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梅花鹿骨钙素的原核表达与活性研究被引量：1: 2017年; 目的利用基因工程技术表达纯化梅花鹿骨钙素重组蛋白(Bone gla protein,BGP)并初步研究其活性,为研究梅花鹿茸生长发育提供技术支撑。方法通过PCR技术获取BGP基因,构建p GEX-BGP-His表达载体,并转化至Rosseta(DE3)宿主菌中,IPTG诱导表达。经Ni Sephrose 6 Fast Flow分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯化产物。MTT法分析BGP对鹿茸软骨细胞chon-sv40的生物活性。结果经双酶切、测序证实p GEX-BGP-His表达载体构建成功;成功诱导表达相对分子量33.5 KDa的重组蛋白;以37℃,0.1 mmol/L IPTG诱导5 h条件下重组蛋白表达量较高;蛋白纯化后纯度可达95%;重组蛋白对鹿茸软骨细胞chon-sv40具有明显促增殖作用。结论骨钙素与鹿茸软骨细胞chon-sv40的增殖密切相关,为后续BGP在骨代谢机制以及鹿茸有效成分的研究奠定基础,对鹿茸生长机制的研究具有重要意义。; 张楠楠李宏灵李帅军张鹏飞赵雨曲毅; 关键词：梅花鹿骨钙素原核表达

参芩抗辐射凝胶抗UVB辐射作用研究: 2015年; 目的研究参芩抗辐射凝胶(SQ)对UVB照射所致小鼠皮肤及免疫系统损伤的保护作用。方法采用SQ处置、UVB照射小鼠后,观察其对小鼠脏器指数,皮肤组织形态学,血液中白细胞、血小板等改变;应用MTT法检测脾淋巴细胞转化率,醇生化法检测皮肤匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果 SQ能够增加小鼠胸腺指数及白细胞计数,提高小鼠淋巴细胞转化率及小鼠皮肤组织中SOD活性。结论 SQ能够抵御UVB照射及对小鼠免疫系统、皮肤组织有明显的保护作用。; 唐燕刘明昕张洪长张鹏飞陈新; 关键词：SOD 小鼠

响应面法优化莲子蛋白提取工艺研究被引量：7: 2017年; 目的:研究莲子蛋白质水提取的最佳条件。方法:在单因素试验分析的基础上,采用合理的实验设计方案,通过响应面法优化莲子蛋白的提取条件。结果:提取莲子蛋白的最佳工艺参数为提取p H值8.0,料液比1∶15,提取时间7 h,蛋白提取率为14.53%。结论:响应面法优化的莲子蛋白提取条件简便易行,准确性和重现性好,具有实际应用价值。; 孙天霞尹翌秋张鹏飞王敏张丽轩赵雨王思明; 关键词：莲子蛋白质响应面法

载RGD肽脂质体的优化和初步评价: 2017年; 采用逆相蒸发法制备了载RGD肽脂质体。以包封率为指标,采用单因素试验和正交设计优化工艺条件。确定的优化条件为:卵磷脂和胆固醇的质量比为4∶1,磷酸盐缓冲液的体积为10 ml,RGD肽的加入量为18 mg,超声时间为3 min。3批优化制品平均粒径为473 nm,平均包封率为75.35%。RGD肽脂质体在磷酸盐缓冲液中16 h累积释放率为48.5%,相较于RGD肽溶液有一定的缓释效果。初步稳定性试验表明,载RGD肽脂质体在4℃保存相对较稳定。; 王思明尹翌秋张鹏飞孙天霞齐滨; 关键词：RGD肽脂质体逆相蒸发法包封率体外释放稳定性

