- 改进的免疫荧光细胞染色方法
- 本发明公开了一种改进的免疫荧光细胞染色方法，包括固定/通透、通透、表面染色和核内染色、洗涤、重悬共5个步骤；本发明方法是对eBioscience公司的Foxp3免疫荧光细胞染色方法的改进，将二步多重染色法改为一步多重染色...
- 倪兵赵韧吴玉章许桂莲王庆红付小岚贾正才王靖雪李健石晶磊黄泽民田易田志强
- 文献传递
- 改进的免疫荧光细胞染色方法
- 本发明公开了一种改进的免疫荧光细胞染色方法，包括固定/通透、通透、表面染色和核内染色、洗涤、重悬共5个步骤；本发明方法是对eBioscience公司的Foxp3免疫荧光细胞染色方法的改进，将二步多重染色法改为一步多重染色...
- 倪兵赵韧吴玉章许桂莲王庆红付小岚贾正才王靖雪李健石晶磊黄泽民田易田志强
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- 靶向肿瘤的模拟逆转录病毒（mimoretrovirus）介导的针对人POKEMON基因的RNAi策略在宫颈癌基因治疗中的作用研究
- 宫颈癌是最常见的恶性肿瘤之一,由于肿瘤疾病的本质是“基因病”,宫颈癌也不例外,故从理论上讲,从基因水平来解决癌症问题是最佳途径。siRNA能够高效、特异地抑制靶基因的表达,已经成为应用于临床疾病尤其是肿瘤防治研究的有力工...
- 石晶磊
- 关键词：宫颈癌基因治疗POKEMON
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- Pokemon基因siRNA逆转录病毒的制备及其对Hela细胞增殖的影响被引量：3
- 2008年
- 目的针对多种肿瘤细胞高表达Pokemon基因的特性,制备表达针对Pokemon基因的siRNA的逆转录病毒,研究其对感染肿瘤细胞中Pokemon基因沉默情况,探讨肿瘤防治的新方法。方法首先利用siRNA预测软件得到4条siRNA编码DNA序列,再构建重组逆转录病毒siRNA表达质粒;利用RT-PCR技术筛选出高表达Pokemon基因的肿瘤靶细胞。然后,将重组质粒转染靶细胞,利用实时定量RT-PCR和MTT等方法筛选出沉默效果最佳的siRNA。利用逆转录病毒包装细胞制备重组病毒,鉴定病毒滴度及其对体外培养细胞中Pokemon基因的沉默效应。结果通过酶切鉴定和测序等方法证实了预测出的四条siRNA编码DNA片段成功地构建到逆转录病毒表达载体pSilencer5.1-H1中。通过将这些重组质粒转入高表达Pokemon基因的Hela肿瘤细胞中,抗生素压力筛选出相应表达各种siRNA的细胞株,再从中筛选出了1个有50%以上沉默效应的候选siRNA。利用这一条siRNA表达质粒,在逆转录病毒包装细胞中制备出了滴度为105cfu/mL的重组病毒。此重组病毒感染Hela细胞后能显著降低其中Pokemon基因的表达。结论成功制备了表达人Pokemon基因siRNA的重组逆转录病毒,并且在体外实验中证实了该病毒能对肿瘤细胞Hela的增殖产生明显的抑制作用,为下一步的体内抗肿瘤研究提供了有力的佐证。
- 石晶磊贾正才邓一静吴玉章倪兵
- 关键词：POKEMON基因逆转录病毒RNA肿瘤治疗
- 靶向肿瘤的模拟逆转录病毒及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种靶向肿瘤的模拟逆转录病毒，以多聚赖氨酸和RGD肽组成的融合多肽为基因载体，包裹肿瘤相关基因的siRNA逆转录病毒重组表达载体，自组装而成；其制备方法包括融合多肽的制备、siRNA逆转录病毒重组表达载体的制...
- 倪兵石晶磊
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- 用于小型动物肝脏淋巴细胞分离的肝脏灌注方法
- 本发明公开了一种用于小型动物肝脏淋巴细胞分离的肝脏灌注方法，将动物处死后，经后腔静脉进行灌注；本发明方法操作简便、快速，循环血液排除充分，且不需要特殊设备，实验成本低，能够达到理想的肝灌注效果，适合于大多数实验室在进行小...
- 赵韧倪兵吴玉章王庆红贾正才王靖雪李健石晶磊黄泽民田易田志强沈小丽
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- 用于小型动物肝脏淋巴细胞分离的肝脏灌注方法
- 本发明涉及医学领域，公开了一种用于小型动物肝脏淋巴细胞分离的肝脏灌注方法，将动物处死后，经后腔静脉进行灌注；本发明方法操作简便、快速，循环血液排除充分，且不需要特殊设备，实验成本低，能够达到理想的肝灌注效果，适合于大多数...
- 赵韧倪兵吴玉章王庆红贾正才王靖雪李健石晶磊黄泽民田易田志强沈小丽
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- 靶向肿瘤的模拟逆转录病毒及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种靶向肿瘤的模拟逆转录病毒，以多聚赖氨酸和RGD肽组成的融合多肽为基因载体，包裹肿瘤相关基因的siRNA逆转录病毒重组表达载体，自组装而成；其制备方法包括融合多肽的制备、siRNA逆转录病毒重组表达载体的制...
- 倪兵石晶磊
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