李冠华
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：河北北方学院生命科学研究中心更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 新城疫病毒HBNU/LSRC/F3株HN基因的克隆及生物信息学分析被引量：7
- 2016年
- 目的克隆新城疫病毒HBNU/LSRC/F3株的血凝素神经氨酸酶蛋白(HN)基因,同时应用生物信息学工具分析其编码蛋白的主要特性。方法根据HN基因开放阅读框设计引物,提取新城疫病毒总RNA,通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增HN基因,并将其连接到克隆载体上,利用蛋白分析专家系统(ExPASy)提供的ProtParam、Protscale、TMpred、Coil、MotifyScan、SWISS-MODEL等,NCBI上的CONSERVE DOMON、SMART、SignalP4.0、Bepipred 1.0、NetCTL等以及Bcepred、ABCpred、SOPMA、SYFPEITHI等生物信息学在线分析程序,结合PSORT II Prediction、rasmol等生物信息学软件,分析、预测其编码HN蛋白的主要特性及T/B细胞抗原表位等。结果 HN基因RT-PCR扩增产物与预期大小一致,并成功连接到克隆载体上,测序结果显示HN基因序列与GenBank上已发表的序列完全一致。其编码蛋白由571个氨基酸组成,分子式为C2766H4316N752O852S24,分子质量单位为62.5ku,等电点理论值为6.24。HN蛋白为跨膜蛋白,富含无规则卷曲(Cc)和α-螺旋(Hh),其主要定位在线粒体和胞质中。该蛋白共有12个亲水性较高区域(参数得分≥1.9),17个表面可及性较高区域(参数得分≥1.9),9个柔韧性较高区域(参数得分≥2.0),36个翻译后修饰位点,17个潜在的B细胞表位,12个CTL表位和辅助性T细胞的联合表位。结论成功克隆了HN基因并分析了其编码蛋白的主要特性,为后期HN蛋白的分子克隆及其抗肿瘤特性研究奠定了基础。
- 李冠华马媛媛王静武彩霞刘进军刘开扬
- 关键词：HN蛋白生物信息学
- 新城疫病毒HBNU/LSRC/F3株HN基因真核表达及其编码蛋白的抗肿瘤功能研究被引量：2
- 2016年
- 目的在人食管癌ECA109细胞中表达新城疫病毒HBNU/LSRC/F3株HN基因,观察其编码蛋白的抗肿瘤特性。方法提取新城疫病毒总RNA,以根据HN基因开放阅读框(登录号为KC246549.1)和真核表达载体C-flag pcDNA3的多克隆位点设计的带酶切位点引物通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增HN基因,然后连接到真核表达载体上,测序正确的重组质粒转染ECA109细胞,运用免疫荧光及RT-PCR检验HN基因的表达,通过流式细胞术检测其表达产物的抗肿瘤效果。结果 HN基因正确连接到真核表达载体C-flag pcDNA3上,测序显示HN基因序列与GenBank上已发表的HBNU/LSRC/F3株的HN序列一致。重组质粒转染ECA109细胞36h后,其胞质内可见黄绿色荧光,转染48h后扩增到HN基因,而空质粒转染细胞扩增阴性。经流式细胞术检测,重组质粒转化肿瘤细胞凋亡率为(8.2±1.56)%,空质粒对照组为(4.6±0.83)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HN基因重组质粒转化ECA109细胞表达HN蛋白,该蛋白具有一定的抗肿瘤活性。
- 李冠华王静武彩霞刘华刘进军刘开扬
- 关键词：HN蛋白真核表达抗肿瘤
- 新城疫病毒F3-HN的生物信息学分析、抗瘤功能初探及Caspase抑制剂对F3诱导ECA109细胞凋亡的影响
- 随着医疗水平的不断提高,癌症的治疗受到越来越多的关注,溶瘤病毒为肿瘤的治疗及治愈提供了一个新的视角。新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）是溶瘤病毒中的一员。研究发现,NDV在人类肿瘤细胞中...
- 李冠华
- 关键词：新城疫病毒凋亡通路