雷公藤多苷对强直性脊柱炎患者成纤维细胞中BMP-2表达的影响被引量：3: 2014年; 目的:探讨雷公藤多苷(LGTDG)对骨形态发生蛋白(BMP)信号转导通路及BMP-2表达的影响,阐明LGTDG抗强直性脊柱炎(AS)骨化的作用机制。方法:体外培养的AS成纤维细胞分为对照组与0.5、1.0、1.5和2.0 mg·L-1给药组,检测各组细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性及最佳药物浓度;CCK-8法检测1.0mg·L-1给药组的细胞增殖率;生化检测法定量检测对照组与1.0 mg·L-1给药组BMP-2表达水平;Western blotting法检测对照组与1.0mg·L-1给药组BMP-2和Cbfal蛋白表达。结果:各给药组细胞中ALP活性均低于对照组,其中以1.0mg·L-1给药组细胞的ALP活性为最低(P<0.01)。CCK-8法检测,1.0mg·L-1给药组AS成纤维细胞增殖率明显低于对照组(P<0.01),LDTDG诱导第4天细胞增殖率最高,进入平台期后细胞的增殖率开始下降。生化检测法和Western blotting法检测,1.0mg·L-1给药组BMP-2的蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。结论:LGTDG通过对BMP信号转导通路的影响有效地抑制AS成纤维细胞内BMP-2表达,延缓细胞向成骨型分化导致AS骨化发生。; 张洪长张莹刘明昕唐燕张鹏飞潘志; 关键词：雷公藤多苷强直性脊柱炎骨形态发生蛋白成纤维细胞 BONE

重组人参脂质转运蛋白表达载体构建及抗疫病活性研究被引量：1: 2016年; 目的研究人参脂质转运蛋白(Lipid transfer protein,LTP)对人参疫病菌的抑制作用。方法采用RT-PCR技术克隆人参LTP基因,构建表达载体,并转化到大肠杆菌中,IPTG诱导表达。采用Ni–NTA亲和层析纯化目的蛋白,纸片扩散法验证目的蛋白的抗菌活性。结果人参LTP基因全长为363个碱基,编码120个氨基酸;目的蛋白经纯化后,SDS-PAGE电泳检测为单一条带;抑菌试验表明,重组LTP可明显抑制人参疫病菌丝的生长。结论人参LTP对人参疫病菌具有显著抑制作用。; 才可新秦晓晔李帅军王敏张鹏飞赵雨曲毅; 关键词：人参抑菌活性

梅花鹿基质金属蛋白酶-13催化域的原核表达和活性分析: 2016年; 目的利用基因工程技术体外表达梅花鹿基质金属蛋白酶-13(MMP-13)催化域并初步探讨其活性,为进一步研究鹿茸再生和快速增长机制奠定基础。方法从梅花鹿鹿茸转录组数据中获得cd MMP-13基因序列,通过运用PCR方法获得了编码催化域(cd MMP-13)的c DNA序列,构建重组质粒p ET28a-cd MMP-13后,转化大肠杆菌,利用IPTG诱导蛋白表达并纯化蛋白,表达产物经复性后鉴定酶活性。结果表达产物为21 KDa的融合蛋白且具有明显明胶酶活性。结论体外表达的具有催化活性的融合蛋白可为研究鹿茸快速生长和再生机制提供材料和基础。; 张学亮张鹏飞孙天霞张丽轩赵雨曲毅; 关键词：梅花鹿基质金属蛋白酶-13 明胶酶谱法

人参中淀粉酶和酯酶同工酶分析被引量：1: 2017年; 目的:研究不同生长时期人参中淀粉酶(AMY)和酯酶(EST)同工酶酶谱特征。方法:以不同生长时期5年生人参为供试材料,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法得到人参AMY和EST同工酶电泳胶片,并通过凝胶成像分析软件和origin 7.5软件生成指纹图谱,导出重要技术参数,分析比较不同生长时期人参中AMY和EST同工酶酶谱特征。结果:不同生长时期人参中AMY和EST同工酶酶带条数无明显变化,均能分离出4条酶带,可作为各自的主要特征酶带。结论:AMY和EST同工酶酶谱具有鲜明特征,其活性在人参生长发育的各个时期相对稳定。; 张惠刘美辰孙天霞张鹏飞幺宝金白雪媛赵雨; 关键词：人参酯酶同工酶

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张鹏飞