杨桢
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 肿瘤相关成纤维细胞促进原代胰腺癌细胞生长及人源性异种移植瘤模型体内成瘤
- 2020年
- 目的优化人原代胰腺导管癌(PDAC)细胞及肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的分离及培养方法,验证CAFs对原代PDAC细胞的体外生长以及其对高度免疫缺陷模型NOG小鼠体内成瘤的影响,以探索人源性异种移植瘤(PDX)模型构建的新方法。方法首先原代培养手术切除的PDAC组织。以原代PDAC细胞单独培养为对照,观察CAFs和原代PDAC细胞共培养对PDAC细胞传代生长活性的影响。最后在NOG小鼠肩胛部注射混合培养的原代PDAC细胞和CAFs,观察PDX模型建模情况。结果原代PDAC细胞在体外单独培养传代少,均在5代及以内停止生长;与CAFs共培养可促进原代PDAC细胞生长活性,可稳定传至10代以上。NOG小鼠体内注射混合细胞(原代PDAC细胞+CAFs)建模2~3周即可形成肿瘤,而注射CAFs无肿瘤形成。混合细胞法建模有13例(92.9%)成瘤,单一细胞法有9例(64.3%)成瘤,可能因为样本量少,二者成瘤率比较差异无统计学意义(P=0.167);并且肿瘤细胞注射后2、4、6、8周时混合细胞法建模的肿瘤体积均明显大于对应观察时间点单一细胞法建模的肿瘤体积(P<0.01)。结论CAFs对原代PDAC细胞生长传代具有促进作用,原代PDAC细胞与CAFs共培养法可显著提高PDAC原代培养稳定传代,原代PDAC细胞与CAFs混合培养的细胞注射可提高NOG小鼠PDX建模成功率。
- 陈拥华李程梁艳周利杨桢刘续宝
- 关键词：肿瘤相关成纤维细胞胰腺癌
- 小鼠肺部微循环活体显微成像被引量：1
- 2019年
- 目的鉴于肺部疾病的高发病率以及活体动物实验在揭示生物现象方面的优势,建立一套利用共聚焦显微镜进行小鼠肺部活体原位成像的方法。方法将10只BALB/c雄性小鼠随机分为A、B两组,每组各5只。利用自制的稳定装置,控制小鼠局部肺组织的运动以获取稳定的观察面,然后用激光共聚焦显微镜进行视频拍摄(5 min)。拍摄过程中,A组小鼠经尾静脉注射异硫氰酸荧光素-葡聚糖,B组注射绿色荧光蛋白-血小板(经tie2-cre&rosa26-tomato-EGFP转基因black C57雄性小鼠的血液提取),A组用于观察肺部灌注情况以及该方法对肺组织的损伤情况,B组用于观察血小板运动的情况。结果通过该套方法获得了肺组织结构清晰、稳定的图像,随时间推移,5只小鼠第0、30、60、120、180和300秒这6个时间点肺泡面积的均值依次为(1 603±181)、(1 588±183)、(1 528±363)、(1 506±353)、(1 437±369)、(1 549±307)μm^2,肺泡大小未随时间变化(P>0.05);视频画面流畅,血小板的快速运动均被记录而且颗粒清晰、无拖尾;观察结束后,苏木精-伊红染色显示肺组织无明显损伤。结论该套方法可用于小鼠肺部活体状态下微循环系统的观察和研究,为其他肺部疾病在活体状态下的研究提供了方法学基础。
- 杨桢苏波钟康颖李岩松张杰
- 关键词：活体激光共聚焦显微镜
- 一种用于肌腱二级纤维束及周围腱内膜形态观察的扫描电镜制样方法研究
- 2020年
