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正交设计优化黑褐苔草ISSR-PCR反应体系被引量：6: 2014年; 采用正交设计对黑褐苔草(Carex atro fusca)ISSR-PCR反应的Mg^(2+)、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物和DNA模板进行优化,以期建立最佳反应条件并筛选退火温度。结果表明:黑褐苔草20μL ISSR-PCR最佳反应体系为:1.80μmol·L^(-1)Mg^(2+)、0.60 U Taq DNA聚合酶、0.125μmol·L^(-1)dNTP、0.3μmol·L^(-1)Primer和50 ng DNA模板;引物UBC807适宜退火温度为55℃。该体系能在不同个体中扩增出清晰的、稳定性好的条带。; 胡延萍王莉包蕊石琳旭荣花李毅; 关键词：ISSR-PCR 正交设计

西藏嵩草ISSR-PCR反应体系优化研究被引量：3: 2016年; 西藏嵩草(Kobresia tibetica)为莎草科嵩草属多年生草本,根状茎短,秆密集丛生。生于海拔2 550~4 950 m的河滩地、湿润草地、高山灌丛草甸,分布于甘肃、青海、四川西部、西藏东部,其根系发达,喜湿,耐寒,生活力强。西藏嵩草繁殖以营养繁殖为主、有性繁殖为辅,其茎叶茂盛,有较高的营养价值,产草量高,是青藏高原夏、秋两季的主要放牧饲草。该研究以青藏高原高寒沼泽化草甸的建群种和优势种——西藏嵩草为材料,对影响其ISSR-PCR反应的因素(Mg^(2+)、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物和模板DNA)进行5因素4水平的正交试验,以确定西藏嵩草ISSR分析的最佳反应体系,并筛选适宜的ISSR引物及各引物的最佳退火温度。结果表明:建立了适宜于西藏嵩草ISSR-PCR反应的最佳体系为20μL反应液中包括10×PCR buffer 2μL、1.5mmol·L^(-1)Mg^(2+)、1.0 U Taq DNA聚合酶、0.100 mmol·L^(-1)dNTP、0.3μmol·L^(-1)引物和30~40 ng DNA模板;同时从100条ISSR引物中筛选出了扩增结果清晰、稳定的12条引物,各引物的最佳退火温度为48.0~53.2℃(引物不同,其最佳退火温度也不同);西藏嵩草ISSR-PCR适宜的扩增程序为首先预变性94℃ 5min,然后变性94℃ 20s、复性48.0~53.2℃ 1min、延伸72℃ 80s、38个循环,最后72℃延伸6min。体系稳定性验证结果表明,该体系在西藏嵩草其他样品中所得条带清晰且多态性丰富,为后续西藏嵩草的遗传多样性分析和优良牧草种质资源筛选研究奠定了基础。该研究结果对以西藏嵩草为优势种的高寒沼泽化草甸研究及湿地生态系统的修复和保护具有重要意义。; 胡延萍包蕊王莉石琳李毅; 关键词：莎草科 ISSR-PCR 正交设计

华扁穗草ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选被引量：13: 2014年; 利用正交试验设计方法,对影响华扁穗草ISSR-PCR反应中Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物和DNA模板等5个因素进行优化筛选,以期建立最佳反应条件。同时,筛选扩增条带清晰稳定的ISSR引物,经退火温度试验得到各个引物的最佳退火温度。结果表明:华扁穗草20μl ISSR-PCR最佳反应体系包括1.80 mmol/L Mg2+、0.80U Taq DNA聚合酶、0.100mmol/L dNTP、0.6μmol/L引物和20ng DNA模板;筛选出扩增条带清晰稳定的10条引物。体系验证和引物筛选试验表明,其在华扁穗草不同个体中能够扩增出条带清晰、稳定性好的条带,可用于后续华扁穗草遗传多样性分析,为华扁穗草野生资源保护和优良牧草种质资源选育提供理论依据。; 包蕊胡延萍王莉旭荣花李毅; 关键词：ISSR-PCR 正交试验设计引物筛选

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包蕊

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