郑小梅
- 作品数：22 被引量：68H指数：5
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划天津市科技支撑计划重点项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程经济管理更多>>
- 葡萄糖转运蛋白及其在提高有机酸生产中的应用
- 本发明公开丝状真菌中具有葡萄糖转运功能的蛋白及其在提高有机酸生产的应用，属于生物工程和基因工程领域。同时，本发明还公开了工程菌株的构建方法，以及利用该菌株生产有机酸尤其是柠檬酸的方法。
- 郑平郑小梅孙际宾周文娟张立辉马延和
- 文献传递
- 黑曲霉柠檬酸工业菌株原生质体制备与转化被引量：10
- 2015年
- 黑曲霉是柠檬酸工业化生产的主要发酵菌株。尽管现代遗传操作技术在黑曲霉的实验室菌株、蛋白质生产菌株等的应用中获得了成功,但是柠檬酸工业菌株遗传转化异常困难,成为柠檬酸工业持续升级的重要限制因素。以柠檬酸工业生产实际应用的黑曲霉菌株为研究对象,对其原生质体的制备与再生以及PEG介导的转化等条件进行了细致优化。结果表明,柠檬酸高产工业菌株原生质体的制备需选取丰富培养基中培养48 h的年轻菌丝体,在1.5%裂解酶-0.5%蜗牛酶-0.2%溶菌酶的复合酶解体系下裂解2.5 h,原生质体的制备浓度可达106个/m L以上,原生质体再生效率可达90%以上。原生质体的浓度是原生质体-PEG介导转化方法的关键,当原生质体浓度达到106个/m L以上时,高产柠檬酸菌株的转化效率大幅提高。成功建立了由原生质体-PEG所介导的高产柠檬酸黑曲霉菌株的遗传转化体系。
- 张晓立郑小梅满云罗虎于建东郑平刘浩孙际宾
- 关键词：黑曲霉柠檬酸遗传操作系统原生质体DNA转化
- 产O-乙酰高丝氨酸的大肠杆菌构建与发酵测试被引量：2
- 2017年
- O-乙酰高丝氨酸(OAH)是具有潜在工业应用价值的前体化合物,可用于制备高丝氨酸与蛋氨酸等。以一株改造自苏氨酸产生菌的Escherichia coli Thr L为出发菌株,过表达OAH合成途径中的关键酶高丝氨酸脱氢酶基因thr A和高丝氨酸乙酰基转移酶基因met X,并利用不同强度的启动子组合优化这两个基因的表达水平,通过发酵培养基中的苏氨酸和酵母粉的浓度优化以提升OAH的产生菌株的生产性能。通过启动子组合优化结果发现,当thr A与met X均采用J23110启动子时,该重组菌株E.coliOAH4的OAH合成能力最强,摇瓶发酵50 h后,其OAH产量为1.54 g/L。当苏氨酸的浓度为2 g/L,酵母粉的浓度为6 g/L时,E.coli OAH4的发酵水平最高,摇瓶发酵50 h后,OAH的产量可进一步提升至1.98 g/L。本研究首次在E.coli中实现了OAH的合成,并通过发酵优化确定了OAH的最优发酵条件,为后续OAH生产应用研究奠定了基础。
- 杨静杨静李庆刚李庆刚郑平郑小梅
- 关键词：大肠杆菌
- 真菌来源的强启动子及其应用
- 本发明涉及真菌中具有启动子活性的多核苷酸及其在生产有机酸、酶制剂中的用途、含有多核苷酸的转录表达盒、重组载体、重组宿主细胞，以及利用启动子活性的多核苷酸在增强目标基因表达中的应用，进而例如可以提高菌株的有机酸、酶制剂的产...
