石琴
- 作品数：10 被引量：34H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：甘肃省农业生物技术专项国家科技成果重点推广计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素研究进展
- 2006年
- 从分子质量、基因结构及致病机理等方面概述了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素ApxⅠ,ApxⅡ,ApxⅢ和ApxⅣ的基本特点和研究进展。比较并归纳了这4种溶血外毒素的异同点及在15种血清型中存在的特点。
- 石琴贺英赵萍储岳峰高鹏程逯忠新
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌
- 猪胸膜肺炎放线杆菌结构蛋白基因ApxIVA特异性片段的表达和纯化
- 2007年
- 以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转入到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导重组蛋白的表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为18 ku,与预期片段大小相符;将经过超声破碎的菌液离心取沉淀经尿素洗涤溶解后用镍金属螯合层析柱进行纯化。Western-blot分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性。
- 石琴逯忠新贺英赵萍储岳峰高鹏程
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌蛋白纯化
- 培养条件对胸膜肺炎放线杆菌生长的影响被引量：2
- 2008年
- 通过对胸膜肺炎放线杆菌在液体培养基中不同培养条件下(静止培养、摇床培养和发酵培养)的比较试验得出静止培养细菌最高浓度为1×109个/ml,所需时间为18 h;摇床培养细菌最高浓度为3.7×109个/ml,所需时间为13 h;发酵罐通氧气(20%)培养细菌最高浓度为4.5×109个/ml,所需时间为4 h;发酵罐不通氧气培养细菌最高浓度为2.0×109个/ml,所需时间为4 h。由此得出胸膜肺炎放线杆菌在液体培养基中随着培养条件的不同其菌液浓度以及完成对数期的时间也不同,发酵(通氧气)培养菌液浓度高于其它培养方式且所需时间最短,这一结果为胸膜肺炎放线杆菌抗原的大批量生产奠定了很好的基础。
- 赵萍逯忠新储岳峰高鹏程贺英石琴
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR鉴定及人工感染血清的制备
- 本试验主要是以过夜培养的猪传染性胸膜肺炎血清8型标准菌菌液作为感染原,经滴鼻感染30 日龄断奶仔猪,于第1天及第8天感染两次,感染后定期采集血清进行抗体检测,并采集发病猪病料进行细菌分离培养,用PCR方法进行检测,确定为...
- 石琴逯忠新贺英赵萍储岳峰高鹏程
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌PCR血清制备
- 文献传递
- 胸膜肺炎放线杆菌APX ⅢA基因的克隆及原核表达
- 2007年
- 胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus Pleuropneumon．iae，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia）的病原菌。该菌为革兰阴性菌，根据其生长是否需要V因子（NAD，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）可将其分为2个生物型，即生物Ⅰ型和生物Ⅱ型。生物Ⅰ型具有致病性。根据可溶性荚膜多糖（CPS）和脂多糖（LPS）的特性，可将生物Ⅰ型分为12个血清型。
- 贺英逯忠新石琴赵萍储岳峰高鹏程
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌原核表达APX猪传染性胸膜肺炎革兰阴性菌生物型
- 丝状支原体山羊亚种抗体间接血凝检测方法的建立及应用被引量：12
- 2007年
- 将丝状支原体山羊亚种PG3株经超声波破碎处理后的产物致敏经戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测丝状支原体山羊亚种抗体的间接血凝试验方法。抗原致敏红细胞的最佳浓度是100～125μg/mL,超免血清抗体效价达1:512～1:1024。免疫山羊2周后血清抗体检出率为83.3%,对羊布氏杆菌、绵羊肺炎支原体阳性血清检测均为阴性,敏感性明显高于琼脂扩散试验。对628份田间血清进行检测,阳性率为44.9%。结果表明,该法敏感性较高、特异性强和重复性好,可用于山羊传染性胸膜肺炎免疫抗体水平的监测和流行病学调查。
- 储岳峰逯忠新赵萍高鹏程贺英石琴
- 关键词：丝状支原体山羊亚种间接血凝试验抗体检测
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素、外膜脂蛋白的表达及重组蛋白的纯化
- 2007年
- 将构建保存的重组表达质粒pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA和pPRoAppOML-1用IPTG诱导表达,选择最佳的表达条件为IPTG 1.0 mmol/L,温度为37℃,表达时间为8 h,表达产物用SDS-PAGE鉴定,分别表达41、414、5 ku的蛋白,与预期蛋白大小一致。将表达产物用试剂盒进行纯化,得到较好的目的条带,并对其进行Western blot检测,经过分析,pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA表达产物具有较好的免疫反应性。
- 贺英逯忠新石琴赵萍储岳峰高鹏程
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌纯化免疫反应性
- 丝状霉形体山羊亚种血清抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：7
- 2007年
- 利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比(P/N)≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。
- 赵萍逯忠新储岳峰高鹏程贺英石琴
- 关键词：间接ELISA血清抗体
- 胸膜肺炎放线杆菌毒力因子重组蛋白免疫原性研究
- 2008年
- 【目的】研究猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)重组亚单位疫苗的免疫保护效果。【方法】用1.0mmol/LIPTG诱导重组表达质粒pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA和pPRoAppOML-1,SDS-PAGE鉴定。纯化的表达产物通过Western blot分析有较好的免疫原性。将rApxⅠ、rApxⅢ和rOmp组合作为疫苗Ⅰ组,rApxⅠ、rApxⅢ、rOmp和灭活菌苗组合作为疫苗Ⅱ组,APP 1、3、7型菌制备的灭活疫苗作为疫苗Ⅲ组,PBSⅣ作为空白对照组,进行家兔的免疫试验。免疫共分2次,每次间隔2周。【结果】疫苗Ⅱ组的抗体水平均显著高于疫苗Ⅲ组,疫苗Ⅰ组抗体水平不如疫苗Ⅲ组,其血清效价最高滴度为1∶256。【结论】猪传染性胸膜肺炎毒力因子重组蛋白具有一定的免疫原性,为进一步研究新型亚单位疫苗奠定了基础。
- 贺英赵萍储岳峰高鹏程石琴逯忠新
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌免疫原性基因工程苗免疫试验
- 绵羊肺炎支原体间接血凝诊断方法的建立被引量：17
- 2008年
- 用绵羊肺炎支原体抗原致敏经戊二醛处理的绵羊红细胞,制备成间接血凝试验抗原,通过IHA来检测绵羊支原体性肺炎血清抗体.致敏绵羊红细胞的最佳抗原浓度为100μg/mL,血清效价≥1∶8即为阳性,效价≤1∶4者判为阴性.该方法具有很好的敏感性、特异性和可重复性,而且操作简单,适合大范围推广应用.
- 赵萍逯忠新储岳峰高鹏程贺英石琴
- 关键词：绵羊肺炎支原体间接血凝试验
