李研
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
- 供职机构：西安交通大学医学院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学理学轻工技术与工程更多>>
- 抗人IgG和抗人IgM单克隆抗体的特性鉴定及应用被引量：3
- 2018年
- 目的:制备特异性高的抗人Ig G和抗人Ig M单克隆抗体,并应用于临床血清学检测试剂盒,为其提供优质的二抗。方法:以人Ig G和Ig M为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗人Ig G和抗人Ig M单克隆抗体;经体内诱生法制备腹水并纯化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western印迹进行交叉筛选和特异性鉴定,并对筛选出的单抗进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,再与市售的检测病原微生物抗体试剂盒中对应的HRP标记的二抗(抗人Ig G和抗人Ig M)做对比分析。结果:筛选到2株可稳定分泌抗人Ig G单抗和2株抗人Ig M单抗,经交叉反应、Western印迹及对比实验分析,证明这4株单抗效价高、特异性好,比临床试剂盒中的酶标二抗特异性强、敏感度高。结论:获得4株特异性强、敏感度高的抗人Ig G和抗人Ig M单克隆抗体,可为各种病原微生物血清学的检测提供二抗试剂,具有良好的应用价值。
- 封青郭春艳郭春艳王珍梁导艳李研
- 关键词：人IGG单克隆抗体
- 甲型流感病毒H1N1单克隆抗体特性鉴定和应用
- 2021年
- 目的:制备抗甲型流感病毒单克隆抗体(mAbs)并分析抗体反应特性,评价mAbs在免疫荧光(IFA)和细胞免疫化学染色中的应用,初步建立H1N1流感病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA方法。方法:取A/PR/8/34(H1N1)毒种接种于鸡胚尿囊腔,培养72 h后收获尿囊液,甲醛灭活,蔗糖密度梯度超离心法纯化,用于mAbs免疫原开发。病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,ELISA和IFA筛选稳定分泌抗甲型流感病毒mAbs的杂交瘤细胞株。ELISA、IFA、血凝抑制试验(HI)和中和试验(MN)分析抗体反应特性。依据mAbs特性建立细胞IFA试验、HI试验和双抗体夹心ELISA方法。结果:共制备13株mAbs,其中6株(PR8-10、PR8-19、PR8-20、PR8-26、PR8-28、PR8-30)具有较高血凝抑制活性,血凝抑制滴度≤3μg/ml。PR8-13和PR8-15无中和活性,其他11株均具有中和活性。部分mAbs可用于IFA试验和细胞免疫化学染色。依据PR8-24和PR8-25抗体反应特性初步建立H1N1流感病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA法。结论:制备出可用于IFA试验和细胞免疫化学染色的A/PR/8/34(H1N1)mAbs,初步建立了快速H1N1检测的ELISA方法,为H1N1流感病毒或病毒血凝素蛋白快速定量方法建立提供依据。
- 刘杨赵向绒郭春艳李研胡军
- 关键词：甲型流感病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 运用单克隆抗体分析流感病毒H1亚型HA蛋白的抗原表位被引量：6
- 2012年
- 目的对甲型流感病毒H1亚型血凝素蛋白的抗原表位进行分析。方法以前期获得的97株抗H1亚型HA抗原的单克隆抗体为研究工具,用间接ELISA方法对不同亚型的血凝素抗原进行反应,将H1亚型HA蛋白的抗原表位进行粗分类,用ELISA阻断试验对抗原表位进行细分类。选取两类抗原表位的抗体,通过计算机模拟分析抗体与抗原结合的结构域,推测抗体结合的具体氨基酸位点。结果根据抗体的交叉反应性不同,将流感病毒H1亚型的HA的抗原表位分为8类;根据ELISA阻断试验的初步结果,H1亚型HA抗原的抗原表位又被细分为15类,通过计算机模拟分析预测的抗体与流感病毒HA抗原结合的氨基酸位点结果与ELISA阻断试验结果相吻合。结论证明流感病毒H1N1亚型HA抗原上至少含有15个抗原表位,且通过ELISA阻断试验和计算机模拟分析得到了相互印证,为流感病毒血凝素HA抗原表位预测方法的完善及通用疫苗的研制提供了实验数据。
- 李慧瑾郭春艳赵彭花赵彭花李研李研李元高锦伟
- 关键词：流感病毒抗原表位
- 三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定被引量：3
