匡乔婷
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- 人脐带间充质干细胞在活体内转染方法的优化选择
- 2016年
- 目的确定一种更加稳定、有效的活体内转染干细胞的方法。方法从人的脐带提取干细胞,体外培养,并分别用PKH 26和慢病毒-GFP两种方法标记干细胞。取60只SD大鼠,随机分成PKH 26转染组和慢病毒-GFP转染组,将用PKH 26和慢病毒-GFP标记的第3代干细胞液分别注入大鼠门静脉,继续饲养。然后分别于转染后第3 d、8 d及13 d时各处死大鼠10只,取出肝脏,用流式细胞仪检测标记转染细胞百分比和凋亡细胞百分比并进行比较。结果 PKH 26和慢病毒-GFP两种方法标记的第3代人脐带间充质干细胞呈梭形,PKH 26红色染料可以均匀分布在干细胞的细胞膜内,标记清晰;慢病毒-GFP标记的干细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,清晰、稳定。转染后的干细胞在活体内第3 d时,两种方法转染的干细胞在镜下颜色清晰、明显,区分度大,转染效率高;但随着时间的推移,PKH 26转染的红色逐渐变淡,颜色模糊,到第13 d时,干细胞的红色逐渐消退;而慢病毒-GFP转染的干细胞,3个时间点的颜色都较清晰,在第8 d时达到高峰。通过流式细胞仪检测发现,在第8 d和第13 d时慢病毒-GFP细胞转染方法的效率明显高于PKH 26转染(P<0.05),而两种转染方法的细胞凋亡率在3个时间点比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论慢病毒-GFP转染是一种更加稳定、高效的活体内细胞示踪方法,可用于活体内细胞移植的长期观察。
- 陈政匡乔婷杨杰张强
- 关键词：干细胞转染
