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MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定被引量：1: 2014年; 目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因MPB64连接到pFastBac载体，获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态，通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中，得到Bacmid-MPB64穿梭载体，脂质体包被后转染Sf 9细胞收获P1代病毒，重复转染Sf 9细胞三次获得高滴度的P4代病毒，收集细胞上清通过Q Sepharose FF和Ni亲和层析柱两步层析纯化得到目的蛋白MPB64。纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠并检测血清中抗体滴度，ELISA检测MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度，MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果：MPB64在昆虫细胞中成功表达，纯化后蛋白纯度达90％以上，蛋白产量为35 mg／L，纯化蛋白能有效刺激BALB／c小鼠产生抗体，提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量，目的蛋白在0.2～100μg／ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。结论：成功在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达了具有免疫原性的MPB64蛋白，为生产结核病疫苗奠定了基础。; 徐丹姜潮陈昱艾君王晓艳李校堃; 关键词：MPB64 杆状病毒表达系统结核分枝杆菌

金属硫蛋白2基因在红花中表达的初步研究: 2016年; 目的获得转金属硫蛋白2(metallothionein 2,MT2)红花植株,为MT药用蛋白的生产奠定基础。方法采用Nco I/HindⅢ酶切pEASY-oleosin-MT获得oleosin-MT融合基因,将其插入到植物油体高效表达载体pOP上,构建重组质粒pOP-oleosin-MT,进行PCR和双酶切鉴定。采用冻融法将重组质粒pOP-oleosin-MT转入根瘤农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,对转MT基因红花植株进行PCR检测及Southern blotting检测。结果成功构建了MT基因的植物油体表达载体pOP-oleosin-MT,获得了3株PCR检测呈阳性的转MT基因红花植株。结论建立了完善的红花再生体系,获得了转MT基因的红花植株。; 官丽莉陈昱武云云滕孝花杨晶郭咏昕胡人阁李海燕李校堃姜潮; 关键词：红花金属硫蛋白油体 SOUTHERN 重组质粒

植物金属硫蛋白的研究进展被引量：2: 2014年; 金属硫蛋白(Metallothionein,MT)是从动物体中提纯出来的具有生物活性及性能独特的低分子量蛋白,自从MT被发现以来,它就成为了基础科学研究的热点之一。该文在简要介绍植物金属硫蛋白结构和分类的基础上,概述了金属硫蛋白的分离提取方法;总结了作为现代新型化妆品原料所具有的清除自由基与抗氧化、对金属离子的解毒、防辐射作用、调控基因的表达等特殊功效;并展望了金属硫蛋白的应用前景及存在的问题。; 陈昱官丽莉杨晶王德仲李校堃姜潮张雪; 关键词：拟南芥化妆品

oleosin-MT融合蛋白在拟南芥中的表达及鉴定被引量：1: 2015年; 【目的】获得转金属硫蛋白(MT)基因的拟南芥植株,为利用植物生物反应器规模化生产MT奠定基础。【方法】利用融合PCR方法,扩增拟南芥MT基因与油体蛋白oleosin基因的融合基因,将融合基因克隆至表达载体pOP上,构建重组质粒pOP-oleosin-MT。采用冻融法将质粒pOP-oleosin-MT转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化拟南芥,用PCR检测并筛选转基因拟南芥阳性植株,采用SDS-PAGE法检测oleosin-MT融合蛋白的表达,用邻苯三酚自氧化法和结晶紫法测定融合蛋白的体外抗氧化活性。【结果】成功构建了植物油体特异表达载体pOP-oleosin-MT,融合蛋白oleosin-MT在拟南芥种子中成功表达,其分子质量为26ku;总蛋白质量浓度达到50μg/μL时,超氧阴离子的清除率最高,为58.5%;总蛋白质量浓度为10μg/μL时,羟自由基清除率可达69.7%。【结论】成功获得转MT基因的拟南芥株系,并证明融合蛋白oleosin-MT在拟南芥中具有良好的体外抗氧化活性。; 官丽莉陈昱朱栋韩怡来崔琪李海燕李校堃姜潮; 关键词：金属硫蛋白拟南芥

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陈昱