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凝血酶体外促进肺癌细胞Glc-82周期进程和增殖及其分子机制: 2012年; 目的探讨凝血酶体外促进肺癌细胞Glc-82周期进程和增殖及其作用机制。方法采用CCK8法检测凝血酶(thrombin)对Glc-82细胞增殖活性的影响,确定其量效和时效关系;利用碘化丙锭(propidium iodide,PI)单染和AnnexinⅤ-FITC/PI双染在流式细胞仪上检测细胞周期和凋亡;以荧光实时定量PCR检测10号染色体上与张力蛋白同源缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromatosome 10,PTEN)mRNA水平的变化,免疫印迹法检测PTEN蛋白表达和AKT磷酸化水平的变化。结果凝血酶(0.5和1.0 U/ml)可以有效促进细胞的增殖(P<0.01)。凝血酶(0.5 U/ml)促进Glc-82细胞由G1期向S期转化,可以抑制PTEN的表达,提高AKT磷酸化水平,但对细胞凋亡没有影响。结论凝血酶(0.5 U/ml)可以促进肺癌细胞Glc-82周期进程和细胞增殖,可能系通过PTEN/PI3K/AKT信号分子途径发挥作用。; 许芝山朱凌云王秀冬赵云峰于爱平; 关键词：凝血酶细胞周期 PTEN

HPLC测定河套大黄中土大黄苷的含量被引量：5: 2007年; 王秀冬毕建进黄丽华卢兖伟孙仲怡吴祖泽; 关键词：土大黄苷

携带免疫基因的前列腺癌特异性溶瘤腺病毒制备及功能验证: 2014年; 目的制备前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-PPT-E1A,评价其体外溶瘤和免疫激活功能。方法以LNCaP细胞和Jurkat细胞的cDNA为模板,采用普通PCR和巢式PCR分别扩增获得前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)基因、CD40L-N基因和CD40L-C基因;并采用重叠PCR方法将PSA、Linker、CD40L-N和CD40L-C基因依次连接并扩增获得融合蛋白基因PSA-IZ-CD40L(PL)。采用以Adeasy系统为基础的溶瘤腺病毒构建体系,构建并制备携带PL的溶瘤重组腺病毒Ad-PL-PPT-E1A。以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的溶瘤腺病毒Ad-PL-PPT-E1A感染PC3M细胞后不同时间点,流式细胞术检测细胞凋亡情况;50 MOI的Ad-PL-PPTE1A感染PC3M细胞,于48 h收集其裂解液,并将其作用于正常人外周血单个核细胞,CCK8检测细胞增殖能力。结果 PCR成功扩增并连接获得融合蛋白基因PL,构建并制备了携带PL基因的溶瘤腺病毒Ad-PL-PPT-E1A。RTPCR和Western印迹检测结果显示,Ad-PL-PPT-E1A可在PC3M细胞中高效表达E1A和PL蛋白。将Ad-PL-PPTE1A感染PC3M细胞后,可见明显的细胞病变;同时,流式细胞检测结果显示,当感染滴度达到200 MOI时,48 h的凋亡率达到70.67%±2.98%。CCK8结果显示,Ad-PL-PPT-E1A感染后,可恢复PC3M细胞裂解液对人外周血单个核细胞的抑制作用。结论成功制备和鉴定了前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-PPT-E1A,并在体外证实了其具有溶瘤和免疫的双重功能。; 薛淑雅杨月峰王华肖凤君孙慧燕张群伟王秀冬王立生; 关键词：前列腺癌溶瘤腺病毒免疫基因

肺癌细胞系中肿瘤干细胞的分离鉴定与功能分析被引量：1: 2010年; 背景:肿瘤干细胞在体外扩增和培养过程中如何保持其干细胞的特性成为肿瘤干细胞研究的重要障碍,从可长期稳定保存的细胞系中分离获得肿瘤干细胞可能成为肿瘤干细胞研究的可靠途径。目的:探讨遗传背景相似、转移特性不同的肺癌细胞中肿瘤干细胞的存在与否及其功能。方法:观察PLA-801D和PLA-801C细胞对鼠尾胶原和纤连蛋白的黏附作用,以考察两株细胞的转移潜能;观察PLA-801D和PLA-801C细胞形成单细胞克隆的种类及每种细胞克隆的亚克隆种类和性能,判断两株细胞中是否存在肿瘤干细胞;采用胶原收缩实验考察两株细胞的生物力学重塑能力,即对细胞外基质的重塑能力。结果与结论:PLA-801D细胞对鼠尾胶原和纤连蛋白的黏附作用均明显强于PLA-801C细胞(P<0.01)。PLA-801D可产生4种单细胞克隆,其中1种在传单细胞亚克隆后仍可形成如上4种克隆,而PLA-801C细胞中未发现有完全分化能力的细胞克隆。PLA-801D细胞的生物力学重塑能力也明显高于PLA-801C细胞(P<0.05)。结果证实具有高转移潜能的PLA-801D细胞中含有一小群具有自我更新和分化能力的肿瘤干细胞,且该细胞株的生物力学重塑性较好,提示该细胞株对细胞外基质的重塑性能较强。; 吴婕刘晶王秀冬朱凌云吴祖泽于爱平; 关键词：肿瘤干细胞肿瘤细胞系

