李瑜
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
- 供职机构：西南大学更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学医药卫生更多>>
- 家蚕丝素重链C末端序列分析、克隆及表达纯化
- 2015年
- 蚕丝主要由丝素和丝胶蛋白组成,其中丝素包括丝素重链,丝素轻链和P25蛋白。丝素重链蛋白分子量大,体外表达困难,难以分离纯化,很难对其结构进行研究。本文通过对丝素重链基因的分析,以家蚕5龄3d后部丝腺cDNA为模板,克隆获得了丝素重链C末端碱基序列,并将其构建到pET-50b(+)表达载体上,转入到大肠杆菌中进行表达,通过镍柱亲和层析纯化获得了丝素重链C末端的融合蛋白,为进一步研究蚕丝蛋白的折叠和组装奠定了研究基础。
- 刘青松李瑜李珍珍刘莉娜王叶菁何华伟
- 关键词：家蚕C末端克隆表达纯化
- 思维导图式复习学案在中考物理复习中的应用研究
- 随着新课程改革的不断推进，“学案”教学模式在全国各地盛行。而“思维导图”作为一种可以将思维可视化的辅助工具，已经广泛应用于各个领域，近几年在教学领域的应用更是流行。本研究尝试将“思维导图”融入复习课“学案”的设计中，编制...
- 李瑜
- 关键词：物理中考思维导图复习学案
- 文献传递
- 一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法
- 本发明涉及一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法，以ATP和腺苷为底物，溴麝香草酚蓝为指示剂，醋酸镁和甘氨酸‑氢氧化钠为缓冲液条件下，与含有腺苷激酶的待测液于614nm条件下检测吸光度。通过利用溴麝香草酚蓝作为pH指示剂...
- 王叶菁李瑜何华伟周海梦赵萍夏庆友
- 家蚕碱性磷酸酶原核表达纯化、结构与活性分析被引量：7
- 2017年
- 【目的】碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)是生物体内磷酸代谢的关键调控酶。不同物种ALP的性质与其生理功能密切相关。研究家蚕(Bombyx mori)ALP(BmALP)的性质和结构,为揭示ALP在昆虫体内的生理功能和调控机制提供依据。【方法】取5龄3 d家蚕中肠组织,利用Trizol法提取总RNA,然后以其为模板反转录合成cDNA。以家蚕中肠cDNA为模板,利用Primer Premier 6.0软件分别设计上下游引物,通过PCR克隆BmALP。将BmALP与不同的表达载体分别进行双酶切,然后连接并转化表达菌株,利用大肠杆菌表达重组蛋白。比较不同表达载体在上清中的表达情况,选择可溶性重组蛋白表达最好的载体,利用Origami B(DE3)细胞大量表达重组蛋白,借助Ni-NTA亲和层析纯化重组的His-Trx-BmALP蛋白,然后加入Prescission蛋白酶在4℃酶切20 h,再次利用Ni-NTA亲和层析去除融合标签His-Trx。利用凝胶过滤层析分析BmALP分子量及其在溶液中的状态,利用圆二色光谱研究BmALP的二级结构及其随温度的变化。通过酶活分析研究BmALP的最适pH、最适温度、Km、结构稳定性及金属离子对其酶学活性的影响。【结果】从家蚕中肠组织提取了总RNA,反转录合成了cDNA,并以该cDNA为模板成功克隆了BmALP。分别构建了BmALP的pSKB2、ppSUMO和pET32M.3C 3种表达载体。表达分析发现,pET32M.3C载体有助于重组的融合蛋白His-Trx-BmALP以可溶性蛋白的形式在细胞裂解后的上清液中表达,然后利用pET32M.3C载体大量表达重组蛋白,并通过Ni-NTA亲和层析纯化获得了可溶性的His-Trx-BmALP。加入Prescission蛋白酶酶切,再次通过Ni-NTA亲和层析去除了融合标签His-Trx。凝胶过滤分析显示BmALP在溶液中形成稳定的二聚体结构。圆二色光谱研究表明BmALP包含有α-螺旋结构,其含量随温度的升高逐渐减少。酶活分析揭示BmALP的最适pH和最适温度分别为11.0和45℃。测定BmALP的Km值为1.40 mmol·L^
- 何华伟王叶菁侯丽李瑜位曙光赵朋蒋文超赵萍
- 关键词：家蚕碱性磷酸酶表达纯化
- 一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法
- 本发明涉及一种快速灵敏地测定腺苷激酶活性的比色法，以ATP和腺苷为底物，溴麝香草酚蓝为指示剂，醋酸镁和甘氨酸‑氢氧化钠为缓冲液条件下，与含有腺苷激酶的待测液于614nm条件下检测吸光度。通过利用溴麝香草酚蓝作为pH指示剂...
- 王叶菁李瑜何华伟周海梦赵萍夏庆友
- 文献传递
