江乐
- 作品数：10 被引量：15H指数：3
- 供职机构：曲阜师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源抗HBsAg dsFv抗体靶向干扰素复合基因的克隆和表达
- 抗体技术经历血清多克隆抗体、单克隆抗体阶段后发展到了第三代抗体-基因工程抗体。我们在前期研究中通过噬菌体抗体库筛选到人源抗HBsAg基因工程抗体,利用PCR定点突变获得二硫键稳定的dsFv/(disufide-stabi...
- 江乐
- 关键词：乙肝病毒表面抗原干扰素Α质粒构建
- 文献传递
- 人PSCA真核表达质粒的构建及稳定转染B16细胞系的建立被引量：1
- 2010年
- 目的:构建真核表达质粒pcDNA3.1-PSCA,通过稳定转染建立高效表达人前列腺干细胞抗原(PSCA)的小鼠黑色素瘤B16细胞系。方法:利用PCR扩增出人PSCA全长基因的cDNA编码区序列,使用基因重组技术将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,得到重组表达质粒pcDNA3.1-PSCA。双酶切及测序鉴定后,利用脂质体法将其转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,G418加压筛选后得到阳性克隆。通过流式细胞术、免疫荧光及Western blot检测PSCA在细胞系中的表达情况。结果:经测序及双酶切鉴定,pcDNA3.1-PSCA重组质粒构建正确;稳定转染人PSCA的B16细胞系表达率接近100%。结论:建立的稳定转染人PSCA的B16细胞系能够高效表达PSCA基因,为抗前列腺癌疫苗的功能研究奠定了基础。
- 任杰高江平阎瑾琦王伟肖毅江乐于继云
- 关键词：前列腺干细胞抗原稳定转染肿瘤免疫治疗
- 人hCGβ真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立被引量：2
- 2010年
- 目的：构建人hCGβ真核表达载体，稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，建立稳定表达人hCGβ的小鼠黑色素瘤细胞系。方法：采用PCR方法扩增出人hCGβ全长基因的cDNA编码区序列，利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES—neo中，并加入酶切位点和6×His标签，得到重组表达质粒pIRES—neo—hCGβ-（His）6。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，经G418加压筛选出阳性克隆。RT—PCR、Western blot及免疫荧光检测人hCGβ在B16细胞中的表达。结果：经限制性内切酶鉴定及序列分析，pIRES—neo—hCGβ一（His）6重组体构建正确，最终建立的表达人hCGβ基因的B16细胞系阳性率高于90％。结论：成功构建了真核表达载体plRES—neo—hCGβ-（His）6，建立的稳定转染人hCGβ小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达hCGβ基因。该稳定转染细胞系的建立为进一步研究人hCGβ抗肿瘤基因疫苗的功能提供了良好的实验基础，为hCGβ在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。
- 张亮王宇江乐阎瑾琦王越胡明明于继云
- 关键词：HCGΒ稳定转染小鼠黑色素瘤细胞肿瘤免疫治疗
- 人前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建包含人前列腺干细胞抗原(PSCA)的原核表达质粒,并进行诱导表达、蛋白纯化及鉴定。方法通过PCR扩增人PSCA基因片段,与过渡载体pGEM(-TEasy连接后进行测序鉴定,鉴定正确后,将PSCA基因片段酶切并插入含有谷胱甘肽s-转移本科GST标签的原核表达载体pET42a,得到重组质粒pET42a-PSCA。将pET42a-PSCA转化大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达GST-PSCA融合蛋白,用Glutathione-Sepharose4B柱对融合蛋白进行纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果 PSCA基因的PCR产物大小与预期相符,测序结果与GenBank中的PSCA序列一致。pET42a-PSCA原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE及Western blotting检测显示融合蛋白诱导表达成功,分子量大小约为43kD。结论成功构建了人PSCA的原核表达质粒,能在BL21菌株中表达,且纯化后得到较高纯度的GST-PSCA融合蛋白,为后续抗前列腺癌基因疫苗研究奠定了基础。
- 任杰高江平阎瑾琦江乐于继云
- 关键词：质粒重组融合蛋白质类
- 刺猬不同季节脊髓胸段NOS阳性神经元的分布与形态
- 高玲江乐龙娣高燕卢少俊郭炳冉
- 人源抗HBsAg dsFv抗体靶向干扰素重组质粒的构建与表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建抗体靶向干扰素的重组表达质粒pEE14.1-dsFvαpr+,并在真核细胞中验证重组质粒的表达情况。方法通过重叠延伸PCR将dsFv抗体重链基因与带正电荷的DNA负载区基因融合,并在抗体轻链α干扰素融合基因3′端连入6×His标签。先在过渡载体pCI-GPI中实现轻、重链复合基因的连接,然后连入pEE14.1中,最终构建重组表达质粒pEE14.1-dsFvαpr+。将重组质粒LipofectamineTM2000瞬时转染到CHO-K1细胞,采用RT-PCR、ELISA和Western blotting方法验证目的基因的表达。结果重组质粒经酶切鉴定和测序验证与设计完全一致。RT-PCR结果显示只有重组质粒转染后的细胞能够扩增出1700bp的目的条带,ELISA检测瞬时转染细胞上清α干扰素的浓度约为1.1ng/ml,Western blotting检测显示重组质粒在转染细胞上清中获得表达。结论实现了抗体靶向干扰素在单一质粒中的高效表达,通过对表达蛋白的电性改造有利于后期治疗慢性乙肝的抗体靶向纳米粒药物的研制。
