董海辉
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家科技重大专项江苏省高校高新技术产业发展项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 鼠抗人B7-2分子单链抗体基因的构建及其在家蚕中的表达被引量：2
- 2010年
- B7-2蛋白为免疫球蛋白超家族(IGSF)成员之一。采用PCR法从分泌鼠抗人B7-2抗体的杂交瘤细胞株克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因间引入连接肽(Gly4Ser)3编码序列,体外构建抗人B7-2的鼠源单链抗体基因B7-2-ScFv。利用新型杂交病毒HyNPV的Bac-to-Bac表达系统,将B7-2-ScFv基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTa中,获得重组转移载体pFastBacHTa-B7-2-ScFv,转化大肠杆菌DH10Bac,获得重组杆粒Bacmid-B7-2-ScFv。将此重组杆粒的DNA转染Sf9细胞,获得重组病毒HyNPV-ScFv。感染该重组病毒的BmN细胞经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,至感染24h时目的蛋白已有表达,96h达到最高表达水平,表达产物的分子质量约31kD。用该重组病毒感染家蚕5龄起蚕,感染后96h蚕体表现出明显的发病症状。RT-PCR结果表明,5龄起蚕感染后48h,在脂肪体内已有目的基因转录,一直持续到感染后120h;SDS-PAGE和Western blotting分析表明,5龄起蚕感染96h后方可在脂肪体中检测到目的蛋白表达。构建并在家蚕中成功表达鼠抗人B7-2单链抗体,为深入研究和开发该抗体奠定了基础。
- 胡静平董海辉邱玉华陈永井王文兵黄光镁吴小锋朱江
- 关键词：单链抗体家蚕
- 抗人B7-2单链抗体基因的构建及表达研究
- 鼠源性单抗在人体使用后可产生人抗鼠抗体（Human Anti—Mouse Antibody，HAMA）反应，而且分子量大，不能有效进入病灶部位，临床使用受到限制。单链抗体（single chain antibody，Sc...
- 董海辉
- 关键词：B7-2单链抗体原核表达
- 文献传递
- 抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2010年
- 在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。
- 董海辉邱玉华陈永井胡静平黄光镁朱江
- 关键词：单克隆抗体单链抗体B7-2原核表达
- 太湖中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)养殖模式优化及其生态环境效应研究被引量：1
- 2006年
- 于2003年3—10月,通过在太湖中设置15个封闭性实验围隔,构建出5种生态型中华绒螯蟹养殖模式,即放养中华绒螯蟹(规格6·25±0·36g/ind)+螺蛳+水草分别为:3000ind/ha+0kg/ha+3000kg/ha(Ⅰ)、3000ind/ha+2250kg/ha+3000kg/ha(Ⅱ)、4500ind/ha+2250kg/ha+6000kg/ha(Ⅲ)、4500ind/ha+3375kg/ha+6000kg/ha(Ⅳ)、6750ind/ha+3375kg/ha+6000kg/ha(Ⅴ),比较分析其养殖效果及其生态环境效应。结果表明,生物学效果综合指数依次为Ⅳ>Ⅴ>Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ,其中Ⅳ、Ⅴ、Ⅲ显著高于Ⅱ、Ⅰ(P<0·05)。各养殖模式的水温、pH值、CODCr含量和浮游动物多样性指数、底栖动物多样性指数与湖区无显著性差异(P>0·05),而各养殖模式的DO和Ⅲ、Ⅳ的SD、水色、电导率、TSS、N、P、浮游植物密度和浮游植物多样性指数等理化和生物环境指标均显著优于湖区(P<0·05);N、P平衡分析表明,在全部采收养殖体系内水草的情况下,各养殖模式均能从水体中净输出N、P,其中Ⅲ、Ⅳ的净输出效率最高。相关分析显示,养殖体系内的水质环境状况随着水草和螺蛳数量的增加而得到显著改善。因此,增栽水草、放养螺蛳、适中的中华绒螯蟹放养量和适宜的管理措施是维持中华绒螯蟹养殖生态系统环境效益和养殖效益良好的重要条件,有利于太湖渔业生产和环境保护的可持续发展。
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- 关键词：中华绒螯蟹养殖模式生态环境太湖
