- HSF4b表达载体的构建及其稳定株的筛选
- 背景:
先天性白内障是导致儿童失明的主要原因，大约0.3-1.5/1000的儿童患有先天性白内障，它的主要病理改变为晶状体发育迟缓，晶状体内非透明瘢块组织形成，染色体异常为主要致病原因。已经发现多种基因的突变体与临...
- 李雪丽
- 关键词：先天性白内障染色体异常基因突变真核表达
- 文献传递
- 热休克转录因子4b的克隆表达及MAP激酶P38对其磷酸化调控被引量：3
- 2010年
- 目的:构建热休克转录因子4b(Hsf4b)的真核表达载体,探讨MAP激酶P38对其磷酸化调控作用。方法:用人心脏cDNA文库为模板,应用囊括Hsf4b全长的引物进行PCR并在Hsf4b cDNA的N-端加入Flag标签。将PCR产物经KpnI和EcoRI酶切后,与该二酶线性化pcDNA3.0质粒一起连接获得重组质粒pcDNA-Flag-Hsf4b,将克隆好的pcDNA-flag-Hsf4b转染HEK293T细胞,并用抗Flag抗体进行免疫印迹分析,免疫沉淀实验和体内Pulldown实验证明Hsf4b可与MAP激酶P38结合,激酶实验结果显示P38可体外磷酸化Hsf4b。结果:应用基因克隆技术,将人Hsf4b的cDNA克隆到真核表达质粒pcDNA3.0和pEBG中。pcDNA-Flag-Hsf4b可在真核细胞HEK293T中表达一个相对分子质量(Mr)约为60000的蛋白。进一步研究发现,Hsf4b可与MAP激酶P38结合,Hsf4b的C-端转录调控区参与和P38的结合,P38可体外磷酸化Hsf4b。结论:实验首次证明Hsf4b可结合并被P38磷酸化,为进一步探讨Hsf4b在晶状体发育过程中的作用提供新的信号通路。
- 马增翼张军李雪丽席子明胡延忠
- 关键词：晶状体磷酸化
