋白内肽酶及其制备方法，其序列编码具有SEQ ID No.2的黑曲霉脯氨酸蛋白内肽酶的氨基酸序列，该氨基酸序列具有SEQ ID No.1中第1-1581位所示的核苷酸序列。该...
- 路福平杨迪王海宽李玉黎明王春霞周丽娜王斌哲向先长
- 文献传递
- 硅胶、脯氨酰内肽酶处理对啤酒非生物稳定性的影响被引量：4
- 2008年
- 采用SDS-PAGE电泳,对分别经硅胶吸附和脯氨酰内肽酶水解的啤酒后酵液进行蛋白分布研究;通过测定浊度和泡持性研究二者对啤酒非生物稳定性的影响。结果表明经硅胶吸附和脯氨酰内肽酶水解后的蛋白分子量均集中在8ku-14.4ku和35ku-45ku;经处理后的样品浊度明显下降,而泡持性没有显著变化。其中用脯氨酰内肽酶处理时浊度下降更明显,且对啤酒的泡持性影响更小。因此,在啤酒后酵液中添加脯氨酰内肽酶,能够有效的除去啤酒冷混浊蛋白,提高啤酒的非生物稳定性。
- 向先长周丽娜李玉路福平
- 关键词：硅胶脯氨酰内肽酶非生物稳定性
- 黑曲霉脯氨酸蛋白内肽酶基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2008年
- 以黑曲霉(A.niger)TCCC41013的总RNA作为模板,通过RT-PCR扩增出含自身信号肽的脯氨酸蛋白内肽酶基因,将其插入pUCm-T载体上,经PCR和酶切鉴定后进行测序并分析。所克隆的PEP基因全长为1 581bp,编码526个氨基酸残基,成熟肽为504个氨基酸残基。与GeneBank中已报道的A.niger CBS513.88的PEP序列同源性最高,达到99.75%。脯氨酸蛋白内肽酶是一种新型的丝氨酸蛋白酶,黑曲霉PEP与已克隆的其他菌种的PEP同源性不高。
- 杨迪高艳玲路福平周丽娜
- 关键词：黑曲霉克隆
- 一种黑曲霉脯氨酸蛋白内肽酶及其制备方法
- 本发明涉及基因工程和酶学领域的一种黑曲霉脯氨酸蛋白内肽酶及其制备方法，其序列编码具有SEQ ID No.2的黑曲霉脯氨酸蛋白内肽酶的氨基酸序列，该氨基酸序列具有SEQ ID No.1中第1－1581位所示的核苷酸序列。该...
- 路福平杨迪王海宽李玉黎明王春霞周丽娜王斌哲向先长
- 文献传递
- 脯氨酰内肽酶水解啤酒蛋白的研究被引量：1
- 2008年
- 将脯氨酰内肽酶(PEP)添加在啤酒后酵液中,通过冷混浊实验分析脯氨酰内肽酶对啤酒非生物稳定性的影响。结果表明,添加5mg/L的脯氨酰内肽酶就能有效地提高啤酒的非生物稳定性;采用75%硫酸铵沉淀啤酒蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,结果显示,啤酒蛋白电泳图谱的分布主要表现为8～14.4 ku的窄带和35～45 ku的宽带,而经脯氨酰内肽酶处理的啤酒蛋白电泳图谱中8～14.4 ku的条带消失,说明此蛋白被脯氨酰内肽酶水解。
- 周丽娜张鹭路福平杨迪向先长
- 关键词：脯氨酰内肽酶冷混浊SDS-PAGE电泳
