张盼盼
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：华南农业大学兽医学院人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究被引量：1
- 2014年
- 为探索猪α干扰素(poIFN-α)与白介素-18(poIL-18)融合基因的抗病毒效果,本研究通过融合PCR,以质粒pMD18-T/poIFN-α和pMD18-T/poIL-18为模板扩增猪IFNα-IL18(poIFNα-IL18)融合基因。将poIFNα-IL18融合基因插入原核表达载体pET-28b(+)构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL18,转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE分析重组表达蛋白;经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化后,用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上进行抗病毒活性测定。结果表明成功构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL18;SDS-PAGE可检测到分子质量为37ku左右的蛋白条带,与目的蛋白大小相近;经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化,获得高纯度重组蛋白;用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上检测到重组蛋白poIFNα-IL18比单一蛋白poIFN-α和poIL-18的抗病毒活性显著,其抗水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)活性分别为1.03×105、1.28×104及0.11×104 U/mg。
- 张盼盼何静康银峰向斌任涛
- 关键词：融合基因克隆抗病毒活性
- 鸡α干扰素/白细胞介素18基因的融合表达及抗病毒活性研究被引量：6
- 2015年
- 【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具有互补末端的引物,形成具有重叠链的PCR产物,通过PCR产物重叠链的延伸将鸡α干扰素(Chicken interferon alpha,Ch IFN-α)与鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,Ch IL-18)基因构建Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因并克隆入p ET-28a原核表达载体中进行原核表达.通过镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDSPAGE分析、Western-blot鉴定.采用细胞病变抑制法检测r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)及新城疫病毒(NDV)增殖活性.【结果和结论】成功构建并克隆了p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因.融合基因在大肠埃希菌中表达的r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白相对分子质量约为38 000,蛋白经纯化后纯度在90%以上.r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在鸡胚成纤维(CEF)细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和NDV的活性明显高于单一r Ch IFN-α、r Ch IL-18蛋白的抗病毒活性.
- 何静张盼盼孙敏华康银峰谢鹏向斌韩翡谭阳通任涛
- 关键词：鸡白细胞介素18融合PCR抗病毒活性
- 猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究
- 为了探索猪α干扰素(poIFN-α)与白介素-18(poIL-18)融合基因的抗病毒效果,本研究通过融合PCR,以质粒pMD1 8-T/poIFN-α和pMD18-T/poIL-18为模板扩增猪IFNα-IL18(poI...
- 张盼盼何静康银峰向斌任涛
- 关键词：Α干扰素白介素-18原核表达抗病毒活性
- 文献传递
