孙婵
- 作品数：6 被引量：11H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
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- 沉默SOCS3对TNF-α诱导3T3-L1前体脂肪细胞凋亡的抑制作用
- 2011年
- 【目的】运用si RNA沉默小鼠前体脂肪细胞3T3-L1的细胞信号负调控因子3基因(SOCS3),探讨SOCS3在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导3T3-L1细胞凋亡中的作用。【方法】体外培养3T3-L1细胞,用0,20,40,60,80,100,150,200 ng/mL TNF-α处理细胞24 h后,观察细胞凋亡情况。利用脂质体LipofectamineTM2000,用化学合成的SOCS3小干扰RNA(si RNA)转染3T3-L1细胞,用100 ng/mL TNF-α刺激24 h,荧光显微镜下观察细胞凋亡的变化,RT-PCR检测SOCS3、c-myc和survivinmRNA的表达情况。【结果】SOCS3 si RNA抑制了3T3-L1细胞中SOCS3 mRNA的表达(P<0.05)。与空白对照组相比,SOCS3 si RNA组的SOCS3 mRNA表达量极显著减少,c-myc和survivinmRNA的表达水平极显著或显著升高,而脂质体组和阴性对照组无显著差异。【结论】体外试验结果证明,靶向抑制SOCS3基因表达可以有效抑制TNF-α诱导的3T3-L1细胞凋亡。
- 解芸菲孙超孙婵王勇吕彬安磊
- 关键词：RNA干扰TNF-Α
- SOCS2真核表达载体的构建及在3T3-L1前体脂肪细胞中的表达
- 2011年
- 细胞因子信号抑制蛋白(SOCS)是细胞因子信号通路的重要负调控因子。构建SOCS2真核表达载体并转染3T3-L1前体脂肪细胞,为研究SOCS2对不同细胞因子调控脂代谢奠定基础。取小鼠皮下脂肪提总RNA进行RT-PCR,克隆获得pMDl8-SOCS2质粒载体,双酶切目的基因,并克隆至质粒载体pcDNA3.1,成功构建了重组质粒载体pcDNA3.1-SOCS2;重组质粒瞬时转染3T3-L1前体脂肪细胞系,以未转染和空载体转染作为对照,RT-PCR和Western blotting检测重组质粒转染组SOCS2核酸和蛋白表达,表达水平均显著高于对照组,为进一步研究SOCS2基因对不同细胞因子调控脂肪代谢提供基础。
- 孙婵孙超解芸菲安磊王勇吕彬
- 关键词：真核表达载体PCDNA3.1细胞因子
- 原花青素对肥胖小鼠脂肪沉积的抑制被引量：4
- 2011年
- 探讨葡萄籽提取物原花青素对肥胖小鼠脂肪沉积的影响。用高脂日粮饲喂小鼠建立肥胖模型,然后分别用低剂量[50 mg/(kg.d)]、中剂量[100 mg/(kg.d)]和高剂量[200 mg/(kg.d)]的葡萄籽提取物原花青素灌胃处理15 d,记录体质量变化,检测血清中TG、T-CHO、LDL-C和HDL-C浓度,检测葡萄糖耐受性和胰岛素耐受性,同时利用Real-time PCR分析PPARγ、C/EBPα、HSL和FASmRNA的表达水平。结果表明,葡萄籽提取物原花青素可降低肥胖小鼠体质量,并呈现一定的剂量依赖性。各处理组血清中总T-CHO、TG和LDL-C浓度均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低,而HDL-C浓度显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高。同时,各处理组注射葡萄糖有改善肥胖小鼠高血糖的趋势。注射胰岛素后,原花青素可改善肥胖小鼠对胰岛素的抵抗状况。各处理组附睾脂肪组织中C/EBPα、FAS和PPARγ基因mRNA的表达水平均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于对照组,而HSLmRNA表达水平则呈现显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高。由此可知,葡萄籽提取物原花青素可抑制肥胖小鼠脂肪沉积,降低血脂,同时通过影响脂代谢相关基因的表达和葡萄糖、胰岛素耐受性共同调节小鼠脂肪代谢。
- 王勇孙超吕彬解芸菲孙婵安磊
- 关键词：小鼠原花青素肥胖脂肪沉积
- 小鼠SOCS3基因真核表达载体的构建及其对3T3-L1细胞凋亡的影响
- 2011年
- 【目的】探讨SOCS3对3T3-L1细胞凋亡的影响。【方法】以小鼠脂肪组织提取的RNA为模板,用RT-PCR扩增SOCS3基因,将其克隆至pMD18-T Simple,构建pMD18-T-SOCS3重组质粒,经测序验证后,以pMD18-T-SOCS3为模板扩增SOCS3基因,将其克隆至pEGFP-N1,构建真核重组质粒pEGFP-N1-SOCS3,测序正确后,将重组质粒pEGFP-N1-SOCS3转染3T3-L1细胞,荧光下观察GFP的表达,RT-PCR和Western blotting检测细胞内SOCS3mRNA和蛋白的表达,观察细胞凋亡的变化。【结果】测序表明,pMD18-T-SOCS3和pEGFP-N1-SOCS3的核苷酸序列正确率为100%;在荧光显微镜下发现,脂质体组和SOCS3组均有GFP的表达;RT-PCR和Westernblotting检测表明,3T3-L1细胞中SOCS3mRNA表达显著提高(P<0.05);Hoechst 33258染色发现,SOCS3组的细胞凋亡显著;Bax和c-myc基因的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),bcl-2和mcl-1基因表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】SOCS3对脂肪细胞凋亡的发生有促进作用。