- 2020年
- 目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。
- 封青李研李研李研孙晶莹
- 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附
- 浅谈如何集中学生的课堂学习注意力被引量：9
- 2013年
- 提高学生课堂的注意力是保证课堂教学效果的关键。因此,教师在课堂上必须想方设法吸引学生的注意力,使其对教师所讲内容"入脑、入心"。笔者结合自己在中职《妇产科护理学》教学中的实际工作经验,从严格的课堂纪律,巧妙的课堂设计及抓住难点、考点和实用点三个方面,谈如何提高学生的课堂学习注意力。
- 李研党世民刘海丽
- 关键词：注意力纪律课堂设计
- 三聚氰胺单克隆抗体不同纯化方法的比较被引量：3
- 2022年
- 为了建立更适用于三聚氰胺单克隆抗体的纯化方法,分别采用了硫酸铵两次沉淀法、正辛酸-硫酸铵沉淀法、凝胶过滤层析法、亲和层析法、阴离子交换层析法对三聚氰胺单克隆抗体进行纯化。对纯化后的三聚氰胺单克隆抗体的纯度、浓度、效价进行鉴定,对比不同纯化方法之间的差异。结果证明亲和层析法对于三聚氰胺单克隆抗体纯化最为适宜。由于亲和层析法纯化纯度高,快速便捷,对三聚氰胺单克隆抗体损伤小,最为推荐。研究者也可结合自身条件,参考文中数据结果,根据实验需要自行选择适合自身的纯化方法。
- 李研李研封青冯杨萌孙晶莹
- 关键词：亲和层析法
- 抗柯萨奇病毒A16型单克隆抗体的制备和应用被引量：1
- 2019年
- 目的制备抗CA16病毒的特异性单克隆抗体,评价单克隆抗体在ELISA和细胞免疫化学染色中的作用,并利用单抗建立CA16快速检测胶体金免疫层析法并对其进行初步评价。方法 CA16病毒接种RD细胞大量培养,氯化铯密度梯度超速离心纯化病毒颗粒,透射电镜鉴定纯化产物。福尔马林灭活病毒颗粒后免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术制备稳定分泌抗CA16单抗的杂交瘤细胞株。ELISA和免疫荧光试验分别对单抗特性进行分析。根据单抗反应特性,分析单抗在细胞ELISA、细胞免疫组化中的应用,并利用特异性抗CA16单抗建立CA16胶体金免疫层析快速检测法。结果氯化铯密度梯度离心纯化病毒颗粒电镜观察显示,病毒颗粒为二十面体立体对称球形结构,大小均匀。经免疫小鼠,获得1株稳定分泌抗CA16单克隆抗体的杂交瘤细胞株(mAb CA16-19),该单抗为IgG2a亚型,细胞免疫荧光表明,单抗与RD宿主细胞内的CA16病毒颗粒结合。细胞ELISA显示,随着病毒滴度增加吸光度也增加。细胞免疫化学染色分析表明,单抗可与CA16病毒感染的RD结合,而不与EV71感染RD细胞和正常RD细胞反应。因此,该单抗可用于细胞ELISA和细胞免疫化学染色。同时,依据前期制备的抗CA16单抗(mAb CA16-10),并结合此次制备的mAb CA16-19共同建立胶体金免疫层析试纸条,该试纸条不与EV71和柯萨奇病毒B型交叉反应,最低检测限为6.25×106.25TCID50/0.1 mL。结论利用氯化铯密度梯度离心纯化出CA16病毒颗粒,筛选出1株特异性抗CA16单抗,此株单抗可用于细胞免疫荧光试验、细胞ELISA和细胞免疫化学染色试验。并以单抗为原材料建立了CA16快速检测胶体金免疫层析法,为CA16病毒感染的快速诊断提供帮助。
- 刘杨赵向绒余鹏博郭春艳李研赵彭花胡军
- 关键词：病毒纯化单克隆抗体胶体金免疫层析
- H1N1流感病毒HA蛋白抗原表位预测方法研究
- 2018年
- 目的对H1N1流感病毒血凝素（hemagglutinin，HA）蛋白抗原表位预测方法进行研究。方法用H1N1流感病毒裂解疫苗常规法免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／O）融合、克隆化筛选，获得特异性单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb），辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记各株mAb，ELISA阻断试验检测各mAb相互阻断结果；克隆各mAb的轻链和重链可变区基因，并用计算机模拟预测各mAb结合HA抗原表位的氨基酸位点。结果获得稳定分泌抗H1N1流感病毒HA蛋白的杂交瘤细胞3株；ELISA阻断试验将3株mAbs分为2类；计算机模拟预测将3株mAbs也分为2类。结论ELISA阻断试验和计算机模拟预测在解析H1N1流感病毒HA蛋白抗原表位时可以相互佐证。
- 郭春艳刘杨封青梁导艳梁导艳李慧瑾孙晶莹李研赵彭花赵向绒
- 关键词：H1血凝素抗原表位