- 目的探讨一种用于肌腱二级纤维束及周围腱内膜形态观察的扫描电镜制样方法。方法以猪趾浅屈肌腱为例,将肌腱在常温下横切为1 cm左右的肌腱段,通过双光子荧光显微镜观察组织完整性,行冰冻切片联合特殊Masson染色,观察肌腱二级纤维束及周围腱内膜分布情况。另取肌腱段若干经10%中性甲醛固定4 h,分为5组,采用不同的扫面电镜制样方法:A组,单纯梯度脱水;B组,行冰冻切片,再将肌腱切片进行梯度脱水;C组,梯度脱水至70%,行冰冻切片,再将肌腱切片进行梯度脱水;D组,梯度脱水至80%,行冰冻切片,再将肌腱切片进行梯度脱水;E组,梯度脱水至100%,行冰冻切片。各梯度脱水试剂为乙醇配制,梯度脱水终浓度均为100%。冰冻切片厚度均为100μm。经临界点干燥喷金后行体视显微镜和扫描电镜观察。结果双光子二次谐波显微成像观察示肌腱结构完整连续。Masson染色观察示周围腱内膜较薄区域难以辨别独立胶原纤维束。体视显微镜观察示肌腱切片电镜制样后大体完整,三级纤维束的周围腱内膜清晰可见。扫描电镜观察示A、D、E组肌腱组织呈现不同程度的过度收缩,二级纤维束结构无法辨别;B组整体呈现无规律的冰晶空隙,二级纤维束结构难以辨认,胶原纤维排列清晰可见;C组连续完整,二级纤维束及其周围腱内膜、胶原纤维排列均清晰可见。结论扫描电镜的肌腱试样制备,可通过组织固定后经乙醇梯度脱水至70%,行冰冻切片,再将肌腱切片继续梯度脱水至100%,该方法能清晰观察到肌腱二级纤维束及周围腱内膜的形态。
- 张忆苏波杨桢胡若楠宁良菊
- 关键词：肌腱冰冻切片扫描电镜
- 肢体缺血后处理对脑缺血大鼠神经功能恢复和神经细胞增殖的作用被引量：1
- 2017年
- 目的探索非侵入式肢体缺血后处理(NLIP)对脑缺血大鼠的脑保护作用和损伤侧皮质区神经细胞的表达与分布。方法 SD大鼠110只随机分成假手术组(n=10),缺血再灌注损伤组(I/R组,n=50),NLIP组(治疗组,n=50)。I/R组和治疗组动物采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型(假手术组不插入线栓),治疗组于再灌注即刻给予NLIP处理(改良的缺血弹性带股动脉近端加压阻断股动脉10 min,再通10 min,循环3次),术后3d、7d、14d、21d、28d分别称取大鼠体质量,并进行行为学评估后处死大鼠取脑组织,免疫组织化学染色检测各时点缺血脑皮质中的双皮质素(DCX)和胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,Western blot检测缺血脑皮质中微管相关蛋白2(MAP2)的表达。结果假手术组动物术后1~3d表现出轻度的体质量下降和行为学缺损,术后1d出现上肢肌力减弱,之后开始恢复。与假手术组比较,以上神经缺损在I/R组和治疗组动物中更加明显(P<0.05),术后3d到21d逐渐缓解,到术后28d时接近假手术组水平。与I/R组相比,治疗组动物体质量在术后2~7d有明显恢复(P<0.05),动物上肢肌力在14~28d有明显改善(P<0.05),治疗组行为学评分在各时点与I/R组差异无统计学意义。与假手术组比较,I/R组和治疗组脑皮质缺血区周围DCX阳性细胞和GFAP阳性细胞随时间推移逐渐增多,伴随胞体肥大和突起变长加粗,分别在术后21d和28d大量增殖并聚集在脑皮质缺血区周围。I/R组和治疗组在术后3d缺血脑皮质中MAP2表达量下降,但与假手术组差异无统计学意义(P>0.05),之后逐渐上调,术后14d和21d时高于假手术组(P<0.05)。治疗组MAP2表达量在术后7~28d高于假手术组(P<0.05),在术后7d时高于I/R组(P<0.05)。结论 NLIP可减轻脑缺血大鼠神经行为学异常和促进缺血周围区神经细胞的增多。
- 黄丹刘洪红杨桢屈云
- 关键词：脑缺血缺血后处理星形胶质细胞
