沈凤
- 作品数：9 被引量：45H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 27nt-miRNA对人脐带间充质干细胞定向内皮细胞分化和管腔形成的影响及其分子机制被引量：2
- 2018年
- 目的探讨27nt-miRNA对人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)定向内皮细胞分化和分化后细胞管腔形成能力的影响,并探讨其分子机制。方法构建27nt-miRNA、anti-27nt-miRNA及对照慢病毒载体。将h UCMSCs分为27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组、对照组,分别转染27nt-miRNA、anti-27nt-miRNA及对照慢病毒载体后观察转染效率,诱导分化并观察细胞形态变化,MTT检测分化后细胞增殖能力,硝酸还原酶法检测分化过程中细胞的一氧化氮(NO)产量,人工基底膜检测分化后细胞的成管能力,RT-PCR、免疫细胞化学和Western blotting分别检测分化后细胞的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和蛋白。结果与对照组相比,27nt-miRNA组h UCMSCs分化程度低,未见管腔样网络结构;分化第9天,27nt-miRNA组细胞NO产量较对照组降低33.49%(P<0.05)、eNOS mRNA表达量较对照组降低23.81%(P<0.01)、eNOS蛋白表达较对照组降低24.56%(P<0.05);anti-27nt-miRNA组的上述指标较对照组及27nt-miRNA组升高(P<0.05或P<0.01)。结论 27nt-miRNA明显抑制h UCMSCs定向内皮细胞分化及管腔形成能力,其作用机制与27nt-miRNA抑制eNOS蛋白表达及NO合成有关。
- 陶晓静杨鹏沈凤颜渊鸳李丹罗雪兰甘娜覃裕旺欧和生
- 关键词：非编码RNA干细胞分化间充质干细胞人脐带间充质干细胞内皮细胞
- microRNA-24对自噬的调节及血管内皮细胞管腔形成的影响被引量：5
- 2018年
- 目的探讨microRNA-24(miR-24)对自噬相关基因LC3Ⅱ和Beclin-1的调节及其对血管内皮细胞管腔形成能力的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)随机分为空白对照组、雷帕霉素+miR-24高表达组以及雷帕霉素组。其中空白对照组的细胞不作任何处理;雷帕霉素+miR-24高表达组的细胞先转染miR-24高表达质粒,再用1 000 nmol/L的雷帕霉素干预6 h建立自噬模型;雷帕霉素组的细胞同样用1 000 nmol/L的雷帕霉素干预6 h建立自噬模型;然后分别用MTT法检测HUVECs的增殖能力、细胞划痕实验检测HUVECs迁移能力及Matrigel实验检测HUVECs管腔形成能力,进一步用蛋白免疫印迹法(Western blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测LC3II和Beclin-1的蛋白和mRNA表达水平。结果 (1)与空白对照组相比,雷帕霉素组、雷帕霉素+miR-24高表达组细胞增殖能力和迁移比例降低(P<0.05),雷帕霉素组的管腔形成数量、长度与空白对照组相近,而雷帕霉素+miR-24高表达组则基本没有形成明显管腔样结构。(2)与空白对照组相比,雷帕霉素+miR-24高表达组和雷帕霉素组的LC3II和Beclin-1 mRNA和蛋白表达量均不同程度增加(P<0.05)。(3)在雷帕霉素+miR-24高表达组中,上述指标较雷帕霉素组均降低(P<0.05),特别是管腔形成数目明显减少。结论 miR-24可在转录后水平调控自噬相关基因LC3II和Beclin-1的表达,进而下调细胞自噬水平。这很有可能是miR-24抑制HUVECs增殖、迁移和管腔形成的机制之一。
- 杨鹏欧和生莫国君罗雪兰沈凤陶晓静吕冬宁
- 关键词：管腔自噬BECLIN-1
- 高等医学教育改革与发展的思路探讨被引量：7
- 2018年
- 高等医学教育改革和医学卫生人才培养质量与人类健康密切联系,一直备受社会关注。本文从教育模式、课程设置、教师团队、教学基地的合作、研究生管理与培养等方面分析我国高等医学教育的研究现状,并从医教协同理念出发,探讨我国高等医学教育改革与发展思路。
- 严丽梅何芳丽沈凤欧和生
- 关键词：高等医学教育
- 27nt-miRNA对血管平滑肌细胞SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响被引量：8
- 2019年
- 目的:探讨27nt-微小RNA(27nt-miRNA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)中平滑肌22α蛋白(SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响。方法:构建27nt-miRNA高表达、反义序列(anti-27nt-miRNA)以及阴性对照的表达质粒,经慢病毒包装后分别转染大鼠原代VSMCs,加入血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导VSMCs表型转换。MTT实验检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测细胞中SM22α的mRNA和蛋白表达情况。结果:与正常组相比,PDGF-BB组的细胞活力上升(P <0.05)、迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05);与阴性对照慢病毒组相比,27nt-miRNA高表达组的细胞活力下降(P <0.05),迁移能力下降(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量明显升高(P <0.05);而anti-27nt-miRNA组细胞的细胞活力上升(P <0.05),迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05)。结论:27nt-miRNA促进SM22α表达,同时抑制VSMCs的活力及迁移,并有可能抑制VSMCs从收缩型转变为合成型。