- 安磊孙婵解芸菲王勇吕彬孙超
- 关键词：细胞凋亡SOCS3PEGFP-N1
- 钙信号通过IP3通路对肥胖小鼠脂肪合成代谢的影响被引量：4
- 2011年
- 【目的】探讨IP3信号通路是否会影响肥胖小鼠细胞内的钙离子浓度以及钙信号对肥胖小鼠脂肪代谢的作用机制,进一步了解胞内钙离子浓度变化对脂肪代谢的作用机理。【方法】用高脂日粮饲喂小鼠30d以建立肥胖模型,将肥胖小鼠分为对照组、去甲肾上腺素(NE)组、肝素组、钙组、钙+NE组和钙+肝素组,除对照组和钙组外的各药物组小鼠分别给予相应的药物处理,腹腔注射质量浓度0.1mg/mL的NE或1.5mg/mL的肝素0.2mL/(只.d);对照组和钙组同法给予等体积的生理盐水。对照组、NE组和肝素组小鼠饲喂普通日粮,钙组、钙+NE组和钙+肝素组小鼠饲喂加钙饲粮(钙含量12g/kg),小鼠共饲喂16d,期间每3d测1次体质量,17d时禁食12h,摘眼球取血后脱颈椎处死,分离血清检测其中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白(HDL-C)的浓度,并取脂肪组织,测定附睾脂肪和肾周脂肪组织质量,分析附睾脂肪、肾周脂肪和肝脏的钙含量。通过RT-PCR法分析与脂肪生成密切相关的转录因子PPARγ、C/EBPα和脂解基因HSL及生脂基因FAS mRNA的表达水平,检测IP3受体IP3R1的mRNA表达水平。【结果】肝素和膳食钙处理对肥胖小鼠有极显著的减肥效果(P<0.01),可极显著减少体脂质量(P<0.01),降低血清中TG和TC浓度(P<0.01),而HDL-C浓度极显著升高(P<0.01),肝素和膳食钙处理肥胖小鼠的PPARγ、FAS和IP3R1的mRNA水平均极显著降低(P<0.01),HSL mRNA水平极显著升高(P<0.01),C/EBPα的mRNA水平无明显变化;NE处理对肥胖小鼠的作用效果与肝素相反,其可明显削弱减肥作用(P<0.01)。膳食钙有显著的减肥效果(P<0.01),但钙+NE组的减肥效果弱于钙组(P<0.01),钙+肝素组的减肥效果强于膳食钙的处理效果(P<0.01)。【结论】IP3通路激活可引起胞内钙离子浓度升高,脂肪蓄积增加;反之,脂肪蓄积减少。通过IP3通路,膳食钙可抑制胞内钙离子增加。
- 吕彬王勇解芸菲孙婵安磊孙超
- 关键词：IP3膳食钙胞内钙脂肪沉积
- 大肠埃希菌LPS感染对乌鸡脂肪代谢及相关调控基因表达的影响被引量：3
- 2011年
- 【目的】研究大肠埃希菌脂多糖(LPS)感染对乌鸡脂肪代谢及相关调控基因转录表达的影响。【方法】将120只35日龄乌鸡随机分为对照组和3个试验组(低剂量LPS组、中剂量LPS组、高剂量LPS组),试验组乌鸡每48 h注射1次不同浓度的大肠埃希菌LPS生理盐水溶液,剂量为1 mL/(只.次),低、中、高剂量LPS组乌鸡的LPS用量分别为0.25,0.5,1 mg/(kg.次),对照组注射等量生理盐水,持续2周。每次注射后12 h,用温度计测量鸡只泄殖腔温度;35,42,49日龄时称鸡体质量;49日龄时,各组随机选取10只鸡翅下静脉采血,分离血清,试剂盒检测血脂指标和脂解酶的活性,然后屠宰,取胸部肌肉、腿部肌肉和腹部脂肪计算脂肪沉积率,定量PCR检测脂肪和肌肉中脂肪代谢调控基因和脂肪酸转运调控基因的转录表达情况。【结果】试验期内LPS处理组乌鸡的泄殖腔温度极显著高于对照组;与对照组相比,LPS处理组乌鸡生产性能极显著下降;脂肪沉积量减少,肌间脂肪、皮下脂肪和腹部脂肪的含量明显降低;血清中总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度极显著下降,而甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)浓度极显著升高;LPS处理组乌鸡血清中的脂蛋白脂酶、肝脂酶和脂肪酶的活性均极显著高于对照组。定量PCR检测表明,LPS处理组乌鸡肌肉和脂肪中的脂肪合成基因FAS、ACC以及控制脂肪酸氧化的CPT-ⅠmRNA水平都显著下降,且FAS/CPT-ⅠmRNA表达水平的比率明显降低;而调控脂肪分解的LPL和控制能量稳态的PPARα的mRNA水平在低剂量LPS组明显升高,但在高剂量LPS组又显著降低;LPS处理组乌鸡的脂肪酸转运调控基因FATP1、FATP4随着LPS剂量的增大而显著降低,FABP和FAT/CD36mRNA在低剂量LPS组显著升高,但随着LPS剂量升高,其表达又降低。【结论】低剂量LPS处理减弱了乌鸡体内的脂肪生成和脂肪酸的氧化,强化了脂�
- 齐仁立解芸菲孙婵王勇孙超
- 关键词：脂多糖脂肪代谢乌鸡