- 江乐阎瑾琦郭炳冉任杰于继云
- 关键词：干扰素Α质粒
- 人白细胞介素12双亚基共表达pVAX1-IRES-hIL12载体的构建与表达被引量：3
- 2010年
- 目的构建下游可以共表达人白细胞介素12(hIL12)双亚基的双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES-hIL12。方法通过搭桥PCR获得人白细胞介素12P35及P40双亚基的融合基因P35-F2A-P40,插入DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293-T细胞,ELISA检测融合基因的表达。结果酶切鉴定和序列分析表明融合基因与设计完全一致,融合基因在体外细胞培养液检测中获得分泌表达。结论该载体的成功构建可以为肿瘤基因疫苗研制提供免疫增效载体。
- 王伟高江平阎瑾琦肖毅任杰王宇江乐于继云
- 关键词：白细胞介素12基因融合真核细胞IRES
- 刺猬嗅球冬眠期与非冬眠期c-Fos表达的差异被引量：4
- 2011年
- 利用免疫组化法检测c-Fos蛋白在不同季节刺猬嗅球各层次的表达差异,探讨c-Fos、嗅觉、冬眠三者的关系。分别选取春、夏、秋、冬四个季节各6只野生健康刺猬,固定剥离嗅球,石蜡切片,免疫组化显色,拍片,载入Motic Images Advanced 3.2软件,测量四个季节刺猬嗅球各层次c-Fos的表达率,将结果载入GraphPad Prism4软件分析,Microsoft Excel作图。结果表明:c-Fos蛋白在成年刺猬嗅球各层均有不同程度的表达,阴性对照不着色,且表现出明显的季节性差异。1)与秋季相比,冬眠期c-Fos蛋白在刺猬嗅球各层次的表达均有极显著的降低(P<0.01);2)与夏季相比,冬眠期c-Fos蛋白在外网丛层、僧帽细胞层、颗粒细胞层的表达有极显著降低(P<0.01),在嗅神经层、嗅小球层、室管膜层的表达也有显著降低(P<0.05);3)与冬眠期相比,春季c-Fos蛋白在嗅小球层、僧帽细胞层、颗粒细胞层的表达有极显著的升高(P<0.01),在嗅神经层、外网丛层、室管膜层的表达却没有显著变化(P﹥0.05);4)嗅神经层c-Fos的表达在春季显著低于秋季,夏季与秋季没有显著差异。颗粒细胞层夏季显著低于秋季(P<0.05)。秋季c-Fos在其余各层次的表达与春季、夏季相比都有极显著的提高(P<0.01)。结论:秋季刺猬嗅球神经元最活跃,嗅觉最灵敏,冬眠期刺猬嗅球活跃性大大降低,嗅觉系统最迟钝。c-Fos在刺猬嗅球中的强表达表明其在嗅觉信息的传递中可能发挥一定作用,c-Fos表达率的显著季节性差异揭示了刺猬嗅球的活跃性与其冬眠具有一定的相关性。
- 龙娣郭炳冉高玲江乐高燕卢少俊
- 关键词：刺猬嗅球C-FOS冬眠
- 人PSCA真核表达载体的构建及表达
- 2010年
- 目的构建含有信号肽及FLAG标签的人前列腺干细胞抗原(PSCA)真核表达载体,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法通过PCR方法获得SIG-FLAG基因片段及人PSCA基因片段,插入到真核表达载体pIRES-neo中。构建的重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA转染293T细胞,利用流式细胞仪、免疫荧光及RT-PCR方法检测其表达情况。结果PCR扩增出的SIG-FLAG及PSCA基因测序正确,酶切鉴定证明重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA构建成功;检测结果显示重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA在293T细胞中得到表达。结论成功构建了重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA,且在293T细胞中能有效表达,为后续转人PSCA基因细胞系的构建工作奠定了基础。
- 任杰高江平阎瑾琦肖毅王伟王宇江乐于继云
- 关键词：293T细胞
- 东北刺猬非冬眠期体温和内脏器官重量的季节性变化被引量：3
- 2010年
- 异温动物的体温和内脏器官重量与其所处的环境密切相关,具有一定的可塑性。本文以活捕于鲁西南山区的东北刺猬为对象,比较了其体温和内脏器官的性别差异和季节变化,旨在了解其对环境的适应性特征。结果表明:1)东北刺猬的体温以夏季最高,且与环境温度呈正相关关系,但性别间无差异;2)东北刺猬的肥满度指数以春季最高,秋季最低,亦无性别差异;3)东北刺猬的内脏器官重量与体重呈显著的正相关关系,雌雄脾脏重量以春季最大,夏季最小;4)季节与性别间交互作用对肾上腺重量的影响显著,雄体睾丸和附睾秋季最轻,雌体子宫则秋季最轻;5)雌体心率显著高于雄体,无季节性差异;非冬眠期心电图中各个波持续时间无性别差异,QRS波群和T波的持续时间在秋季显著长于夏季和春季,S-T段相反,秋季最短。本文研究结果提示:东北刺猬非冬眠期的心率与体温变化无关,心脏功能受季节变化影响较小。体温、肥满度、脾脏、睾丸和附睾、子宫、心电等生理指标的可塑性对于东北刺猬适应环境具有重要意义。
- 高玲郭炳冉王振龙江乐刘丹龙娣
- 关键词：体温内脏器官季节性