- 沈凤杨鹏陶晓静李丹颜渊鸳罗雪兰秦祖杰覃裕旺欧和生
- 关键词：血管平滑肌细胞表型血小板源性生长因子
- 微RNA-24对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制被引量：2
- 2020年
- 目的探讨微RNA-24(miR-24)对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)存活、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法通过转染miR-24高表达、miR-24抑制物(anti-miR-24)及其阴性对照慢病毒质粒(miR-24 NC)构建稳转细胞,3种细胞用H2O2500μmol·L^-1处理12 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移率,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24,Bax,Bcl-2和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平,Western印迹法和免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与miR-24 NC组比,miR-24高表达组miR-24表达升高(P<0.05),而anti-miR-24组降低(P<0.05)。与正常对照组比,H2O2组细胞凋亡率增加(P<0.05)、细胞存活和迁移率降低(P<0.05),表明氧化损伤模型构建成功。与H2O2+miR-24 NC组比,H2O2+miR-24高表达组上述指标较H2O2+miR-24 NC组升高(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达量增加,抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而H2O2+anti-miR-24组可降低细胞凋亡率、增加细胞存活和迁移率,降低Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达水平,增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论氧化应激状态下,miR-24可通过上调Bax、胱天蛋白3表达和下调Bcl-2蛋白表达,促进HUVEC凋亡和抑制其存活和迁移能力。
- 颜渊鸳李丹赵燕姣陶晓静沈凤杨鹏罗雪兰欧和生
- 关键词：人脐静脉血管内皮细胞细胞凋亡
- 27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的影响被引量：2
- 2019年
- 为探讨27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化影响,构建27nt-miRNA过表达、反义序列Anti-27nt-miRNA以及阴性对照的表达质粒,慢病毒包装后分别转染人脐带间充质干细胞(hUCMSC),加入Ⅳ型胶原诱导hUCMSC定向分化为血管平滑肌细胞。四唑盐(MTT)比色法检测分化后细胞活力,免疫细胞化学染色法检测分化后细胞SM22α(兔抗平滑肌22α,smooth muscle 22α)的表达,Western印迹法和RT-PCR检测分化后细胞内的SMA (兔抗平滑肌肌动蛋白,smooth muscle actin) mRNA、SM 22α mRNA及其蛋白质表达情况。经检测,27nt-miRNA过表达分化组与阴性对照组相比,细胞活力下降20.48%(P<0.05),SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白质表达量明显升高(P<0.05);而Anti-27nt-miRNA分化组细胞活力上升了18.07%(P<0.05),SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白质表达量下降(P<0.05)。综上所述,27nt-miRNA能够促进间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化,并且抑制分化后的细胞活力。
- 沈凤杨鹏陶晓静颜渊鸳李丹欧和生
- 关键词：间充质干细胞血管平滑肌细胞SMA
- 基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨27nt-miRNA对血管平滑肌细胞自噬的调控作用被引量：8
- 2020年
