杨江丽
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 假坚强芽孢杆菌丙氨酸脱氢酶的原核表达纯化与结晶
- 2015年
- 丙氨酸脱氢酶(alanine dehydrogenase,Ald)是一种NAD+依赖性的氨基酸脱氢酶,能可逆地催化丙氨酸氧化脱氨生成丙酮酸和氨.实验以假坚强芽孢杆菌的丙氨酸脱氢酶为研究对象,将目的基因克隆到p ET-22,b(+)原核表达载体上,并在大肠杆菌中完成蛋白的高效表达.通过镍离子亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化方法,得到了高纯度的目的蛋白.利用气相扩散法对目的蛋白进行结晶,最终得到分辨率为0.31,nm的蛋白晶体.
- 唐昭娜张翠英胡平雄易秋分杨江丽董辉
- 关键词：丙氨酸脱氢酶纯化
- 假坚强芽孢杆菌四氢嘧啶羟化酶的晶体制备及X-射线衍射研究（英文）被引量：1
- 2015年
- 【目的】假坚强芽孢杆菌四氢嘧啶羟化酶蛋白纯化、晶体制备及X-射线衍射研究。【方法】通过PCR从假坚强芽孢杆菌OF4中克隆获得四氢嘧啶羟化酶基因,构建原核表达载体,经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和分子排阻色谱法纯化蛋白,289 K下采用座滴法进行晶体筛选和制备,在低温100 K下通过X-射线衍射仪(Rigaku Micro Max-007 HF)收集晶体衍射数据。【结果】通过原核表达及纯化成功获得了适合晶体生长的蛋白Bp EctD。通过筛选最终在蛋白浓度为6.5 mg/mL及含有0.2 mol/L Mg Cl2·6H2O,0.1 mol/L Bis-Tris p H6.5,25%(W/V)聚乙二醇3,350的缓冲液中获得了理想的蛋白晶体,其大小约为360μm×240μm×60μm,并在100K下成功收集了衍射数据,晶体衍射分辨率为2.40,空间群为三斜晶系P1,晶胞参数为a=45.18,b=58.87,c=68.81,α=77.48°,β=86.03°,γ=66.97°,每个不对称单位中含有2个Bp EctD单体,马修斯系数为2.443/Da,溶剂含量约为49.53%。【结论】衍射数据的成功收集为假坚强芽孢杆菌OF4四氢嘧啶羟化酶三维结构的解析奠定了前期基础,将有助于阐明四氢嘧啶羟化酶的催化机制。
- 杨江丽王青青徐书景关婉怡赵宝华董辉鞠建松
- 关键词：X-射线衍射
