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兔尿道上皮细胞的体外连续培养: 2008年; 背景：尿道损伤后的瘢痕挛缩或缺损可导致狭窄，寻找理想的修复替代材料已成为研究热点。目的：探索尿道黏膜上皮细胞体外培养的技术和方法，为进一步采用组织工程技术构建尿道黏膜组织奠定基础。设计、时间及地点：单一样本观察，于2005—04／2007—02在解放军总医院泌尿外科完成。材料：健康成年雄性新西兰雄兔6只，体质量3．0～3．5kg：实验用DispaseⅡ为美国Gibco公司产品。方法：取雄性新西兰兔尿道黏膜组织，分离上皮采用DispaseⅡ工作液，上皮细胞间的分离采用混合消化酶（1．25g／L胰蛋白酶与0．2g／L乙二胺四乙酸等体积混合）消化，以差速贴壁法排除成纤维细胞。使用DMEM与F123：1混合培养液加体积分数为0．1的胎牛血清，对上皮细胞进行原代单纯培养和传代培养；取第2-6代细胞进行上皮细胞的免疫组织化学染色，以正常尿道黏膜组织石蜡切片为阳性对照组，以成纤维细胞铺片为阴性对照组。主要观察指标：①利用倒置相差显微镜动态观察细胞形态、生长、增殖情况。②采用活细胞荧光染色法观察细胞存活状态。③以扫描电镜观察细胞超微结构。④采用免疫组织化学染色行细胞鉴定。结果：①原代培养3-5d细胞逐渐生长融合成片，如铺路石状，细胞大小均一。生长期内均为单一的上皮细胞，无成纤维细胞混杂生长，细胞可传9～10代。②第4～6代细胞在免疫荧光染色和超微结构观察中显示良好形态。③免疫组织化学证实角蛋白染色阳性。结论：应用组织工程技术，成功培养尿道上皮种子细胞。结果表明，细胞生长状态良好，增殖较快。经特异性免疫组织化学及形态学鉴定为纯化的尿道上皮细胞。; 王春杨符伟军张秉宏洪宝发高江平王晓雄; 关键词：尿道上皮细胞培养

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张秉宏

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