- 郑平郑小梅孙际宾卢玉丹周文娟张立辉马延和
- 一种柠檬酸的生产方法及其应用
- 本发明公开一种提高黑曲霉柠檬酸产量的方法及其应用，属于生物工程和基因工程领域。同时，本发明还公开了工程菌株的构建方法，以及利用该菌株生产柠檬酸的方法。
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- 小分子代谢物对黑曲霉己糖激酶和丙酮酸激酶的酶活调控被引量：1
- 2021年
- 黑曲霉是柠檬酸的工业生产菌株,糖酵解中的3个不可逆反应是柠檬酸积累的重要调控节点,但己糖激酶和丙酮酸激酶的代谢调控研究相对较少,本研究旨在加深对己糖激酶和丙酮酸激酶代谢调控的认识。首先,将黑曲霉己糖激酶和丙酮酸激酶进行内源过表达,经GST亲和层析纯化后重组酶的比酶活分别为(4.86±0.14)U/mg和(1.83±0.02)U/mg。通过小分子代谢物对其酶活影响的检测,发现己糖激酶受果糖-6-磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、ADP和ATP的抑制,而丙酮酸激酶被果糖-1,6-二磷酸、苹果酸和富马酸抑制,同时存在底物ADP的前馈激活作用。进一步通过蛋白三维结构建模与蛋白-小分子代谢物对接模拟分析,发现黑曲霉己糖激酶底物结合位点Asn210及其附近的氨基酸是与小分子代谢物互作的关键位点,而丙酮酸激酶位于别构效应结构域的Thr416、Thr417与Trp470则为关键小分子代谢物的重要结合位点。本研究系统鉴定了小分子代谢物对己糖激酶与丙酮酸激酶的代谢调控关系并预测了其别构调控位点,加深了对黑曲霉糖酵解调控机制的认识。
- 孟晓建于建东郑小梅郑小梅李志敏郑平叶勤
- 关键词：黑曲霉柠檬酸己糖激酶丙酮酸激酶代谢调控
- 谷氨酸棒状杆菌合成5-氨基乙酰丙酸的途径构建与发酵优化被引量：7
- 2017年
- 5-氨基乙酰丙酸(5-amino levulinic acid,ALA)是生物体内天然存在的一种非蛋白质氨基酸,在农业和医药等领域应用广泛。为了在谷氨酸棒状杆菌中建立ALA碳四合成途径并优化其发酵体系,首先在谷氨酸棒状杆菌中过表达沼泽红假单胞菌来源的ALA合成酶(ALAS),建立高效的ALA碳四合成途径,然后从不同发酵培养基的比较、诱导剂和底物甘氨酸的浓度以及初始接种量等不同方面对ALA摇瓶发酵工艺进行了优化。结果显示,过表达Hem A的13032/p ZWA1菌株ALA产量达到1.41 g/L,是对照菌株的67.14倍。ALA的最优摇瓶发酵条件为以酵母粉为氮源的M9培养基,采用5%的接种量0.1 mmol/L IPTG进行Hem A的诱导表达,体系中甘氨酸的浓度要控制在4 g/L,摇瓶中ALA产量可达到3.28 g/L,比优化前提高了132.62%。采用发酵优化的条件,在5 L发酵罐的放大发酵中ALA产量可达10.08 g/L,这是现有报道中谷氨酸棒状杆菌一步发酵合成ALA的最高产量。
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- 关键词：5-氨基乙酰丙酸谷氨酸棒状杆菌沼泽红假单胞菌发酵优化
- CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的研究进展被引量：27
- 2015年
- CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated proteins)系统为细菌与古生菌中抵御外源病毒或质粒DNA入侵的获得性免疫系统。该系统在crRNA的指导下,使核酸酶Cas识别并降解外源DNA。其中,Ⅱ型CRISPR-Cas系统最为简单,仅包括一个核酸酶Cas9与tracrRNA:crRNA二聚体便可完成其生物功能。基于CRISPR-Cas9的基因组编辑技术的核心为将tracrRNA:crRNA设计为引导RNA,在引导RNA的指导下Cas9定位于特定DNA序列上,进行DNA双链切割,实现基因组的定向编辑。CRISPR-Cas9系统以设计操纵简便、编辑高效与通用性广等优势成为新一代基因组编辑技术,为基因组定向改造调控与应用等带来突破性革命。从CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的发展与应用等方面综述其最新研究进展,并着重介绍该技术的关键影响因素,为相关研究者提供参考。
- 郑小梅张晓立于建东郑平孙际宾
- 黑曲霉葡萄糖吸收定量检测的方法建立及其在MstC功能研究中的应用
- 2023年
- 黑曲霉是有机酸与酶制剂重要的工业生产菌株,具有强大的水解酶系与葡萄糖转运系统,可快速响应胞外碳源变化,摄取环境中葡萄糖供给细胞生长和产物合成。作为重要的碳源底物与关键的信号分子,葡萄糖的摄取吸收直接影响黑曲霉细胞生长与发酵性能。针对目前丝状真菌缺乏简便葡萄糖吸收能力定量表征方法的问题,本文以2-(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-氨基)-2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)作为葡萄糖吸收探针,通过将预培养的黑曲霉孢子与2-NBDG孵育后,利用荧光显微成像与流式细胞分析,建立了丝状真菌的葡萄糖吸收的定量检测方法。结果发现,2-NBDG的最佳使用浓度为150μmol/L,最佳孵育时间为4 h。进一步利用该定量分析方法,发现低亲和力葡萄糖转运蛋白MstC的过表达使黑曲霉葡萄糖吸收提高1.44倍,同时在前期研究的基础上,利用多序列比对分析,设计了MstC的突变体R188K,通过检测发现该点突变可直接导致MstC葡萄糖转运活性的丧失,这表明Arg188是影响MstC葡萄糖转运能力的关键氨基酸位点。本文葡萄糖摄取定量检测方法的建立及其在MstC功能研究上的应用,不仅加深了丝状真菌葡萄糖吸收的定量认识,也为葡萄糖转运系统的改造优化提供了技术支撑。
- 高凯月郭雨婷杜奕谋郑小梅郑小梅赵伟郑平孙际宾
- 关键词：黑曲霉葡萄糖吸收葡萄糖转运蛋白流式细胞检测
- 生产柠檬酸的微生物及其构建方法和应用
- 本发明公开了生产柠檬酸的微生物及其构建方法和应用。本发明基于对黑曲霉M202菌株的基因组数据挖掘，出乎意料地发现4个蛋白的失活可以提高黑曲霉柠檬酸的产量，进一步分析发现，这4个蛋白的编码基因属于一个功能未知的基因簇，而该...
- 孙际宾郑小梅郑平张立辉周文娟卢玉丹马延和
