马龙洋
- 作品数：12 被引量：48H指数：5
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结肠造口并发症的处理和预防被引量：10
- 2011年
- 目的探讨Miles手术结肠造口旁并发症的处理和预防。方法回顾性分析9例结肠造口旁各种并发症的处理。结果 9例患者并发症,1例结肠造口回缩腹腔,重新造口治愈;3例造口狭窄,开腹重新造口治愈;1例结肠脱出,切除脱出肠管治愈;3例造口肠管坏死,2例保守治愈,1例开腹手术重新造口治愈;1例造口旁疝,重新开腹治愈。结论重在预防,我们在行Miles手术时总结出的两句话,即2.5cm皮肤3指洞;3cm肠管要固定,可预防造口并发症的发生。
- 高志清马龙洋
- 关键词：结肠造口手术后并发症
- 全人源性肝癌单链抗体的表达、纯化及功能鉴定被引量：6
- 2007年
- 目的:在大肠杆菌中表达人源性肝癌单链抗体(scFv),并分析他的结合活性。方法:应用噬菌体表面呈现技术获得人源性肝癌scFv,利用重叠延伸PCR将VL和VH基因以(Gly4ser)3linker连接成单链,插入表达载体pET28a(+),诱导目的蛋白表达,对包涵体进行溶解、复性、纯化,得到可溶性目的蛋白,应用非竞争细胞ELISA检测与肝癌细胞结合的特异性及结合能力。结果:在A600为0.8时开始诱导,持续6h,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的26%,包涵体经过复性纯化后,得到纯度达到95%的重组scFv,其亲和常数为:3.6×107mol/L。结论:实现了人源性肝癌scFv的蛋白表达,抗体蛋白与肝癌细胞具有较强的特异性结合能力,为今后进行免疫学检测和开发肿瘤靶向治疗提供了研究手段。
- 赵清涛马龙洋薛国柱赵爱志窦科峰
- 关键词：肝癌单链抗体生物活性
- hTERT siRNA表达载体的构建及对转染的HeLa细胞生长抑制作用被引量：7
- 2005年
- 目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用.方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况.结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢.结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.
- 赵英任君琳孟艳玲张瑞马龙洋鲍炜王成济杨安钢
- 关键词：RNA干涉端粒酶HELA细胞
- 靶向hTERT RNA干涉促进人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究被引量：2
- 2005年
- 目的:利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法:将成功构建的针对hTERT的siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体转染HeLa细胞,通过透射电镜、免疫印迹和流式细胞术(FCM)等方法检测人宫颈癌HeLa细胞的凋亡情况。结果:构建的siRNA表达载体可以诱导HeLa细胞发生凋亡。结论:针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体稳定转染HeLa细胞,可诱导HeLa细胞发生凋亡。
- 赵英任君琳张瑞马龙洋鲍炜王成济杨安钢
- 关键词：RNA干涉人端粒酶逆转录酶凋亡HELA细胞
- 靶向X区的siRNA抑制乙型肝炎病毒基因的表达和复制被引量：4
- 2006年
- 目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)X基因的siRNA表达载体,观察其对HBV基因表达和复制的影响。方法设计并合成针对HBVX区基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG22·2·15细胞,潮霉素抗性筛选获得稳定细胞克隆,对所得细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测靶基因mRNA的抑制效果,荧光定量PCR检测HBVDNA。结果成功构建了针对HBVX基因的siRNA表达载体pSUPER-X1和pSUPER-X2,两种siRNA均能明显抑制HepG22·2·15细胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑制率分别为97%和88%,RT-PCR结果显示HBV的mRNA表达降低,荧光定量PCR结果证实siRNA能降低HBVDNA拷贝数2个数量级。结论载体产生的针对HBVX基因的siRNA能高效、特异地抑制HBV基因的表达和复制。
- 刘家云郝晓柯李庆霞黄红艳马龙洋温伟红贾林涛杨安钢
- 关键词：肝炎病毒乙型小分子干扰转染聚合酶链反应
- 靶向X区的siRNA抑制HBV基因的表达和复制
- ＜正＞RNA干涉（RNA interference,RNAi）是双链RNA（double- strand RNA,dsRNA）介导的、序列特异的转录后基因沉默（post- transcriptional gene sil...
- 刘家云郝晓柯李庆霞马龙洋温伟红贾林涛杨安钢
- 文献传递
- 靶向X区的siRNA抑制HBV基因的表达和复制
- ＜正＞RNA干涉（RNA interference,RNAi）是双链RNA （double-strandRNA,dsRNA）介导的、序列特异的转录后基因沉默（post transcriplional gene silen...
- 刘家云郝晓柯李庆霞马龙洋温伟红贾林涛杨安钢
- 文献传递
- 人源肝癌单链抗体(scFv)基因真核表达载体的构建和表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人源肝癌单链抗体(scFv)基因真核表达载体pSectag2/scFv并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中获得表达。方法:利用噬菌体细胞内重组技术筛选得到了肝癌特异性scFv,用PCR技术及核酸内切酶技术将其克隆入真核表达载体pSectag2,构建重组载体pSectag2/scFv,测序鉴定后,电转染CHO细胞,利用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达情况。结果:将750bp人源肝癌scFv插入真核表达载体pSectag2,经DNA测序鉴定正确,成功构建了pSectag2/scFv。将pSectag2/scFv转染CHO细胞后获得目的蛋白表达。SDS-PAGE和Western blot检测表明目的蛋白Mr约为34000。结论:成功地构建抗scFv真核表达载体pSectag2/scFv,并在CHO细胞中获得表达,为人源肝癌scFv的进一步的应用研究提供依据。
- 李丙所马龙洋周红兵党军强任彦顺窦科峰
- 关键词：肝癌单链抗体CHO细胞基因表达
- 针对EGFP的siRNA表达载体的构建、鉴定及哺乳动物细胞中NS5B的表达对RNAi效应的影响
- RNA干涉/(RNA imerference,RNAi/),是双链RNA介导的、序列特异的转录后基因沉默效应,它通过双链RNA介导的靶序列特异性的降解从而抑制相应基因的表达。自1998年发现以来,特别是siRNA表达载体...
- 马龙洋
- 关键词：RNA干扰增强型绿色荧光蛋白
- 文献传递
- 针对S基因的siRNA抑制HepG22.2.15细胞中HBV基因的表达被引量：3
- 2005年
- 目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因的siRNA(shortinterferingRNA)表达载体pSUPER-S1和pSUPER-S2,观察其对HepG22.2.15细胞中的HBV基因表达的影响。方法设计并合成针对HBVS区基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG22.2.15细胞,经200μg/ml潮霉素抗性筛选,4周后获得稳定细胞克隆,对所得细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,免疫荧光染色检测细胞内抗原的表达,同时用RT-PCR检测靶基因mRNA的抑制效果。结果成功构建了针对HBVS基因的siRNA表达载体pSUPER-S1和pSUPER-S2,两种siRNA均能明显抑制HepG22.2.15细胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑制率分别为83%和78%,免疫荧光染色显示siRNA能抑制细胞内抗原的合成,RT-PCR结果证实HBV的mRNA表达降低,而无关序列的siRNA和对照则无此作用。结论载体产生的针对HBVS基因的siRNA能稳定、高效、特异地抑制HBV基因的表达。
- 刘家云马龙洋李庆霞黄红艳温伟红贾林涛薛采芳李英辉王成济杨安钢
- 关键词：乙型肝炎病毒2.2.15细胞HBV基因S基因
