目的:探讨节律基因CRY1(cryptochrome circadian clock 1)在肝癌组织中的表达情况及对肝癌细胞生长的作用。方法:利用实时荧光定量PCR、Western blotting及免疫组织化学染色法,检测CRY1在肝癌组织及细胞中的表达;利用肝癌公共数据信息,分析和验证CRY1在肝癌组织中的表达;真核表达质粒将肝癌细胞CRY1过表达后,采用MTS和Annexin V-FITC/PI双染法,分别检测CRY1对细胞增殖和凋亡的影响。结果 CRY1在癌组织中阳性率为57.5%(23/40),癌旁组织中阳性率为87.5%(35/40),癌中CRY1表达低于癌旁的占80%(32/40),与癌旁组织比较,CRY1蛋白在肝癌组织中的表达明显降低,差异有统计学意义(t=7.53,P<0.001)。CRY1在3个肝癌公共数据信息显示,与对应癌旁组织相比,其在癌组织中表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(TCGA:413.62 vs 335.17,P=0.0155;GSE22058:397.67 vs 360.08,P=0.0207;GSE25097:1.627 vs 1.433,P<0.0001)。同时CRY1在被检测的4株肝癌细胞系中表达也显著低于永生化的正常肝细胞。与对照组比,过表达CRY1组细胞增殖能力明显降低,两组间差异有统计学意义(1.100 vs 0.662,P<0.0001);与对照组比,过表达CRY1组细胞凋亡显著增加(凋亡细胞百分比:7.9 vs 17.5,P=0.0014)。结论:节律基因CRY1在肝癌中低表达,同时CRY1抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡。
目的:探讨节律分子CRY2(cryptochrome circadian clock 2)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达和对肝癌细胞生长、转移的影响。方法:利用免疫组织化学染色法,分析65例HCC组织中CRY2分子的表达;利用233例HCC公共数据验证CRY2分子在HCC组织中的表达变化;实时定量PCR和Western blot检测肝癌细胞中CRY2的表达。MTS法和Transwell法,分别检测CRY2对肝癌细胞生长和转移的影响。结果:对照组CRY2阳性率为87.7%(57/65),而在肝癌组织中49.2%(32/65)CRY2阳性,CRY2在HCC组织中的表达显著低于对照组,差异有统计学意义(t=10.61,P<0.0001)。233例HCC公共数据(GSE14520)中,癌组织CRY2表达显著下调,差异具有统计学意义(6.663 vs 6.160,P<0.0001)。4株肝癌细胞株中CRY2表达与正常肝细胞株相比,CRY2表达同样显著下调。在肝癌SMMC-7721和Hep 3B细胞中,与对照组比,过表达CRY2组细胞生长能力显著降低,差异有统计学意义(SMMC-7721:0.899 vs 0.473,P<0.0001;Hep 3B:0.785 vs 0.435,P<0.0001)。在肝癌SMMC-7721和Hep 3B细胞中,过表达CRY2组细胞侵袭能力显著降低(SMMC-7721:侵袭细胞数216.33 vs 62.33,P=0.001;Hep 3B:侵袭细胞数169.67 vs 52.33,P=0.015);结论:CRY2分子在HCC中表达下调,同时高表达CRY2会抑制肝癌细胞生长和转移。
