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邓欢欢
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
供职机构:
安徽医科大学生命科学学院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
生物学
医药卫生
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合作作者
刘泽宇
安徽医科大学生命科学学院
邢雪梅
安徽医科大学生命科学学院
姚亮
安徽医科大学生命科学学院
潘林鑫
安徽医科大学生命科学学院
耿慧武
安徽医科大学生命科学学院
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机构
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安徽医科大学
作者
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刘晓颖
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姚亮
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邢雪梅
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刘泽宇
传媒
1篇
安徽医科大学...
年份
1篇
2016
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人EBI3蛋白及其突变体的表达及定位研究
被引量:1
2016年
目的 研究人EB病毒诱导的基因3(EBI3)及其突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位差异及其原因。方法 基于NCBI数据库中人EBI3氨基酸的序列分析,利用分子克隆技术构建人EBI3真核表达质粒pcDNA3.1-EBI3-FLAG、单独包含氨基端或羧基端Ⅲ型纤连蛋白(FN3)结构域的缺失突变体的表达质粒pcDNA3.1-EBI3(1~135)-FLAG和pcDNA3.1-EBI3(125~230)-FLAG以及第210位天冬氨酸(Asp)点突变体Asp210的表达质粒pcDNA3.1-EBI3-D210A-FLAG;Westernblot方法检测EBI3及其突变体在HEK293T细胞中的表达;免疫荧光实验观察人EBI3及各突变体在COS7细胞中的定位。结果 成功构建了下游携带FLAG标签的人EBI3及其突变体的真核表达质粒;Westernblot结果显示重组蛋白均能在HEK293T细胞中稳定表达;经激光共聚焦显微镜观察,EBI3及其缺失突变体在COS7细胞的表达位置发生明显变化。结论 人EBI3及其突变体真核表达质粒均能在HEK293T、COS7细胞中成功表达;人EBI3缺失突变体在COS7细胞中的定位发生明显变化,氨基端结构域可能在EBI3蛋白的正确定位中发挥重要作用;EBI3蛋白的第210位Asp的突变影响了其在细胞内的定位。
邢雪梅
耿慧武
潘林鑫
刘泽宇
姚亮
邓欢欢
刘晓颖
范礼斌
关键词:
质粒构建
WESTERNBLOT
免疫荧光
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