- 目的探讨27nt-miRNA对西罗莫司诱导的血管平滑肌细胞自噬的调控作用及分子机制。方法将大鼠主动脉血管平滑肌细胞分为正常组、西罗莫司组、27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组和阴性对照组。正常组给予正常培养;西罗莫司组用100 nmol·L^-1西罗莫司作用6 h建立自噬模型;27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组及阴性对照组先转染相应慢病毒载体,待转染成功后用100 nmol·L^-1西罗莫司作用6 h建立自噬模型。用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法验证27nt-miRNA慢病毒稳转细胞株构建情况,用透射电镜观察5组细胞内部自噬小体数量,用四甲基偶氮唑盐法检测5组细胞活性,用Western blot法与qRT-PCR法检测LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR的蛋白和mRNA表达水平。结果慢病毒转染细胞成功后27nt-miRNA的表达受到影响;与阴性对照组相比,细胞内自噬小体及自噬溶酶体显著增多,27nt-miRNA组细胞的活性显著增强[(0.90±0.03)vs.(0.72±0.01),P<0.05],LC3-Ⅰ/Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达量均显著增加[(1.92±0.21)vs.(1.59±0.09),(9.47±0.61)vs.(7.19±1.32),均P<0.05],LC3-Ⅱ和Beclin-1的mRNA表达量均显著增加[(1.83±0.33)vs.(1.27±0.19),(1.77±0.29)vs.(1.36±0.23),均P<0.05],PI3K/Akt/mTOR信号通路被抑制;与此同时,anti-27nt-miRNA组细胞质内自噬小体及自噬溶酶体显著减少,且细胞活性显著性降低[(0.60±0.03)vs.(0.72±0.01),P<0.05],LC3-Ⅱ和Beclin-1的mRNA相对表达量均显著下降[(0.90±0.25)vs.(1.27±0.19),(0.98±0.24)vs.(1.36±0.23),均P<0.05]。结论过表达27nt-miRNA可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进血管平滑肌细胞自噬进而引起细胞过度增殖,27nt-miRNA可能成为心血管疾病的潜在治疗靶点。
- 李丹滕红丽覃裕旺颜渊鸳赵燕姣沈凤陶晓静杨鹏罗雪兰唐华民欧和生
- 关键词：自噬血管平滑肌细胞
- miR-24对人脐静脉内皮细胞增殖、转移及自噬的影响被引量：6
- 2017年
- 目的探讨miR-24对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、转移、自噬的影响。方法将HUVECs随机分为空白对照组、雷帕霉素+miR-24高表达组、雷帕霉素组。空白对照组不给予任何处理;雷帕霉素组的HUVECs用1 000 nmol/L雷帕霉素处理6 h建立自噬模型。雷帕霉素+miR-24高表达组的HUVECs先转染miR-24高表达质粒,待转染成功后以同样方法建立自噬模型;用CCK-8法检测HUVECs增殖能力,细胞划痕试验检验细胞的转移能力,进一步用免疫组织化学和Western blotting法检测HUVECs自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1的蛋白表达水平,采用透射电镜观察细胞内部自噬小体。结果与空白对照组相比,雷帕霉素组、雷帕霉素+miR-24高表达组OD值、细胞迁移比例降低、Beclin-1蛋白及LC3Ⅱ蛋白表达量上升(P<0.01或<0.05)。与雷帕霉素组相比,雷帕霉素+miR-24高表达组OD值、细胞迁移比例下降,Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达量下降(P<0.01或<0.05)。透射电镜观察结果显示,空白对照组和雷帕霉素+miR-24高表达组的细胞质内各细胞器分布基本正常,细胞核形态也正常,细胞质中未见明显自噬小体;雷帕霉素组细胞质中可见明显的空泡状结构、包含部分双层膜结构的自噬小体。结论 miR-24可显著抑制HUVECs的增殖、转移及自噬。
- 杨鹏罗雪兰莫国君陶晓静沈凤欧和生
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞自噬细胞增殖
- miRNA-145对血管平滑肌细胞功能调节与心血管疾病研究进展被引量：8
- 2017年
- 血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)是血管壁主要细胞类型,在维持血管正常生理功能过程扮演重要角色,其在正常环境下是一种具有调节血管壁张力、维持血压等功能的高度分化型细胞(收缩型)。在血管增殖性疾病的发展过程中,VSMC由分化型转化为具有合成和分泌多种基质蛋白能力的未分化型(合成型),导致自身肥大、血管内膜增厚、血管狭窄等病理结果,这些是形成高血压、动脉粥样硬化等血管增殖性疾病的病理基础。近年来发现miRNAs参与心血管生理、病理过程的调控并且与VSMC密切相关,其中miR-145经证实是正常动脉壁表达最为丰富的micoRNAs,其在VSMC功能调节中起着非常重要的作用,这可能为治疗高血压、动脉粥样硬化等血管增殖性疾病提供新的诊断、治疗依据。本文就miR-145对VSMC功能调节以及心血管疾病病理生理学意义作一综述。
- 沈凤陶晓静欧和生
- 关键词：血管平滑肌细胞MIR-145心血管疾病