蛋白酶活化受体1在凝血酶介导的肺癌细胞功能中的作用: 2012年; 目的:探讨蛋白酶活化受体1(PAR1)在凝血酶促进肺癌细胞迁移、黏附、克隆形成及胶原收缩中的作用。方法:将本实验室已构建的重组干扰载体pSilence-shPAR1和过表达载体pIRES-EGFP-PAR1分别转入人肺癌细胞PLA-801D和PLA-801C中,采用反转录PCR和实时荧光定量PCR方法检测细胞中PAR1的表达量,Transwell实验检测细胞的迁移能力,细胞黏附实验检测细胞对细胞外基质的黏附能力,克隆形成实验检测细胞的增殖能力,胶原收缩实验评价细胞对细胞外基质的重塑能力。结果:PAR1高表达(PLA-801C-pIRES-EGFP-PAR1)可明显增强PLA-801C细胞的迁移、黏附和胶原收缩能力(P<0.05,P<0.001),而PAR1被有效干扰后(PLA-801D-pSi lence-shPAR1),PLA-801D细胞的迁移、黏附和胶原收缩能力显著减弱(P<0.05,P<0.001),而且PAR1的表达量直接与PLA-801D和PLA-801C细胞的克隆形成能力呈正相关。结论:PAR1在凝血酶促进肺癌细胞的黏附、迁移增殖和细胞外基质重塑等功能中发挥着重要作用,为以PAR1为靶的抗肿瘤治疗提供了理论基础。; 何子阳朱凌云毛德奎王秀冬于爱平吴祖泽; 关键词：凝血酶肺癌克隆形成

重组低出血抗凝蛋白在毕赤酵母中的中试发酵工艺研究及其纯化与鉴定被引量：5: 2013年; 目的：通过对毕赤酵母中试发酵工艺的改进，建立一种简便可行的重组低出血抗凝蛋白（EH）的中试发酵工艺，为EH蛋白的放大生产研究奠定基础。方法：首先通过摇瓶培养绘测毕赤酵母工程菌的生长曲线，然后根据生长曲线，将对数生长期的菌种经过两级摇瓶培养放大后，直接接种到500L的发酵罐中放大培养，通过发酵液的D_600nm值、溶氧值（D02）及菌体湿重动态监测细菌的生长状态，并用流加甲醇的方法诱导表达目的蛋白；表达上清经超滤、两步离子交换层析纯化获得目的蛋白；用非还原型SDS-PAGE和HPLC检测目的蛋白的纯度；用SDS-PAGE和质谱方法分析目的蛋白的相对分子质量；用Western印迹验证目的蛋白；用凝块法检测目的蛋白的抗凝活性。结果：发酵结束时，上清中蛋白含量达1．41g／L，经后期分离纯化，得到约21gEH蛋白，SDS-PAGE分析可见EH蛋白在还原状态下表观相对分子质量约为13．2×10^3±0．2×10^3，质谱分析相对分子质量约为7.3×10^3±0．73×10^3；Western印迹表明检测条带为目的蛋白，能被抗水蛭素抗体特异性结合；非还原型SDS-PAGE和HPLC测得EH蛋白的纯度均高于95％；凝块法检测EH蛋白的抗凝比活性为512～1024ATU／mg。结论：建立了一条简便可行的EH蛋白的中试放大发酵生产工艺。; 郝木强李彦英刘春杰王秀冬刘晶晶李艳琪刘洋刘洋吴祖泽; 关键词：水蛭素重组蛋白毕赤酵母中试放大

凝血酶促进肺癌Glc-82移植瘤的发展及其机制探讨被引量：1: 2010年; 目的探讨凝血酶在体内促进肺癌Glc-82移植瘤的发展及其作用机制。方法细胞黏附试验和细胞迁移试验观察凝血酶对Glc-82细胞黏附特性和转移特性的影响,裸鼠移植瘤实验观察凝血酶对Glc-82移植瘤荷瘤小鼠体质量、瘤质量、肺结节及生存期的影响,Western印迹法观察凝血酶对移植瘤组织细胞外信号调节激酶(ERK)、黏着斑激酶(FAK)和抑癌蛋白PTEN(10号染色体上检出的磷酸酶和张力蛋白同源蛋白)的影响。结果凝血酶在体外显著促进Glc-82细胞的黏附和迁移;在体内,凝血酶可降低荷瘤小鼠的体质量、增加瘤质量占体质量比、部分凝血酶组小鼠肺转移增多、荷瘤小鼠的生存时间缩短;Western印迹结果显示,凝血酶可促进肿瘤组织ERK的激活,促进FAK的表达,并且抑制抑癌基因PTEN的表达。结论凝血酶促进肺癌Glc-82移植瘤的恶性进展,可能与促进肿瘤细胞的黏附和迁移特性,促进肿瘤组织ERK、FAK的激活及表达有关,并可能通过抑制抑癌蛋白PTEN的表达而发挥作用。; 吴婕刘晶朱凌云王秀冬张光满吴祖泽于爱平; 关键词：凝血酶黏着斑激酶

盐酸二甲双胍口服固体制剂及其制备方法: 本发明涉及一种新型的盐酸二甲双胍口服固体制剂及其制备方法，所述口服固体制剂以盐酸二甲双胍为活性成分，并含有合适的崩解剂、填充剂、溶胀性辅料、助流剂及任选的其它药用辅料或载体。该制剂崩解迅速，分散均匀，可方便病人服药、胃肠...; 王秀冬吴祖泽孙仲诒; 文献传递

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王秀冬

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