赵霞
- 作品数：7 被引量：6H指数：1
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- 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2片段多克隆抗体的制备及鉴定被引量：5
- 2015年
- 目的原核表达甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2功能区蛋白,制备其功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。方法利用带有CUB1、CUB2基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-CUB1和GST-CUB2融合蛋白并进行纯化,将纯化后的融合蛋白作为抗原,与Freund佐剂充分混合后免疫5周龄BALB/c雌性小鼠,制备多克隆抗体;应用Western blot法检测多克隆抗体特异性,应用ELISA检测多克隆抗体效价。结果成功表达并纯化GST-CUB1和GST-CUB2蛋白;应用其作为抗原对小鼠进行免疫后,成功制备出与其相应的多克隆抗体,且特异性强,与其他蛋白无交叉反应;间接ELISA测得CUB1抗体效价大于1∶32 000,CUB2抗体效价大于1∶16 000。结论成功制备了特异性强,效价高的GST-CUB1和GST-CUB2蛋白多克隆抗体。
- 韩小东贾天军贾晓晖李婷赵霞
- 关键词：多克隆抗体
- FXYD5基因真核表达载体的构建
- 目的：构建人高尔基复合体相关蛋白(FXYD5)基因真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达,研究肺炎衣原体0147基因与其相互作用方法：提取Hela 细胞的全部RNA,反转录成cDNA,以其作为模板,设计含特异性酶切位点...
- 程永婷贾晓晖赵霞李婷贾天军
- 甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)在HeLa细胞的表达
- 2016年
- 目的构建甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)真核表达载体并表达MAp19。方法应用PCR技术扩增得到MAp19基因,利用基因克隆技术构建真核表达载体pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19,酶切及测序对其进行鉴定;将构建成功的重组载体通过脂质体转染He La细胞,并采用G418筛选已获得整合有pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19的阳性细胞克隆,用荧光显微镜观察MAp19融合蛋白在He La细胞的定位;Western blot法检测MAp19融合蛋白的水平。结果构建了具有筛选特征和能够稳定表达的pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19重组质粒,测序结果与NCBI数据库比对完全一致;采用G418筛选后获得表达外源性MAp19蛋白的He La细胞,该蛋白定位于细胞质中;Western blot结果确定MAp19为分泌性蛋白。结论 MAp19真核表达载体构建成功,并能在真核细胞中表达出目的蛋白。
- 李婷李萍贾天军贾晓晖赵霞程永婷
- 关键词：真核表达转染
- Cpn0147基因真核表达载体的构建及在HeLa细胞中的表达
- 2015年
- 目的构建肺炎衣原体Cpn 0147基因真核表达重组质粒,为进一步研究其与宿主相互作用的分子机制打下基础。方法以Cpn AR39株基因组为模板,以Cpn0147全长编码特异性引物进行PCR扩增;将Cpn0147基因插入至pcDNA3.1+/His/Myc载体,构建pcDNA3.1+/His/Myc-Cpn0147重组质粒,经双酶切及测序鉴定后转染至HeLa细胞中,采用RT-PCR检测重组质粒转染情况,采用免疫荧光法及Western blot检测Cpn0147蛋白在细胞中的表达。试验设pcDNA3.1+/His/Myc载体为阴性对照。结果从CpnAR39株基因组DNA中扩增出Cpn0147基因片段,大小466bp,经双酶切、连接、转化、筛选,得到pcDNA3.1+/His/Myc-Cpn0147重组质粒,序列测定证实与GenBank Cpn AR39株Cpn0147基因序列一致;RT-PCR扩增出Cpn0147基因,与理论大小一致;免疫荧光检测重组质粒转染后HeLa细胞胞浆观察到红色荧光,对照组无荧光;Western blot检测到特异反应条带位于16kd,对照组无此条带。结论成功构建pcDNA3.1+/His/Myc-Cpn0147重组质粒并在真核细胞内表达Cpn0147蛋白,为进一步研究其分子生物学功能奠定了基础。
- 赵霞贾天军李萍贾晓晖李婷程永婷
- 关键词：肺炎衣原体真核载体间接免疫荧光免疫沉淀
- Cpn0147真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达
- 目的：构建Cpn0147 基因真核表达重组质粒,检测其在真核细胞内的表达,为进一步研制肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)核酸疫苗提供前期准备。
- 赵霞贾天军贾晓辉李婷程永婷
- 关键词：肺炎衣原体间接免疫荧光免疫沉淀
- 肺炎衣原体Cpn0147相互作用分子的筛选及初步鉴定
- 肺炎衣原体（Chlamydia pneumonia,Cpn）是一类严格活细胞内寄生的、具有独特生活周期的微生物。虽然肺炎衣原体的致病机制尚不清楚,但包涵体作为肺炎衣原体生物合成和代谢的重要场所,与肺炎衣原体的致病性密切相...
- 赵霞
- 关键词：肺炎衣原体酵母双杂交免疫共沉淀
- 沙眼衣原体质粒蛋白pgp3单克隆抗体制备及鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的:原核表达沙眼衣原体(Ct)质粒分泌性蛋白pgp3,制备其单克隆抗体(mAbs)并鉴定其基本生物学特征。方法:构建pGEX-6p2-pgp3原核表达载体,在大肠杆菌中表达GST-pgp3融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,ELISA法筛选分泌抗pgp3蛋白mAbs的细胞株,对mAbs特异性、型别、类及亚类和效价进行鉴定。结果:GST-pgp3融合蛋白表达成功,且成功筛选出5株稳定分泌mAbs的杂交瘤细胞株,其中4株为分泌抗pgp3mAbs的杂交瘤细胞株(P1B3、P2A1、P2B6、P2C2),mAbs类型为IgG1/κ型,剩余1株为分泌抗GST蛋白的杂交瘤细胞株(P3B4),mAbs类型为IgG2b/κ型。交瘤细胞株P1B3、P2A1、P2B6、P2C2、P3B4培养上清中的mAbs效价分别为1∶6400、1∶3200、1∶12800、1∶6400和1∶6400。结论:成功制备出抗pgp3mAbs,为进一步研究Ct质粒蛋白pgp3功能及为Ct检测方法的建立奠定了基础。
- 贾晓晖周芳赵霞李婷贾天军
- 关键词：沙眼衣原体单克隆抗体
